Содержание

Contact — Википедия

CONTACT — первая[1] российская система денежных переводов и платежей. Основана в 1999 году АКБ «РУССЛАВБАНК» (ЗАО). Позволяет переводить денежные средства в трёх валютах: российские рубли, доллары США, евро. 3 августа 2012 года платёжная система CONTACT зарегистрирована в реестре операторов платежных систем Банка России под номером 0001[2]. В апреле 2013 года Банк России присвоил Платежной системе CONTACT статус социально значимой[3].

Оператор — НКО «Рапида» (до 27 августа 2014 г. — РУССЛАВБАНК).

Платежная система CONTACT входит в тройку крупнейших участников рынка денежных переводов России и стран ближнего зарубежья[какие?]. Партнерами CONTACT являются более 900 российских и международных банков и финансовых организаций, сеть пунктов обслуживания насчитывает свыше 400 000 точек, включая платежные терминалы, более чем в 170 странах. Система CONTACT осуществляет платежи в адрес свыше 2000 юридических лиц – коммерческих банков, торговых предприятий, страховых и туристических компаний и их агентов, интернет-провайдеров, операторов связи и др. Доля системы CONTACT в объёме денежных переводов на отдельных направлениях превышает 50%.

Денежные переводы[править]

Осуществляются в 170 стран мира, валюты — российские рубли, доллары США и евро.

Форматы отправки[править]
  • в отделениях участников Системы — банках, финансовых организациях, банковских платежных агентов
  • из терминалов
  • с мобильных телефонов
  • из интернет-банкинга HandyBank
Форматы выплаты[править]
  • наличными (безадресная выплата в России и странах ближнего зарубежья, во всех остальных странах — с указанием адреса пункта выплаты).
  • зачислением на счета физических и юридических лиц, открытых в любом банке России, Европы, США, Канады, Турции, Индии, Вьетнама.
  • зачислением на аккаунты электронных кошельков (Россия, Кения).
  • зачислением на карты MasterCard, Visa, China UnionPay.

Платежи[править]

Платежи по системе CONTACT осуществляются частными лицами в пользу юридических лиц за услуги и приобретенные товары, по упрощенной процедуре, без открытия счета. Пул партнеров CONTACT по дистанционному сбору платежей включает свыше 2000 компаний, провайдеров и поставщиков услуг.

Виды платежей[править]
  • Пополнение банковских карт
  • Погашение кредитов и микрозаймов (оплата и выдача)
  • Оплата услуг связи, интернета, IP-телефонии, спутникового ТВ
  • Оплата интернет-сервисов (интернет-магазины, интернет-провайдеры, игровые порталы), в т. ч. прохождение идентификации
  • Оплата страховых услуг
  • Оплата туристических услуг, авиа- и ж/д билетов
  • Коммунальные платежи
  • Системы безопасности
  • Благотворительность
  • 1999 год — начало работы системы CONTACT.
  • 2001 год — начало полномасштабной работы в странах постсоветского пространства.
  • 2003 год — CONTACT впервые в России начинает осуществлять денежные переводы в единой европейской валюте — евро.
    • оператор Системы — РУССЛАВБАНК — провел I Международную конференцию «Денежные переводы CONTACT – три года на рынке: достижения, задачи и перспективы». Участники конференции — представители Государственной Думы РФ, Ассоциации Российских Банков, Ассоциации региональных банков России, а также более 60 банков и небанковских организаций России, СНГ и дальнего зарубежья.
    • Министерство Российской Федерации по антимонопольной политике и поддержке предпринимательства приняло решение в отношении «Вестерн Юнион ДП Восток» о нарушении этой организацией требований статьи №6 Федерального закона от 23.06.1999 г. № 117-ФЗ «О защите конкуренции на рынке финансовых услуг». Решение принято на основании жалобы оператора CONTACT — АКБ «РУССЛАВБАНК».
    • расширение сервисов — начало осуществления платежей между физическими и юридическими лица без открытия счета в рамках системы CONTACT.
    • АКБ «РУССЛАВБАНК» была присуждена национальная награда БРЭНД ГОДА/EFFIE 2003 в категории «Финансовые организации. Продукты и услуги» за успешное построение бренда и продвижение системы денежных переводов CONTACT. 
  • 2004 год — появление возможности оплаты мобильной связи сотового оператора МТС.
    • 16 апреля 2004 года в г. Москве состоялась II международная конференция «Денежные переводы CONTACT – год пятый: естественный выбор».
  • 2005 год — начало приёма платежей в Ru-pay, Яндекс.Деньги.
    • CONTACT  впервые  в России начинает осуществлять трансграничные переводы в рублях РФ.
    • 22 апреля 2005 года в г. Москве состоялась III международная конференция системы CONTACT «Денежные переводы: от «золотой лихорадки» к цивилизованному бизнесу».
    • начало ежегодной сертификации системы менеджмента качества оператора системы CONTACT по международному стандарту качества ISO 9001:2008. Сертификационный аудит провела аудиторская компания BVQI (Бюро Веритас Кволити Интернейшнл). 
  • 2006 год — к системе подключился Проминвестбанк — один из банков Украины. Появилась услуга транзакций в США.
  • 2007 год — партнёром системы стала компания Euroenvios (CISA — Consultoria Internacional Casa de Cambio, S.A. de C.V., Мексика). Появилась возможность погашения кредитов, выданных ВТБ24.
  • 2010 год — расширение сервисов — CONTACT-Счет — денежные переводы с зачислением на счета физических лиц, открытых в любом банке России, Европы, США.
    • начало осуществления денежных переводов в безадресном формате на территории РФ и стран ближнего зарубежья.
  • 2011 год — Система CONTACT стала победителем общероссийского конкурса «МАРКА №1 В РОССИИ 2011» в категории «Денежные переводы» по результатам народного голосования
  • 2012 год — расширение сервисов — запуск переводов CONTACT в терминалах QIWI и др., а также с помощью мобильных телефонов операторов Большой тройки.
    • начало работы платежного интернет-сервиса С24.
  • 2014 год — стратегическое партнерство с системой Рапида[4], смена оператора на ООО НКО «Рапида»

«Юнистрим», Western Union и «Контакт» интегрировались. В «Золотой короне» ждут продолжения диалога

Ряд банков Таджикистана заявили, что с 3 декабря перевод денег в Таджикистан и из Таджикистана в другие страны будет проходить через системы «Юнистрим», Western Union и «Контакт», которые решили интегрироваться в недавно созданную национальную систему переводов. Новая система денежных переводов, как ранее сообщил Нацбанк Таджикистана, заработает со вторника.

Решение банков озадачило граждан, которые предпочитают пользоваться услугами системы денежных переводов «Золотая корона». Некоторые из работников банков также говорят, что у «Юнистрима» Western Union и «Контакта», доля денежных переводов в Таджикистан незначительна, основная масса переводов, и прежде всего от трудовых мигрантов, поступает через систему «Золотая корона». Граждане Таджикистана платят при переводе через эти системы большую комиссию, чем через «Золотую корону», отмечают они.

Кирилл Горелов, руководитель пресс-службы платежной системы «Золотая корона» в ответ на письменное обращение Радио Озоди выразил надежду, что с 3 декабря система «Золотая корона» не прекратит свою деятельность в Таджикистане. «Мы надеемся, что диалог Национального банка Таджикистана с платежными системами будет продолжен до принятия решения, которое будет учитывать интересы всех сторон, включая клиентов систем денежных переводов», сказал он.

Официальный представитель системы «Золотой короны» заявил, что платежной системой были удовлетворены все технологические требования НБТ по интеграции с Национальным процессинговым центром в октябре 2019 года. «Практическая реализация интеграции предполагает выполнение технологической части работ на стороне НБТ. Но, кроме технологического аспекта существуют также юридические вопросы, которые, к сожалению, решить оперативно не получается.Дело в том, что подключение к национальному процессингу Таджикистана в соответствие с Порядком, предложенным НБТ, влечет за собой нарушение российского законодательства, и это является серьезной сложностью данного проекта. Именно поэтому все ключевые платежные системы на сегодняшний день не имеют возможности начать работать по новым правилам. Диалог Банка России и Национального банка Таджикистана продолжается, и мы знаем о предложении российского регулятора о возможном переносе запуска проекта на полгода», отметил Кирилл Горелов.

Он также подчеркнул, что «действующие в настоящий момент правила и механизмы работы рынка трансграничных переводов отлаживались годами, показали свою эффективность и не требуют каких-то коренных изменений».

В конце прошлого месяца Нацбанк Таджикистана сообщил, что новая система денежных переводов в стране заработает со вторника, 3 декабря.

«Для участников Национального процессингового центра не предусмотрена какая-либо оплата за участие или осуществление операций. Несмотря на значительные затраты на разработку, внедрение и поддержку этого проекта, Национальный банк Таджикистана в качестве регулятора и в дальнейшем берет на себя все расходы, связанные с данным проектом, тем самым исключив риск повышения комиссий для граждан республики на рынке денежных переводов», — заверил Нацбанк в распространенном 30 ноября сообщении.

Вместе с тем главный финансовый регулятор отметил, что международные системы денежных переводов должны выполнить несколько условий.

До этого системы денежных переводов самостоятельно работали с коммерческими банками Таджикистана.

Основным изменением в области денежных переводов является то, что организации, которые занимаются денежными переводами, должны выполнить несколько условий для того, чтобы работать на рынке в Таджикистане: стать участниками национальной системы переводов, открыть счета в Национальном банке и перевести туда деньги. Только лишь в случае наличия денег на счету этой платежной системы в Таджикистане перевод будет выдан получателям, в противном случае — родные, например, мигранта, денег не получат.

Ответственные лица Нацбанка говорят, что причиной открытия новой системы денежных переводов является создание условий для «быстрого, безопасного и устойчивого перевода денег на безналичной основе».

Ранее специалисты Национальной Ассоциации переводов в России заявили, что создание новой платежной системы в Таджикистане не соответствует стандартам. Мария Михайлова, глава этой Ассоциации заявила Радио Озоди, что требования, которые выдвигает Таджикистан в связи с созданием национальной системы переводов, противоречат нескольким положениям законодательства России и поэтому платёжные системы не смогут их выполнить.«Такой организации системы перевода денег нет ни в одном государстве мира. Конечно, в каждой стране есть свои такие системы, однако, когда речь идёт о трансграничных переводах, порядок их перевода должен быть согласован между обеими сторонами процесса», — отметила тогда Михайлова.

В настоящее время в России работают от 500 тыс. до 1 миллиона жителей Таджикистана, которые отправляют заработанные деньги на родину. Уровень благосостояния каждой четвёртой семьи в Таджикистане зависит от переводов трудовых мигрантов, отмечают эксперты. За девять месяцев 2019 года в Таджикистан поступило переводов от трудовых мигрантов более чем на $2 млрд 490 млн. Около 90% денежных переводов в Таджикистан из России поступают в российских рублях.

Денежные переводы Contact (Контакт) в Воронеже » Банки Воронежа

Система денежных переводов CONTACT позволяет быстро отправить деньги по России, в страны СНГ и дальнего зарубежья. Пункты в Воронеже — 34. Оператором системы является АО КИВИ банк.

Система Контакт осуществляет следующие виды переводов:

1. Денежные переводы между физическими лицами без открытия счета:

2. Уникальная возможность осуществлять денежные переводы разными способами:

Круглосуточная информационная служба +7 (495) 981-4255, 8-800-200-4242

— Обратиться в любой офис банка, осуществляющий переводы по системе Contact;

— Выбрать наиболее удобный для получателя пункт;

— Сообщить операционисту фамилию, имя, отчество получателя перевода;

— Внести в кассу сумму перевода и оплатить комиссию.

Оформление перевода займет несколько минут без утомительной процедуры ручного заполнения клиентом бланка перевода.
Переводы можно осуществлять в рублях РФ, долларах США и евро. Минимальная сумма перевода не предусмотрена.

Граждане России могут перевести иностранную валюту и рубли РФ в эквиваленте не более 5000 долларов США за один день. На иностранных граждан это ограничение не распространяется.

— узнать у отправителя адрес офиса банка, на который он отправил денежные средства, номер перевода, сумму перевода;
— обратиться в указанный офис банка с документом, удостоверяющим личность. Комиссия с получателя перевода не взимается.

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7001788
20-летия октября ул, дом № 90
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7002279
9 января ул, дом № 132
+7 (495) 287-0333

КУРСКПРОМБАНК
Б-р победы, 42
КУРСКПРОМБАНК, ОО ВОРОНЕЖСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ
+7 (473)210-70-72
пн-пт 09:00-16:00; ВЫХ.:сб-вс не работает;

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7004579
Воронеж г, победы б-р, дом № 23, корпус б тц «арена»
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003227
Гк жилая зона тер, героев сибиряков ул, дом № 65, корпус а
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7002751
Кольцовская ул, дом № 35
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7067021
Космонавтов ул, дом № 27г
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7067300
Ленинский пр-кт, дом № 116 с остановочный комплекс «придача»
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003364
Ленинский пр-кт, дом № 133 (номер объекта 66)
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003422
Ленинский пр-кт, дом № 174п
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003380
Машиностроителей ул, дом № 80
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003362
Мира ул, дом № 2
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7067652
Московский пр-кт, дом № 129/1
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003360
Московский пр-кт, дом № 19г
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7007136
Переверткина ул, дом № 7 трц гринн
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003363
Писателя маршака ул, дом № 7в
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003449
Плехановская ул, дом № 33
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003493
Победы б-р, дом № 23б
+7 (495) 287-0333

АО «СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА» — 7003379
Проезд большой саввинский 18
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003447
Революции пр-кт, дом № 36/38
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003489
Революции пр-кт, дом № 48
+7 (495) 287-0333

СДМ-БАНК
Ул. никитская, 49
СДМ-БАНК, ВОРОНЕЖСКИЙ Ф-Л
(+7 4732) 77-14-26
пн-пт 08:00-20:30; сб 10:00-18:30; вс ; ВЫХ.:

ЭКСПЕРТ БАНК
Ул. плехановская, 9
ЭКСПЕРТ БАНК, ОКВКУ УЛ. ПЛЕХАНОВСКАЯ,9
+7 (473) 235-60-87
пн-вс 09:30-20:30; ВЫХ.:

СЕВЕРНЫЙ МОРСКОЙ ПУТЬ
Ул. пушкинская, 1
СЕВЕРНЫЙ МОРСКОЙ ПУТЬ, ОО В Г. ВОРОНЕЖ
(+7473)250-20-53
ВЫХ.:ВС НЕ РАБОТАЕТ;

КУРСКПРОМБАНК
Ул. пушкинская, 26
КУРСКПРОМБАНК, ОО ПУШКИНСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ
(+7 4732) 77-00-92
09:00-16:00 ВЫХ.:не работает

СКБ-БАНК
Ул. пушкинская, 7
СКБ-БАНК, ОО ВОРОНЕЖСКИЙ Ф-ЛА РЯЗАНСКИЙ
(+7 4732) 55-03-06; 55-06-76
пн-пт 09:00-19:00; сб 10:00-16:00; ВЫХ.:вс не работает;

АКИБАНК
Ул. станкевича, 7
АКИБАНК, Ф-Л В Г.ВОРОНЕЖЕ
( + 7 473) 220-59-33
пн-пт 09:00-18:00; ВЫХ.:сб-вс не работает;

БАНК ВТБ (АРМЕНИЯ)
Ул. челюскинцев, 149
БАНК ВТБ (АРМЕНИЯ), ЧЕРЕЗ СИСТЕМУ БЭСТ
(473) 206-52-82

БАНК ВОРОНЕЖ
Ул. челюскинцев, 149
+7 (473) 206-52-82
пн-сб 09:00-20:00 обед:13:00-13:30; вс 10:00-16:30 ВЫХ.:

БАНК ВОРОНЕЖ
Ул. челюскинцев, 149
+7 (473) 206-52-82
ПН-ПТ 09:00-20:00 ОБЕД:13:00-13:30 ВЫХ.:СБ 09:00-20:00; ВС 10:00-16:30 ОБЕД:13:00-13:30;

ЭКСПЕРТ БАНК
Ул.театральная , 32
ЭКСПЕРТ БАНК, ККО Г.ВОРОНЕЖ
+7 (473) 255 30 71
пн-пт 09:00-18:00; ВЫХ.:сб-вс не работает;

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7002208
Фридриха энгельса ул, дом № 64, корпус а тц атмосфера, 1 этаж, вход со стороны ул. куколкина
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003381
Чебышева ул, дом № 1
+7 (495) 287-0333

АО СВЯЗНОЙ ЛОГИСТИКА — 7003800
Шишкова ул, дом № 72
+7 (495) 287-0333

Что такое Контакт (Contact): система мгновенных переводов денег

Потребность в совершении денежных переводов не теряет своей актуальности. При помощи системы Contact можно совершить мгновенный перевод по России и за ее пределами. Более подробно о том, что такое Контакт, и как он работает, будет рассказано на сервисе Бробанк.ру.

В первую очередь, Contact — это платежная система, история которой берет начало с 1999 года. Это российский продукт, главным акционером которого является группа компаний QIWI.

Одновременно с этим, Контакт — первая российская система денежных переводов. За организационную, информационную, техническую функции которой отвечать КИВИ Банк (АО). Помимо этого, по одному расчетному центру работает в банках ВТБ и ФК ОТКРЫТИЕ.

Это одна из крупнейших российских систем денежных переводов. Также Контакт удерживает хорошие позиции в странах ближнего зарубежья. Сегодня международная сеть насчитывает более 500 тыс точек обслуживания. Постоянными партнерами являются более 1000 финансовых организаций по РФ и остальному миру.

Изначально основной и единственной услугой был перевод наличными. Находясь в разных частях страны, два человека могли совершать между собой быстрые и надежные переводы в наличном виде. На заре развития интернет-банкинга, такая услуга в пределах одного государства была крайне востребованной.

Со временем сервис развивался, и в связи с этим, претерпел некоторые изменения. Основная услуга по-прежнему доступна клиентам. Также здесь доступны следующие продукты и опции:

  • Онлайн-переводы — мгновенный платеж с карты на карту.
  • Оплата услуг — кредиты и займы, услуги, мобильная связь, страхование, интернет-сервисы, государственные услуги, благотворительность.
  • Идентификация — Яндекс.Деньги, QIWI, Rapida, MoneyMan, Миг Кредит, и прочее.

Также через Contact пользователи покупают авиа и ж/д билеты, бронируют отели, пополняют банковские счета. В подавляющем большинстве случаев за оказываемые услуги клиенты уплачивают комиссии, указанную в тарифной сетке.

Преимуществом предложения является относительно небольшая комиссия. К примеру, у отправителя и получателя есть банковские карты разных банков. В этом случае комиссия может составлять достаточно ощутимую для отправителя сумму.

Ситуация усугубляется, когда у получателя нет банковской карты, либо в настоящий момент он постоянно проживает в другом государстве. Перевод по системе Contact — наиболее оптимальный вариант в каждом из указанных случаев. На примере будет рассмотрен перевод в наличной форме.

Оформление операции в офисе

Первое — потребуется найти ближайший пункт обслуживания клиентов. Такие пункты могут работать автономно, либо располагаться в офисах кредитных и прочих финансовых организаций. После того, как ближайший пункт обслуживания будет найден, отправитель совершает следующие действия:

  1. Уточняет паспортные данные получателя (обязательно).
  2. Осуществляет визит в офис — с собой необходимо иметь паспорт и сумму перевода в наличном виде.
  3. Заполняет документы для совершения операции — небольшая бумажная форма, в которую вписываются паспортные данные отправителя и получателя перевода.
  4. Передает кассиру заполненную квитанцию и сумму перевода.
  5. Получает документальное подтверждение о приеме платежа в обработку.

После принятия документов от отправителя, и внесения платежа в базу, кассир выдаст уникальный номер перевода. Это случайная совокупность цифр и латинских букв, которая служит основным подтверждением для идентификации получателя денег.

Как получить перевод по системе Contact

Обработка платежа занимает не более 15 минут. Спустя этот срок адресат перевода может получить деньги в ближайшем офисе, работающем с системой денежных переводов Контакт.

Для этого потребуется:

  1. Уточнить у отправителя номер перевода.
  2. Отравиться в пункт обслуживания с паспортом.
  3. Предъявить кассиру паспорт и озвучить номер перевода (уникальный код).
  4. Подписать платежные документы.
  5. Получить сумму перевода в кассе офиса.

Именно по такому алгоритму работает схема. География совершения переводов, только в пределах Российской Федерации, крайне обширна. Пункты обслуживания действуют практически в каждом городе страны.

Главная особенность — комиссия уплачивается только отправителем денег. Адресат перевода получает ту сумму, которая указана в квитанции. Второе — указывать адрес получения денежных средств — не обязательно.

Дело в том, что после внесения денег отправителем, они размещаются на счете системы. Получить их можно в любой точке, где работает Contact. То есть, к определенному региону нет привязки. Главное, чтобы у получателя был при себе паспорт и уникальный код.

Без паспорта получить деньги не получится, даже при наличии уникального кода. По действующему законодательству РФ, обе стороны совершения операции по переводу денежных средств обязательно должны быть идентифицированными. Это касается и отправителя перевода.

Об авторе

Ирина Русанова — высшее образование в Международном Восточно-Европейском Университете по направлению «Банковское дело». С отличием окончила Российский экономический институт имени Г.В. Плеханова по профилю «Финансы и кредит». Десятилетний опыт работы в ведущих банках России: Альфа-Банк, Ренессанс Кредит, Хоум Кредит Банк, Дельта Кредит, АТБ, Связной (закрылся). Является аналитиком и экспертом сервиса Бробанк по банковской деятельности и финансовой стабильности. [email protected]

Эта статья полезная?


ДаНет

Помогите нам узнать насколько эта статья помогла вам. Если чего-то не хватает или информация не точная, пожалуйста, сообщите об этом ниже в комментариях или напишите нам на почту [email protected].

Комментарии: 13



Денежные переводы, перевод денежных средств

Для максимально качественного и быстрого обслуживания частных клиентов любые виды денежных переводов: с открытием и без открытия счета, в национальной и иностранной валюте, в пользу физических и юридических лиц, по территории Украины и за рубеж.

АО «СБЕРБАНК» предлагает следующие виды переводов:

Без открытия счета физические лица могут получать/отправлять переводы в гривне и иностранной валюте (доллары США, евро, российские рубли, английские фунты) через системы:

 

Денежные переводы — популярная форма перевода денег в банковской системе. В структурной схеме денежного перевода всегда присутствуют: отправитель, получатель и посредник, который получает за свои услуги определенную плату.

Денежные переводы различаются между собой способом перевода, скоростью и размером комиссии за услуги посредников.

Перевод денежных средств может осуществляться банками, почтой, или частными курьерами. Также денежные переводы можно разделить на внутренние (в пределах одного государства) и международные (за границу). В случае международного денежного перевода, выплаты могут проводиться в иностранной валюте, а также в местной — по действующему курсу обмена.

С началом применения банковских карт также появилась еще одна возможность для перевода денег — с карты на карту одного или разных пользователей. При этом, с развитием сети интернет, денежные переводы Онлайн стали доступны для большинства пользователей. Для совершения такого перевода достаточно иметь карту (отправителю средств и получателю).

В Сбербанке Вы можете воспользоваться такими системами денежных переводов как Western Union, MoneyGram, переводы Swift или денежные переводы с карты на карту.

Каждая из вышеперечисленных систем является надежной и зарекомендовавшей себя многими положительными отзывами клиентов. Их неоспоримым преимуществом является скорость и удобство совершения операций по переводу средств.

Ознакомиться с тарифами по переводу в различных системах перевода Вы можете на нашем сайте.

Контактный путь свертывания и воспаления

Реферат

Контактная система, также называемая системой калликреин-кинин плазмы, состоит из трех сериновых протеиназ: факторов свертывания крови XII (FXII) и XI (FXI) и прекалликреина плазмы (PK), и неферментативный кофактор высокомолекулярный кининоген (HK). Эта система активно исследуется более 50 лет. Компоненты этой системы и их взаимодействия были выяснены в экспериментах in vitro, что указывает на то, что эта система протромботическая, активируя внутренний путь, и провоспалительная, производя биоактивный пептид брадикинин.Хотя активация контактной системы связана с различными типами заболеваний человека, лишь в нескольких случаях ее роль четко определена. За последние 10 лет наше понимание контактной системы, особенно ее биологии и (патофизиологии), значительно расширилось благодаря исследованиям с использованием генно-модифицированных животных моделей. В этом обзоре мы опишем обновленный взгляд на контактную систему как на критический (пато) физиологический посредник коагуляции и воспаления.

Ключевые слова: Контактная система, коагуляция, воспаление, тромбоциты, инфекция, аутоиммунное заболевание, биология сосудов

Контактная система — это группа белков плазмы, которая реагирует на присутствие (пато) физиологических материалов и патогенов инвазии.Эта система состоит из трех сериновых протеиназ: факторов свертывания крови XII (FXII) и XI (FXI), прекалликреина плазмы (PK) и неферментативного кофактора высокомолекулярного кининогена (HK) [1]. Эти белки плазмы были сгруппированы вместе как контактная система, поскольку они требовали контакта с искусственными отрицательно заряженными поверхностями для активации зимогена in vitro. При активации этой системы он может вызвать свертывание крови и отвечает за образование провоспалительных продуктов, таких как брадикинин.Эта система также называется системой калликреин-кинин плазмы и функционирует при некоторых воспалительных состояниях, таких как ревматоидный артрит (РА) и воспалительное заболевание кишечника (ВЗК) [2].

Исследования их биохимических и биологических свойств показали, что белки контактной системы взаимодействуют с рядом физиологических и патофизиологических систем. Биологическая роль контактной системы заключается в инициировании и участии в патофизиологических ответах на повреждение, в основном в процессах коагуляции и воспаления.Было показано, что активация этой системы вовлечена в широкий спектр болезненных состояний человека, включая сепсис и эндотоксемию, ОРДС, ДВС, брюшной тиф, пятнистую лихорадку Скалистых гор, болезнь Крона, трансфузионные реакции, отторжение почечного аллотрансплантата, нефротический синдром и т. Д. наследственный ангионевротический отек и при экстракорпоральном кровообращении [1]. В моделях сепсиса, артрита и энтероколита на животных ингибиторы ферментов контактных факторов модулируют гипотензию, воспаление или увеличивают выживаемость, что предполагает участие этой системы в защите хозяина и врожденном иммунитете [3].Контактная система эволюционно консервативна (дефицит контактных факторов очень редок), и активация контактной системы была связана с различными типами заболеваний человека, однако в настоящее время все еще остается загадкой, какова ее физиологическая функция у человека. За последние 10 лет, благодаря исследованиям с использованием генно-модифицированных моделей животных, наше понимание контактной системы, особенно ее физиологии и патофизиологии, значительно расширилось. В этом обзоре мы сначала опишем молекулярные и клеточные механизмы, которые управляют активацией контакта на нефизиологических материалах.Далее мы суммируем ключи, связывающие контактную систему с коагуляцией и воспалением при здоровье и болезни, и обсудим недавние результаты фундаментальных и клинических исследований о вкладе контактной системы в сердечно-сосудистые, инфекционные, воспалительные и аутоиммунные заболевания, а также их потенциал быть мишенью для лечения как тромботических, так и воспалительных заболеваний.

Активация контактной системы на основе сборки

В плазме циркулирует около 75% ПК, нековалентно связанного с HK в соотношении 1: 1, в то время как остальные ПК циркулируют свободно.Помимо PK, HK образует гетеродимер с фактором XI, и PK, и FXI связаны с поверхностью через HK и имеют общий консервативный сайт связывания HK. Неферментный кофактор HK отвечает за связывание с отрицательно заряженными поверхностями и сборку этих белков, образуя комплекс [1]. Как только FXII связывается с поверхностями, он претерпевает конформационные изменения, чтобы стать автоактивируемым (автоактивация), активированный FXIIa катализирует активацию PK. Между тем, FXII становится все более восприимчивым к расщеплению плазменным калликреином (PK) и сам активируется FXII (FXIIa).Активированный калликреин плазмы превращает FXII в FXIIa (трансактивация), тем самым образуя петлю обратной связи активации, которая преодолевает инактивацию калликреина и FXII их противоположными ингибиторами, такими как ингибитор C1-эстеразы. В отсутствие фактора XII прекалликреин не активируется на искусственной поверхности. Именно из-за этого открытия эта система называется контактной системой. На ранней фазе контактной активации способность независимого связывания HK с поверхностью ограничена.Однако после активации PK и FXII одноцепочечный HK может расщепляться на двухцепочечный HKa и высвобождать брадикинин. По сравнению с HK, HKa обладает большей способностью связываться с поверхностями и провоспалительным действием [4]. Более того, фактор XI активируется в комплексе с HK и FXII, в результате чего инициируется внутренний путь коагуляции. Вся указанная выше информация собрана из наблюдений in vitro, то, как контактная система активируется in vivo, не было хорошо охарактеризовано.

Молекулярно-опосредованная сборка и активация контактной системы

Контактная система в основном известна своей активацией отрицательно заряженными молекулярными поверхностями, такими как каолин, стекло, диоксид кремния, эллаговая кислота, сульфат декстрана, гиперсульфатированный хондроитинсульфат и наночастицы [1] .Хотя это множественные нефизиологические контактные активаторы, эта реакция формирует основу для анализа активированного частичного тромбопластинового времени свертывания (АЧТВ). Этот анализ обычно используется для оценки дефектов внутреннего пути коагуляции, таких как гемофилия A и B. Недавние исследования выявили эндогенные активаторы контактной системы, такие как полифосфат, коллаген, неправильно свернутые белковые агрегаты, липополисахариды (LPS), гликозаминогликаны и нуклеиновые кислоты [5]. Совсем недавно мы сообщили, что фосфатидилсерин может также служить активатором контактной системы in vivo [4].

Полифосфат

Полифосфат был первоначально идентифицирован в клетках немлекопитающих, но позже было показано, что он обогащен плотными тромбоцитами гранулами [6]. Полифосфат может высвобождаться из активированных тромбоцитов и может управлять активацией контактной системы [6]. Помимо тромбоцитов, бактерии, такие как Escherichia coli , Vibrio cholerae , Corynebacterium diphtheriae , Haemophilus influenzae , содержат большое количество полифосфата, которое больше, чем у тромбоцитов, и содержит> 300 фосфатных единиц [7].Бактериальный полифосфат активирует FXII и инициирует выработку брадикинина, который может способствовать хемотаксису лейкоцитов, болевым ощущениям и утечке сосудов [8].

Неправильно свернутые белковые агрегаты

Неправильно свернутые белковые агрегаты являются белком-активатором контактной системы [9]. Исследование in vitro показало, что различные агрегаты неправильно свернутого белка, такие как агрегаты β-амилоидного пептида, непосредственно активируют FXII, что приводит к активации калликреина [9]. Соответственно, брадикинин вырабатывается в спинномозговой жидкости пациентов с болезнью Альцгеймера.У пациентов, страдающих системным амилоидозом, заболеванием, при котором циркулируют и откладываются агрегаты легких цепей иммуноглобулина, также наблюдается активация системы калликреин-кинин, вызванная FXII. Связывание FXII с неправильно свернутыми белковыми агрегатами отличается тем, что его связывание с отрицательно заряженными поверхностями опосредуется доменом фибронектина типа 1, а его связывание с агрегатами осуществляется через фибронектин типа 2, второй EGF и домены крингла.

Фосфатидилсерин (PS)

Недавно мы сообщили, что в очищенных системах HK специфически связывается с липосомами PS и расщепляется в присутствии PK и XII [4].Узнавая PS, HK предпочтительно связывается с апоптотическими клетками, но не с жизнеспособными клетками, что опосредует фагоцитоз апоптотических клеток (эффероцитоз). Связывание HK с апоптотическими клетками вызывает его быстрое расщепление до двухцепочечной формы HK (HKa) и брадикинина. И H-цепь, и L-цепь HKa связаны с липосомами PS и апоптотическими клетками [4].

Коллаген

Фактор XII связывается с фибриллами коллагена различного происхождения, имеющими отрицательный заряд [10]. При воздействии плазмы коллаген I типа вызывает образование тромбина и свертывание плазмы, что зависит от активности FXII [10].Кроме того, PK также связывается с коллагеном, тем самым ингибируя индуцированную коллагеном агрегацию тромбоцитов [11].

Опосредованная клеточной мембраной сборка и активация контактной системы

Физиологическая отрицательно заряженная поверхность для активации контактной системы фактически представляет собой сборку этих белков на биологических поверхностях, то есть клеточных мембранах [1]. Специфические взаимодействия с биологическими мембранами эндотелиальных клеток, тромбоцитов, нейтрофилов и моноцитов указывают на то, что сборка и активация этой системы происходит в физиологической среде.Белки контактной системы могут собираться на клеточной мембране посредством связывания со своими рецепторами и гликозаминогликанами (ГАГ) протеогликанов, включая гепарансульфат (HS) и хондроитинсульфат (CS) [12,13]. Детальные исследования белков контактной системы, взаимодействующих с клетками, привели к пониманию того, насколько эта система физиологически активна. Опорным белком для сборки контактной системы на клеточных мембранах является HK [14]. На самом деле HK имеет три домена, которые соответствуют предполагаемому рецептору (рецепторам) кининогена на эндотелиальных клетках.Было показано, что три рецептора опосредуют связывание HK на поверхности клетки: uPAR, gC1qR и цитокератин-1 [1]. Мы сообщали, что HK связывается с uPAR через свой D5 в мембранных рафтах эндотелиальных клеток [15], а D3 и D5 HK стимулируют моноциты через uPAR и Mac1 для продукции цитокинов и хемокинов [16]. Помимо здоровых клеток, апоптотические клетки могут также обеспечивать поверхность для сборки и активации контактной системы [4]. Недавно мы сообщили, что HK связывает uPAR на моноцитах / макрофагах и фосфатидилсерин на апоптотических клетках, что приводит к поглощению апоптотических клеток и сборке и активации контактной системы на апоптотической клеточной поверхности [4].Поскольку эффероцитоз необходим для регуляции иммунных ответов и тканевого гомеостаза, участие HK в распознавании и связывании апоптотических клеток показывает новую роль контактной системы в «апоптотическом» врожденном иммунитете. GAG на клеточной поверхности открывают огромное количество специфических сайтов связывания для контактной системы. HK и FXII связываются с высоким сродством (K D ≤ 144 нМ) с эндотелиальными GAG в присутствии ионов цинка, тем самым модулируя образование BK, управляемое контактной системой [17].

Помимо эукариоцитов, прокариоциты, такие как бактерии и вирусы, также обеспечивают поверхности для сборки и активации контактной системы.Белки контактной системы связываются как с грамотрицательными бактериями, такими как Escherichia coli [18], так и с грамположительными бактериями, такими как Streptococcus pyogenes [19]. И D3, и D5 H HK участвуют в специфическом связывании с бактериями. Взаимодействие HK с бактериями напоминает связывание белков с эндотелиальными клетками, что приводит к активации контактной системы. Вирус, такой как вирус простого герпеса типа 1 (HSV1), также связан с контактной системой [20]. HSV1 связывается с FXII и опосредует его активацию в присутствии PK [20].

Активация контактной системы запускает как коагулянтный, так и воспалительный пути, а также инициирует протромботические и провоспалительные реакции через внутренний путь коагуляции (образование тромбина) и систему калликреин-кинин (производство кининов), соответственно. Как описано выше, биохимия контактной системы in vitro хорошо изучена за последние пять десятилетий, недавние исследования с использованием генетических манипуляций на мышах и изучение генетической изменчивости человека в факторах контактной системы позволили признать (пато) физиологическую роль контактная система в здоровье и в болезни.

Контактная система в пути коагуляции: активация внутреннего пути

Артериальное или венозное кровообращение может подвергаться тромбозу, вызывая инфаркт миокарда и инсульт или тромбоэмболию легочной артерии соответственно, что является основной причиной смерти в мире. Коагуляция необходима не только для поддержания целостности системы кровообращения (гемостаз), но также способствует образованию сгустка крови, ведущему к ишемии и повреждению тканей (тромбозу). Тромбоз, вызванный системой свертывания плазмы, приводит к образованию фибрина.Формирование фибрина инициируется двумя различными путями: воздействием крови на поврежденные стенки сосудов (внешние) или на поверхности активации крови (внутренние). При сборке на активирующей поверхности контактная система (FXII, PK и HK) активируется и стимулирует внутренний путь коагуляции путем активации FXI. Кроме того, внутренний путь коагуляции, опосредованный контактной системой, может пересекаться с внешним путем коагуляции. Например, контактная система коагуляции может быть инициирована либо контактной поверхностью в плазме у женщин на поздних сроках беременности, либо мицеллярным стеаратом, добавленным в плазму.С любой из контактных поверхностей увеличение коагулянтной активности фактора VII (VIIc) и FXIIa зависело от эффективности контактной поверхности [21]. Индуцированный стеаратом VIIc ингибировался на 60-70% в присутствии моноклональных антител против фактора IX и отсутствовал в плазме с дефицитом FXII. Добавление очищенного человеческого фактора XII к этой плазме восстановило увеличение VIIc. В FIX-дефицитной или FXI-дефицитной плазме индуцированное стеаратом увеличение VIIc было значительно снижено, что указывает на то, что в присутствии контактной поверхности активация контактной системы приводит к активации FVII [21].В другом исследовании in vitro, в котором FXI-зависимый эффект на образование сгустка, инициированный тканевым фактором, FXI увеличивал активацию протромбина и скорость образования фибрина, выявляя роль фактора XI в распространении роста сгустка после инициации, зависимой от тканевого фактора [22 ].

В отличие от наблюдений за аномалиями внешних путей, клинические исследования показали, что у людей с дефицитом какого-либо фактора контактной системы нет дефекта кровотечения. Например, у г-жи Мэйм Уильямс отсутствовали обе формы кининогена.Как и г-н Хагеман (с дефицитом FXII), она умерла от тромбоэмболии легочной артерии [23], демонстрируя, что пациенты с дефицитом контактного фактора не защищены от тромботических расстройств. Хотя исследование уникальных пациентов с дефицитом или контактными факторами может способствовать нашему пониманию их функции, дефицит контактной системы редко встречается у людей, и ни одно контролируемое крупное клиническое исследование не коррелировало между дефицитом контактной системы и патофизиологией, такой как тромботическая / геморрагическая болезнь. Вместо этого роль контактной системы в тромбозе недавно была улучшена исследованиями с использованием моделей на животных.Хотя считалось, что контактная система не имеет значения для гемостаза, исследования на животных моделях показывают, что образование тромба нарушено у мышей с дефицитом. Таким образом, контактная система играет решающую роль в патологическом тромбозе при повреждении артерий и вен.

Фенотип дефицита контактного фактора при артериальном тромбозе

Дефицит FXII

Renne et al. являются первыми, кто сообщил, что у мышей с дефицитом FXII был дефект в образовании тромбов, вызванный различными методами травм, демонстрируя решающую роль FXII в образовании фибрина in vivo [24].Восстановление FXII нулевых мышей с человеческим FXII восстановило пролонгированное aPTT, обнаруженное у нелеченных животных, и полностью восстановило способность инфузированных животных к образованию тромбов, предполагая аналогичную роль FXII у мышей и людей [24]. Действительно, контактная система очень консервативна среди видов млекопитающих. Кроме того, мыши с дефицитом гена FXII защищены от церебральной ишемии, связанной со сниженным образованием фибрина в микрососудистом русле ишемической ткани, что согласуется с важной ролью FXII в образовании тромба при тромбоэмболической болезни [25].Мыши, лишенные FXI, аналогичным образом защищены от образования окклюзионного фибрина [26]. Таким образом, контактная система имеет решающее значение для патологического свертывания крови через активацию внутреннего пути [27]. В отличие от FXII и других белков контактной системы, дефицит FXI и нижестоящих FVIII и FIX приводит к легкому или тяжелому нарушению свертываемости крови, предполагая, что внутренний путь способствует амплификации тромбина после начальной стимуляции внешнего пути свертывания крови тканевым фактором. .

PK дефицит

PK представляет собой многофункциональную сериновую протеазу, участвующую в контактной активации коагуляции.Подобно дефициту у людей, PK-дефицитные мыши выявляли повышенное АЧТВ без увеличения времени кровотечения [28]. PK-дефицитные мыши были полностью защищены от окклюзии при индуцированном FeCl3 артериальном тромбозе по сравнению с гетерозиготами и однопометниками дикого типа [28], демонстрируя, что делеция прекалликреина в плазме предотвращает образование окклюзионных тромбов. Соответственно, лечение мышей антисмысловым олигонуклеотидом прекалликреина (ASO) может иметь положительный терапевтический индекс [29].

HK дефицит

HK играет важную роль в сборке контактной системы.В то время как ген кининогена человека имеет единственную копию, геном мыши содержит 2 гомологичных гена кининогена, Kng1 и Kng2, которые экспрессируются тканеспецифическим образом [20]. Меркулов и др. обнаружили, что mKng1 экспрессируется главным образом в печени, у мышей с дефицитом Kng1 отсутствовали плазменные HK и низкомолекулярный кининоген (LK), а также Delta-HK-D5, изоформа кининогена, лишенная домена 5 Kng1 [30]. Подобно мышам с дефицитом FXII, мыши Kng1 — / — демонстрируют значительно увеличенное время до окклюзии сонной артерии после введения Rose Bengal и лазерно-индуцированного повреждения артерии [30], указывая тем самым, что HK в плазме вносит вклад в артериальный тромбоз у мышей.У мышей Kng1 — / — , подвергшихся временной окклюзии средней мозговой артерии, развились значительно меньшие инфаркты головного мозга и менее тяжелые неврологические нарушения без увеличения инфаркта-ассоциированного кровоизлияния [31]. Этот защитный эффект сохранялся за счет уменьшения тромбообразования в ишемизированных сосудах и улучшения мозгового кровотока [31]. Поскольку Kng1 дефицитные мыши также обнаруживают менее серьезные повреждения гематоэнцефалического барьера и образование отеков, а местная воспалительная реакция снижается по сравнению с контролем, Kng1, по-видимому, играет важную роль в образовании патологических тромбов и воспалении, но незаменим для гемостаза [31].

Когда происходит повреждение артерии, активированные эндотелиальные клетки и открытые субэндотелиальные материалы, такие как коллаген, могут служить поверхностями для сборки и активации контактной системы, что приводит к генерации тромбина под действием FXIa и последующей активации тромбоцитов. Активированные тромбоциты могут дополнительно связывать факторы контактной системы, такие как FXII, опосредуя тромбоцит-зависимую прокоагулянтную активность [32]. Кроме того, тромбоциты выделяют полифосфат активатора FXII, что приводит к активации контактной системы и продукции фибрина на активированных поверхностях тромбоцитов в развивающемся тромбе.С другой стороны, FXIIa оказывает прямое действие на рецептор, активируемый протеазой, у мышей, обеспечивая ключ к активации тромбоцитов, управляемой контактной системой.

Венозный тромбоз

Тромбоз глубоких вен (ТГВ), который может вызвать тромбоэмболию легочной артерии, является опасным для жизни состоянием, но его механизм остается гораздо менее понятным, чем артериальный тромбоз. Генетические и фармацевтические исследования также демонстрируют, что контактная система играет решающую роль в венозном тромбозе. В модели повреждения FeCl3 у мышей с дефицитом PK наблюдается снижение тромбоза венозного тромбоза на 50% [28].Селективный нокдаун прекалликреина у мышей с использованием технологии антисмысловых олигонуклеотидов (ASO) также приводит к антитромботическому фенотипу в модели тромбоза нижней полой вены, вызванной стенозом [29]. Точно так же истощение FXII или XI у кроликов с использованием ASO значительно ослабляет катетер-индуцированный венозный тромбоз [33]. фон Брюль и др. обнаружили, что генетическое устранение FXII обеспечивает защиту от амплификации ТГВ у мышей [34]. В их модели тромборезидентные нейтрофилы связывают FXII и поддерживают его активацию за счет высвобождения внеклеточных ловушек нейтрофилов (NET) [35], что необходимо для последующего распространения DVT [34].Когда полиР вводится внутривенно, он активирует FXII и приводит к летальной эмболии легочной артерии у мышей дикого типа, что предотвращается либо дефицитом FXII, либо ингибитором FXII, что указывает на критическую роль контактной системы [6,36]. Рекомбинантный ингибитор контактной фазы Ixodes ricinus (Ir-CPI) представляет собой белок типа Kunitz, экспрессируемый слюнными железами клеща Ixodes ricinus, специфически взаимодействует с активированными человеческими FXIIa, FXIa и калликреином и продлевает АЧТВ in vitro [36]. Внутривенное введение Ir-CPI крысам и мышам вызывало дозозависимое снижение образования венозных тромбов [36].

Учитывая результаты, полученные на моделях мышей, которые показывают, что мыши с дефицитом белков контактной системы имеют нормальный гемостаз, как и их человеческие аналоги, образование фибрина, управляемое контактной системой, особенно важно для образования патологических тромбов, но не влияет на физиологический гемостаз. Это повышает вероятность того, что контактная система нацеливания может служить стратегией для профилактики или лечения патологического тромбоза, который имеет меньший риск тяжелого кровотечения, чем используемые в настоящее время антикоагулянты [33] . Например, избирательное истощение фактора XII антисмысловыми олигонуклеотидами ослабляет тромбоз катетера у кроликов [33]. Ингибирование активации FXII с помощью пептидного ингибитора PCK у мышей также обеспечивает защиту от церебральной ишемии, не вызывая чрезмерного кровотечения в месте хирургической травмы. Более того, рекомбинантный ингибитор на основе инфестина-4, который специфически воздействует на активность FXII, обеспечивает защиту от церебральной ишемии в экспериментальных моделях инсульта, хотя и не влияет на гемостатическую способность у мышей, получавших ингибитор [37].

Фибринолиз

Помимо активации внутреннего пути коагуляции, одно из последующих событий контактной системы включает фибринолиз. Активацию плазминогена in vivo можно воспроизводимо исследовать путем кратковременной инфузии дезамино-D-аргинина вазопрессина (DDAVP). Леви и др. обнаружили, что образование плазмина под действием DDAVP-стимула, что отражается циркулирующими комплексами плазмин-a2-антиплазмин, было ниже у пациентов с дефицитом FXII, чем у здоровых добровольцев, предполагая, что активация контактной системы произошла после инфузии DDAVP у здоровых добровольцев [38].Активность активации плазминогена в нормальной плазме после инфузии DDAVP была только частично заблокирована (на две трети) специфическими антителами к активатору плазминогена тканевого типа (t-PA) и PA урокиназного типа. Остаточная активность могла быть подавлена ​​ингибирующим моноклональным антителом против FXII и отсутствовала у пациентов с дефицитом FXII [38]. Таким образом, активация контактной системы способствует фибринолизу. Нарушение фибринолитической активности у пациентов с дефицитом FXII может объяснить возникновение тромбоэмболических осложнений у этих пациентов.Пациенты с дефицитом фактора XI страдают аномальным кровотечением. У еврейских пробандов-ашкенази с тяжелым дефицитом FXI была повышенная доля эпизодов кровотечений после операций на участках с усиленным локальным фибринолизом, таких как мочевыводящие пути, или во время удаления зубов, что позволяет предположить, что FXI играет роль в подавлении фибринолиза [39 ]. В соответствии с этой гипотезой системное включение антител против фактора XI привело к почти двукратному увеличению эндогенного фибринолиза по сравнению с контрольным антителом, что указывает на новую роль внутреннего пути коагуляции [40].В статической модели коагуляции in vitro, в которой свертывание крови инициируется в рекальцифицированной цитратной плазме тканевым фактором, нанесенным на дно микротитровальных планшетов, когда образовывались более крупные сгустки (200–300 мкл плазмы), FXI не только увеличивал активацию протромбина и фибрина. скорость образования, но также ингибирует фибринолиз. Таким образом, помимо усиления коагуляции, инициированной тканевым фактором, FXI ингибирует фибринолиз для стабилизации образовавшегося сгустка [22].

Контактная система при воспалении

Контактная система широко участвует в воспалительной реакции и аутоиммунных заболеваниях.В течение долгого времени было известно, что активация этой системы производит мощный провоспалительный нонапептид брадикинин (BK; Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg) посредством расщепления HK посредством PK. Таким образом, контактная система была также названа плазменной калликреин-кининовой системой (ККС). Брадикинин и родственные кинины действуют на два типа рецепторов, обозначенных как B1R и B2R, оба из которых являются рецепторами, связанными с G-белком. B2R конститутивно экспрессируется в различных сосудистых и несосудистых клетках и быстро десенсибилизируется.B1R индуцируется воспалительными цитокинами и устойчив к десенсибилизации. Эти рецепторы брадикинина участвуют в регуляции различных физиологических и патологических процессов. Способ действия кининов основан на взаимодействиях между кининами и их специфическими рецепторами, что может привести к активации нескольких систем вторичных мессенджеров. Во время воспалительных реакций активированные лейкоциты и эндотелиальные клетки экспрессируют B1R, который чувствителен к пептидам, производным от брадикинина. Когда кинин B2R активируется, проницаемость сосудов увеличивается, в том числе за счет NO-индуцированного расслабления периваскулярных гладкомышечных клеток.Имеются данные о том, что существует постоянное FXII-зависимое образование брадикинина in vivo, поскольку уровни брадикинина снижены на 50% у мышей с дефицитом FXII. BK быстро разлагается рядом пептидаз, включая ангиотензинпревращающий фермент. В результате терапевтическое нацеливание этой пептидазы повышает уровни BK и считается частично ответственным за кровооснижающие эффекты этой широко используемой терапии.

Инфекционные болезни и сепсис

Позвоночные хозяева контролируют инфекцию путем быстрой мобилизации растворимых и клеточных микробицидных систем, которые уничтожают вторгающиеся патогены.Активация контактной системы является основной частью систем защиты организма-хозяина плазмы и играет решающую роль в качестве первой линии защиты организма от патогенов. Растущее число исследований показало, что контактная система важна для защиты хозяина от инфекции, вызываемой бактериями, паразитическими простейшими и вирусами [20,41,42]. Как упоминалось выше, бактерии могут активировать контактную систему непосредственно посредством физического взаимодействия или косвенно посредством высвобождения, например протеаз и полиР. Подобно клеточной поверхности белки контактной системы связываются с бактериями, непосредственно опосредуя сборку и активацию контактной системы на бактериальной поверхности [43].Протеиназы, секретируемые бактериями, такими как стафофаины, выделяемые золотистым стафилококком, непосредственно расщепляют HK. Некоторые протеиназы, такие как Porphyromonas gingivalis, опосредованно расщепляют HK путем протеолитической активации FXII или PK [44]. Полифосфат из бактерий также активирует FXII, инициирует образование BK и BK-опосредованную утечку из сосудов и вызывает болевые ощущения. Активация контактной системы способствует защите хозяина от бактериальной инфекции [43]. И калликреин, и FXIIa активируют систему комплемента, что приводит к уничтожению бактерий.Брадикинин может привлекать нейтрофилы и макрофаги к месту инфекции и активировать врожденные сигнальные клетки через путь B2R рецептора брадикинина [45]. Однако постоянная активация контактной системы, управляемая бактериями, может привести к патологическим уровням кининов в плазме крови одновременно с потреблением контактных факторов. У пациентов обильная продукция BK может вызывать гипотонию и сосудистую утечку, вызывая неблагоприятные эффекты и способствуя полиорганной недостаточности. Действительно, у пациентов с тяжелым сепсисом кининовая система активируется, что подтверждается повышенным уровнем брадикинина в плазме и потреблением прекалликреина и FXII.Однако в двойном слепом рандомизированном многоцентровом исследовании антагонист B2R не показал улучшения результатов у пациентов с синдромом системного воспалительного ответа и сепсисом [46]. Этот результат отражает сложность роли контактной системы в воспалительных каскадах.

Активация контактной системы также участвует в заражении паразитами. Trypanosoma cruzi связывает HK и расщепляет HK с помощью крузипаина с высвобождением брадикинина, количество которого увеличивается до 35 раз в присутствии гепарансульфатных протеогликанов [47].Освободившиеся кинины активируют врожденный иммунитет, сильно стимулируя созревание дендритных клеток через B2R. Однако избыток брадикинина приводит к стойкому паразитизму в отечных тканях. Недавнее исследование показало, что активация контактной системы также важна для индуцированной вирусом проницаемости эндотелиальных клеток [48]. Хантавирусная инфекция вызывает утечку из сосудов из-за изменений эндотелиального барьера. Инкубация белков плазмы с инфицированными хантавирусом эндотелиальными клетками приводит к расщеплению HK, увеличению ферментативной активности FXIIa и калликреина и высвобождению брадикинина, что приводит к резкому увеличению проницаемости эндотелиальных клеток [45].Другой вирус HSV1 напрямую связывается с FXII и опосредует его активацию в присутствии PK. Ингибитор активированного FXII, анти-FXII, анти-калликреин и анти-FXI Abs ингибируют свертывание, инициированное HSV1 [20]. Таким образом, вирус может запускать и усиливать коагуляцию через фазу контакта и внутренний путь, предполагая дополнительный механизм, который способствует патологии сосудов при вирусной инфекции.

Ревматоидный артрит (РА)

Воспалительная реакция при артрите состоит из острой фазы с отеком, болью и миграцией нейтрофилов, которые, как известно, связаны с активацией калликреина плазмы и высвобождением брадикинина.У пациентов с РА повышенные уровни калликреина и брадикинина в плазме обнаруживаются в синовиальной жидкости и плазме и положительно коррелируют со степенью боли в суставах и воспаления. Экспрессия рецептора брадикинина также увеличивалась в циркулирующих и синовиальных нейтрофилах пациентов с РА. Представление о том, что KKS играет важную роль в патогенезе артрита, подтверждается наблюдениями на животных моделях. Крысы Lewis имеют мутацию в HK (S511N), что делает его чувствительным к расщеплению калликреином плазмы, введение пептидогликана — полисахарида (PG-PS) полимеров клеточной стенки стрептококка вызывает системный воспалительный ответ, включая артрит, у крыс Lewis, но не у других линий, таких как как крысы Buffalo и Fischer.Наряду с синовитом и эрозией суставов у крыс Lewis наблюдается снижение прекалликреина и HK в плазме, вероятно, из-за потребления белков-предшественников после активации KKS. Специфический ингибитор калликреина предотвращает артрит и системные осложнения в модели PG-PS [49]. Штамм крыс Brown-Norway-Katholiek (B / N / Ka) имеет серьезный дефицит обоих кининогенов плазмы (HK и LK) из-за единственной точечной мутации Ala163Thr, которая приводит к нарушенной секреции кининиогена из печени.Крысы с дефицитом кининогена на генетическом фоне Льюиса демонстрируют ослабленный острый и хронический воспалительный артрит [50], демонстрируя, что HK плазмы является ключевым медиатором воспалительных заболеваний.

Хотя эти экспериментальные и клинические наблюдения демонстрируют, что KKS играет решающую роль в патогенезе артрита, молекулярные и клеточные механизмы, посредством которых активация KKS опосредует артрит, остаются неизвестными. Недавно мы сообщаем, что ингибирование калликреина плазмы улучшает артрит на двух моделях крыс Льюиса, модели PG-PS и модели индуцированного коллагеном артрита, эффект калликреина плазмы, вероятно, осуществляется через брадикинин [51].Брадикинин имеет два рецептора, конститутивно экспрессируемый B2R и индуцибельный B1R, оба относятся к рецепторам, связанным с G-белком. Недавнее исследование Song et al. продемонстрировали, что дефицит B2R не ослабляет артрит на мышиной модели артрита, индуцированного антителами против коллагена (CAIA) [52]. Однако, используя ту же модель CAIA, мы обнаружили, что двойной дефицит B1R и B2R значительно ингибирует развитие и тяжесть CAIA [53]. Снижение уровня HK в плазме наблюдалось на ранней стадии CAIA [53], что свидетельствует об активации KKS и генерации брадикинина в острой фазе заболевания.Эти наблюдения предоставляют первое генетическое свидетельство, показывающее, что брадикинин имеет решающее значение в патогенезе CAIA, а B1R, вероятно, является ключевым рецептором, который опосредует провоспалительный эффект брадикинина при артрите.

Функция рецепторов брадикинина при артрите кажется универсальной, включая локальную ткань суставов и циркулирующие воспалительные клетки. Во-первых, компоненты KKS могут попадать в синовиальную суставную щель либо путем транссудации из плазмы, либо из дегранулирующих нейтрофилов, хемотаксически привлеченных в синовиальную оболочку.Чрезмерное высвобождение кининов в синовиальных тканях может стимулировать синтез второй волны провоспалительных медиаторов (IL-1β, IL-6, простагландины, лейкотриены и гистамин) для усиления воспалительного заболевания суставов. Повышенная экспрессия рецепторов брадикинина в суставах может увеличить выработку цитокинов. Во-вторых, повышенная экспрессия рецептора брадикинина в циркулирующих моноцитах может усиливать системное воспаление и их перемещение в воспаленную синовиальную ткань. Экспрессия B1R в CAIA может быть индуцирована провоспалительными цитокинами, такими как IL1β, IL-6, и, вероятно, происходит как часть провоспалительного механизма обратной связи.Дефицит B1RB2R значительно ингибировал экспрессию мРНК IL-1β и IL-6, но не экспрессию мРНК TNFα, что позволяет предположить, что рецепторы брадикинина по-разному регулируют экспрессию этих цитокинов, и их роль в патогенезе CAIA, по крайней мере частично, заключается в регуляции ИЛ-1β и ИЛ-6.

Клинические и экспериментальные наблюдения показали, что синовиальная неоваскуляризация является критическим компонентом прогрессирования заболевания при РА [54,55]. Растет количество доказательств, указывающих на то, что эндотелиальные клетки-предшественники костного мозга (EPC) участвуют в синовиальной неоваскуляризации при артрите [56,57].Таким образом, то, как EPC попадают в воспаленную синовиальную оболочку и участвуют в синовиальной неоваскуляризации, становится важным вопросом. Недавно мы продемонстрировали, что HKa регулирует функции EPC in vitro [58,59], показывая связь между активацией KKS и биологией EPC. В модели артрита на грызунах мы обнаружили другую роль KKS в функции самонаведения EPCs при артрите [51]. В модели артрита на крысах Льюиса EPC привлекаются к воспаленной синовиальной оболочке и образуют новые сосуды, которые блокируются специфическим ингибитором калликреина плазмы; Брадикинин стимулирует трансэндотелиальную миграцию EPCs путем селективной активации экспрессии рецептора хоминга C-X-C мотива рецептора 4 (CXCR4) [51].Наше исследование предоставляет новые доказательства того, что активация KKS связана с синовиальным рекрутированием EPC в острой фазе артрита, EPC, вероятно, являются новой мишенью для брадикинина в условиях острого артрита. Множественная функция контактной системы при артрите демонстрирует, что терапевтические подходы, направленные на активацию KKS, имеют значительный потенциал при артрите.

Воспалительное заболевание кишечника (ВЗК)

ВЗК — это группа воспалительных состояний толстой и тонкой кишки, основные типы которых включают язвенный колит (ЯК) и болезнь Крона (БК).Активация KKS в плазме наблюдалась у пациентов с ВЗК [60]. У пациентов с активным язвенным колитом наблюдалось значительное снижение уровней прекалликреина, высокомолекулярного кининогена и ингибитора С1 в плазме по сравнению с контрольной группой. Уменьшение количества компонентов KKS является результатом потребления при активации. Активация KKS может опосредовать воспаление в активной фазе язвенного колита. У пациентов с болезнью Крона уровни прекалликреина, фактора XI, HK и его расщепленной формы в плазме были нормальными.Однако у них были значительно более высокие уровни антигена и функционального ингибитора Cl. Необнаруживаемая активация контактной системы в периферической крови может быть связана с высокими уровнями в плазме Cl-ингибитора, важного ингибитора контактной системы в кровообращении [61]. Белки B2R и B1R экспрессируются в эпителиальных клетках нормального кишечника и в клетках пациентов с ЯК и БК. Белок B1R локализован в макрофагах в центре гранулем при CD. Экспрессия белка B2R в верхушках энтероцитов в базальной области и внутриклеточно в воспалительной ткани сходна с нормальной тканью.Напротив, белок B1R локализован в базальной области энтероцитов в нормальном кишечнике, но в апикальной части энтероцитов в воспаленной ткани. По сравнению с нормальным контролем, белок B1R значительно повышен как в активном, так и при ЯК кишечнике [61]. У пациентов с активным ЯК мРНК B1R значительно выше, чем мРНК B2R. Однако у неактивных пациентов с ЯК мРНК B1R и B2R экспрессируются сравнительно. Таким образом, повышенная экспрессия гена и белка B1R при активной ВЗК обеспечивает структурную основу важной роли брадикинина в хроническом воспалении и может отражать воспаление кишечника.

Роль KKS при ВЗК была выявлена ​​исследованиями с использованием ингибиторов калликреина, антагонистов брадикинина или дефицита кининогена. Кинетика воспаления у инбредных крыс Lewis, которым вводили PG-PS, коррелирует с активацией контактной системы. Крысы Lewis имели двухфазное течение энтероколита. Потребление белков-предшественников PK и HK крысами Lewis указывает на активацию системы контакта с плазмой и тесно коррелирует с хроническим воспалением кишечника. В другой модели энтероколита, индуцированного индометацином, у крыс наблюдалась активация KKS, проявляющаяся в значительном снижении функциональных уровней прекалликреина и HK в плазме, а также в результате расщепления HK [62].Поскольку активация KKS происходит в связи с повреждением кишечника, независимо от запускающего агента, можно предположить, что активация этой системы является неотъемлемой частью воспаления кишечника у генетически восприимчивых хозяев. Ингибирование калликреина в плазме значительно уменьшало острое воспаление кишечника и более резко уменьшало рекрутирование тканевых гранулоцитов. Более того, в модели PG-PS IBD дефицит HK модулирует хроническое воспаление кишечника [63]. Эти результаты указывают на важность контактной системы при хроническом энтероколите и системном воспалении.

Недавние исследования с использованием модели ВЗК на мышах пролили свет на механизм, лежащий в основе роли контактной системы в патогенезе ВЗК. Колит, вызванный 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислотой (TNBS), связан с повреждением тканей, инфильтрацией нейтрофилов, которая может быть уменьшена селективным антагонистом B1R SSR240612 и дефицитом B1R [64]. Хотя эти результаты предполагают роль B1R в патогенезе ВЗК, этот эффект кажется модельно-специфичным. В модели колита, индуцированного декстрансульфатом натрия (DSS), колит значительно обострялся у мышей B1R — / — по сравнению с мышами дикого типа.Более того, лечение селективным антагонистом B1R, DALBK или SSR240612, не имело эффекта на DSS-индуцированный колит [64]. Напротив, селективный антагонист B2R предотвращал обострение колита у мышей B1R — / — . Экспрессия мРНК B2R была значительно повышена в ткани толстой кишки мышей B1R — / — после введения DSS. Таким образом, обострение DSS-индуцированного колита у мышей, лишенных B1R, происходит из-за компенсаторной активации B2R. Хотя это исследование предполагает, что B2R является основным рецептором, опосредующим роль брадикинина в IBD, мыши B2R — / — не защищены от заболевания в той же модели DSS [65].Таким образом, роль брадикинина и специфическое участие двух его рецепторов в патогенезе ВЗК очень сложна, требуется дополнительная работа для оценки их динамического взаимодействия и особого участия в развитии и прогрессировании заболеваний.

Тромбоз и воспаление являются отличительными чертами различных повреждений тканей, не поддающихся терапевтическому вмешательству. Поскольку контактная система играет важную роль в обоих процессах, она во многих отношениях представляет собой интерфейс между тромботическим и воспалительным контурами и является важным медиатором развития повреждения тканей.Конкретная роль контактной системы в обоих процессах и их перекрестных помех требует дальнейших исследований.

Контактный путь свертывания и воспаления

Реферат

Контактная система, также называемая системой калликреин-кинин плазмы, состоит из трех сериновых протеиназ: факторов свертывания крови XII (FXII) и XI (FXI) и прекалликреина плазмы (PK) и неферментативный кофактор высокомолекулярный кининоген (HK). Эта система активно исследуется более 50 лет.Компоненты этой системы и их взаимодействия были выяснены в экспериментах in vitro, что указывает на то, что эта система протромботическая, активируя внутренний путь, и провоспалительная, производя биоактивный пептид брадикинин. Хотя активация контактной системы связана с различными типами заболеваний человека, лишь в нескольких случаях ее роль четко определена. За последние 10 лет наше понимание контактной системы, особенно ее биологии и (патофизиологии), значительно расширилось благодаря исследованиям с использованием генно-модифицированных животных моделей.В этом обзоре мы опишем обновленный взгляд на контактную систему как на критический (пато) физиологический посредник коагуляции и воспаления.

Ключевые слова: Контактная система, коагуляция, воспаление, тромбоциты, инфекция, аутоиммунное заболевание, биология сосудов

Контактная система — это группа белков плазмы, которая реагирует на присутствие (пато) физиологических материалов и патогенов инвазии. Эта система состоит из трех сериновых протеиназ: факторов свертывания крови XII (FXII) и XI (FXI), прекалликреина плазмы (PK) и неферментативного кофактора высокомолекулярного кининогена (HK) [1].Эти белки плазмы были сгруппированы вместе как контактная система, поскольку они требовали контакта с искусственными отрицательно заряженными поверхностями для активации зимогена in vitro. При активации этой системы он может вызвать свертывание крови и отвечает за образование провоспалительных продуктов, таких как брадикинин. Эта система также называется системой калликреин-кинин плазмы и функционирует при некоторых воспалительных состояниях, таких как ревматоидный артрит (РА) и воспалительное заболевание кишечника (ВЗК) [2].

Исследования их биохимических и биологических свойств показали, что белки контактной системы взаимодействуют с рядом физиологических и патофизиологических систем. Биологическая роль контактной системы заключается в инициировании и участии в патофизиологических ответах на повреждение, в основном в процессах коагуляции и воспаления. Было показано, что активация этой системы вовлечена в широкий спектр болезненных состояний человека, включая сепсис и эндотоксемию, ОРДС, ДВС, брюшной тиф, пятнистую лихорадку Скалистых гор, болезнь Крона, трансфузионные реакции, отторжение почечного аллотрансплантата, нефротический синдром и т. Д. наследственный ангионевротический отек и при экстракорпоральном кровообращении [1].В моделях сепсиса, артрита и энтероколита на животных ингибиторы ферментов контактных факторов модулируют гипотензию, воспаление или увеличивают выживаемость, что предполагает участие этой системы в защите хозяина и врожденном иммунитете [3]. Контактная система эволюционно консервативна (дефицит контактных факторов очень редок), и активация контактной системы была связана с различными типами заболеваний человека, однако в настоящее время все еще остается загадкой, какова ее физиологическая функция у человека.За последние 10 лет, благодаря исследованиям с использованием генно-модифицированных моделей животных, наше понимание контактной системы, особенно ее физиологии и патофизиологии, значительно расширилось. В этом обзоре мы сначала опишем молекулярные и клеточные механизмы, которые управляют активацией контакта на нефизиологических материалах. Далее мы суммируем ключи, связывающие контактную систему с коагуляцией и воспалением при здоровье и болезни, и обсудим недавние результаты фундаментальных и клинических исследований о вкладе контактной системы в сердечно-сосудистые, инфекционные, воспалительные и аутоиммунные заболевания, а также их потенциал быть мишенью для лечения как тромботических, так и воспалительных заболеваний.

Активация контактной системы на основе сборки

В плазме циркулирует около 75% ПК, нековалентно связанного с HK в соотношении 1: 1, в то время как остальные ПК циркулируют свободно. Помимо PK, HK образует гетеродимер с фактором XI, и PK, и FXI связаны с поверхностью через HK и имеют общий консервативный сайт связывания HK. Неферментный кофактор HK отвечает за связывание с отрицательно заряженными поверхностями и сборку этих белков, образуя комплекс [1]. Как только FXII связывается с поверхностями, он претерпевает конформационные изменения, чтобы стать автоактивируемым (автоактивация), активированный FXIIa катализирует активацию PK.Между тем, FXII становится все более восприимчивым к расщеплению плазменным калликреином (PK) и сам активируется FXII (FXIIa). Активированный калликреин плазмы превращает FXII в FXIIa (трансактивация), тем самым образуя петлю обратной связи активации, которая преодолевает инактивацию калликреина и FXII их противоположными ингибиторами, такими как ингибитор C1-эстеразы. В отсутствие фактора XII прекалликреин не активируется на искусственной поверхности. Именно из-за этого открытия эта система называется контактной системой.На ранней фазе контактной активации способность независимого связывания HK с поверхностью ограничена. Однако после активации PK и FXII одноцепочечный HK может расщепляться на двухцепочечный HKa и высвобождать брадикинин. По сравнению с HK, HKa обладает большей способностью связываться с поверхностями и провоспалительным действием [4]. Более того, фактор XI активируется в комплексе с HK и FXII, в результате чего инициируется внутренний путь коагуляции. Вся указанная выше информация собрана из наблюдений in vitro, то, как контактная система активируется in vivo, не было хорошо охарактеризовано.

Молекулярно-опосредованная сборка и активация контактной системы

Контактная система в основном известна своей активацией отрицательно заряженными молекулярными поверхностями, такими как каолин, стекло, диоксид кремния, эллаговая кислота, сульфат декстрана, гиперсульфатированный хондроитинсульфат и наночастицы [1] . Хотя это множественные нефизиологические контактные активаторы, эта реакция формирует основу для анализа активированного частичного тромбопластинового времени свертывания (АЧТВ). Этот анализ обычно используется для оценки дефектов внутреннего пути коагуляции, таких как гемофилия A и B.Недавние исследования выявили эндогенные активаторы контактной системы, такие как полифосфат, коллаген, неправильно свернутые белковые агрегаты, липополисахариды (ЛПС), гликозаминогликаны и нуклеиновые кислоты [5]. Совсем недавно мы сообщили, что фосфатидилсерин может также служить активатором контактной системы in vivo [4].

Полифосфат

Полифосфат был первоначально идентифицирован в клетках немлекопитающих, но позже было показано, что он обогащен плотными тромбоцитами гранулами [6]. Полифосфат может высвобождаться из активированных тромбоцитов и может управлять активацией контактной системы [6].Помимо тромбоцитов, бактерии, такие как Escherichia coli , Vibrio cholerae , Corynebacterium diphtheriae , Haemophilus influenzae , содержат большое количество полифосфата, которое больше, чем у тромбоцитов, и содержит> 300 фосфатных единиц [7]. Бактериальный полифосфат активирует FXII и инициирует выработку брадикинина, который может способствовать хемотаксису лейкоцитов, болевым ощущениям и утечке сосудов [8].

Неправильно свернутые белковые агрегаты

Неправильно свернутые белковые агрегаты являются белком-активатором контактной системы [9].Исследование in vitro показало, что различные агрегаты неправильно свернутого белка, такие как агрегаты β-амилоидного пептида, непосредственно активируют FXII, что приводит к активации калликреина [9]. Соответственно, брадикинин вырабатывается в спинномозговой жидкости пациентов с болезнью Альцгеймера. У пациентов, страдающих системным амилоидозом, заболеванием, при котором циркулируют и откладываются агрегаты легких цепей иммуноглобулина, также наблюдается активация системы калликреин-кинин, вызванная FXII. Связывание FXII с неправильно свернутыми белковыми агрегатами отличается тем, что его связывание с отрицательно заряженными поверхностями опосредуется доменом фибронектина типа 1, а его связывание с агрегатами осуществляется через фибронектин типа 2, второй EGF и домены крингла.

Фосфатидилсерин (PS)

Недавно мы сообщили, что в очищенных системах HK специфически связывается с липосомами PS и расщепляется в присутствии PK и XII [4]. Узнавая PS, HK предпочтительно связывается с апоптотическими клетками, но не с жизнеспособными клетками, что опосредует фагоцитоз апоптотических клеток (эффероцитоз). Связывание HK с апоптотическими клетками вызывает его быстрое расщепление до двухцепочечной формы HK (HKa) и брадикинина. И H-цепь, и L-цепь HKa связаны с липосомами PS и апоптотическими клетками [4].

Коллаген

Фактор XII связывается с фибриллами коллагена различного происхождения, имеющими отрицательный заряд [10]. При воздействии плазмы коллаген I типа вызывает образование тромбина и свертывание плазмы, что зависит от активности FXII [10]. Кроме того, PK также связывается с коллагеном, тем самым ингибируя индуцированную коллагеном агрегацию тромбоцитов [11].

Опосредованная клеточной мембраной сборка и активация контактной системы

Физиологическая отрицательно заряженная поверхность для активации контактной системы фактически представляет собой сборку этих белков на биологических поверхностях, то есть клеточных мембранах [1].Специфические взаимодействия с биологическими мембранами эндотелиальных клеток, тромбоцитов, нейтрофилов и моноцитов указывают на то, что сборка и активация этой системы происходит в физиологической среде. Белки контактной системы могут собираться на клеточной мембране посредством связывания со своими рецепторами и гликозаминогликанами (ГАГ) протеогликанов, включая гепарансульфат (HS) и хондроитинсульфат (CS) [12,13]. Детальные исследования белков контактной системы, взаимодействующих с клетками, привели к пониманию того, насколько эта система физиологически активна.Опорным белком для сборки контактной системы на клеточных мембранах является HK [14]. На самом деле HK имеет три домена, которые соответствуют предполагаемому рецептору (рецепторам) кининогена на эндотелиальных клетках. Было показано, что три рецептора опосредуют связывание HK на поверхности клетки: uPAR, gC1qR и цитокератин-1 [1]. Мы сообщали, что HK связывается с uPAR через свой D5 в мембранных рафтах эндотелиальных клеток [15], а D3 и D5 HK стимулируют моноциты через uPAR и Mac1 для продукции цитокинов и хемокинов [16]. Помимо здоровых клеток, апоптотические клетки могут также обеспечивать поверхность для сборки и активации контактной системы [4].Недавно мы сообщили, что HK связывает uPAR на моноцитах / макрофагах и фосфатидилсерин на апоптотических клетках, что приводит к поглощению апоптотических клеток и сборке и активации контактной системы на апоптотической клеточной поверхности [4]. Поскольку эффероцитоз необходим для регуляции иммунных ответов и тканевого гомеостаза, участие HK в распознавании и связывании апоптотических клеток показывает новую роль контактной системы в «апоптотическом» врожденном иммунитете. GAG на клеточной поверхности открывают огромное количество специфических сайтов связывания для контактной системы.HK и FXII связываются с высоким сродством (K D ≤ 144 нМ) с эндотелиальными GAG в присутствии ионов цинка, тем самым модулируя образование BK, управляемое контактной системой [17].

Помимо эукариоцитов, прокариоциты, такие как бактерии и вирусы, также обеспечивают поверхности для сборки и активации контактной системы. Белки контактной системы связываются как с грамотрицательными бактериями, такими как Escherichia coli [18], так и с грамположительными бактериями, такими как Streptococcus pyogenes [19]. И D3, и D5 H HK участвуют в специфическом связывании с бактериями.Взаимодействие HK с бактериями напоминает связывание белков с эндотелиальными клетками, что приводит к активации контактной системы. Вирус, такой как вирус простого герпеса типа 1 (HSV1), также связан с контактной системой [20]. HSV1 связывается с FXII и опосредует его активацию в присутствии PK [20].

Активация контактной системы запускает как коагулянтный, так и воспалительный пути, а также инициирует протромботические и провоспалительные реакции через внутренний путь коагуляции (образование тромбина) и систему калликреин-кинин (производство кининов), соответственно.Как описано выше, биохимия контактной системы in vitro хорошо изучена за последние пять десятилетий, недавние исследования с использованием генетических манипуляций на мышах и изучение генетической изменчивости человека в факторах контактной системы позволили признать (пато) физиологическую роль контактная система в здоровье и в болезни.

Контактная система в пути коагуляции: активация внутреннего пути

Артериальное или венозное кровообращение может подвергаться тромбозу, вызывая инфаркт миокарда и инсульт или тромбоэмболию легочной артерии соответственно, что является основной причиной смерти в мире.Коагуляция необходима не только для поддержания целостности системы кровообращения (гемостаз), но также способствует образованию сгустка крови, ведущему к ишемии и повреждению тканей (тромбозу). Тромбоз, вызванный системой свертывания плазмы, приводит к образованию фибрина. Формирование фибрина инициируется двумя различными путями: воздействием крови на поврежденные стенки сосудов (внешние) или на поверхности активации крови (внутренние). При сборке на активирующей поверхности контактная система (FXII, PK и HK) активируется и стимулирует внутренний путь коагуляции путем активации FXI.Кроме того, внутренний путь коагуляции, опосредованный контактной системой, может пересекаться с внешним путем коагуляции. Например, контактная система коагуляции может быть инициирована либо контактной поверхностью в плазме у женщин на поздних сроках беременности, либо мицеллярным стеаратом, добавленным в плазму. С любой из контактных поверхностей увеличение коагулянтной активности фактора VII (VIIc) и FXIIa зависело от эффективности контактной поверхности [21]. Индуцированный стеаратом VIIc ингибировался на 60-70% в присутствии моноклональных антител против фактора IX и отсутствовал в плазме с дефицитом FXII.Добавление очищенного человеческого фактора XII к этой плазме восстановило увеличение VIIc. В FIX-дефицитной или FXI-дефицитной плазме индуцированное стеаратом увеличение VIIc было значительно снижено, что указывает на то, что в присутствии контактной поверхности активация контактной системы приводит к активации FVII [21]. В другом исследовании in vitro, в котором FXI-зависимый эффект на образование сгустка, инициированный тканевым фактором, FXI увеличивал активацию протромбина и скорость образования фибрина, выявляя роль фактора XI в распространении роста сгустка после инициации, зависимой от тканевого фактора [22 ].

В отличие от наблюдений за аномалиями внешних путей, клинические исследования показали, что у людей с дефицитом какого-либо фактора контактной системы нет дефекта кровотечения. Например, у г-жи Мэйм Уильямс отсутствовали обе формы кининогена. Как и г-н Хагеман (с дефицитом FXII), она умерла от тромбоэмболии легочной артерии [23], демонстрируя, что пациенты с дефицитом контактного фактора не защищены от тромботических расстройств. Хотя исследование уникальных пациентов с дефицитом или контактными факторами может способствовать нашему пониманию их функции, дефицит контактной системы редко встречается у людей, и ни одно контролируемое крупное клиническое исследование не коррелировало между дефицитом контактной системы и патофизиологией, такой как тромботическая / геморрагическая болезнь.Вместо этого роль контактной системы в тромбозе недавно была улучшена исследованиями с использованием моделей на животных. Хотя считалось, что контактная система не имеет значения для гемостаза, исследования на животных моделях показывают, что образование тромба нарушено у мышей с дефицитом. Таким образом, контактная система играет решающую роль в патологическом тромбозе при повреждении артерий и вен.

Фенотип дефицита контактного фактора при артериальном тромбозе

Дефицит FXII

Renne et al.являются первыми, кто сообщил, что у мышей с дефицитом FXII был дефект в образовании тромбов, вызванный различными методами травм, демонстрируя решающую роль FXII в образовании фибрина in vivo [24]. Восстановление FXII нулевых мышей с человеческим FXII восстановило пролонгированное aPTT, обнаруженное у нелеченных животных, и полностью восстановило способность инфузированных животных к образованию тромбов, предполагая аналогичную роль FXII у мышей и людей [24]. Действительно, контактная система очень консервативна среди видов млекопитающих.Кроме того, мыши с дефицитом гена FXII защищены от церебральной ишемии, связанной со сниженным образованием фибрина в микрососудистом русле ишемической ткани, что согласуется с важной ролью FXII в образовании тромба при тромбоэмболической болезни [25]. Мыши, лишенные FXI, аналогичным образом защищены от образования окклюзионного фибрина [26]. Таким образом, контактная система имеет решающее значение для патологического свертывания крови через активацию внутреннего пути [27]. В отличие от FXII и других белков контактной системы, дефицит FXI и нижестоящих FVIII и FIX приводит к легкому или тяжелому нарушению свертываемости крови, предполагая, что внутренний путь способствует амплификации тромбина после начальной стимуляции внешнего пути свертывания крови тканевым фактором. .

PK дефицит

PK представляет собой многофункциональную сериновую протеазу, участвующую в контактной активации коагуляции. Подобно дефициту у людей, PK-дефицитные мыши выявляли повышенное АЧТВ без увеличения времени кровотечения [28]. PK-дефицитные мыши были полностью защищены от окклюзии при индуцированном FeCl3 артериальном тромбозе по сравнению с гетерозиготами и однопометниками дикого типа [28], демонстрируя, что делеция прекалликреина в плазме предотвращает образование окклюзионных тромбов. Соответственно, лечение мышей антисмысловым олигонуклеотидом прекалликреина (ASO) может иметь положительный терапевтический индекс [29].

HK дефицит

HK играет важную роль в сборке контактной системы. В то время как ген кининогена человека имеет единственную копию, геном мыши содержит 2 гомологичных гена кининогена, Kng1 и Kng2, которые экспрессируются тканеспецифическим образом [20]. Меркулов и др. обнаружили, что mKng1 экспрессируется главным образом в печени, у мышей с дефицитом Kng1 отсутствовали плазменные HK и низкомолекулярный кининоген (LK), а также Delta-HK-D5, изоформа кининогена, лишенная домена 5 Kng1 [30].Подобно мышам с дефицитом FXII, мыши Kng1 — / — демонстрируют значительно увеличенное время до окклюзии сонной артерии после введения Rose Bengal и лазерно-индуцированного повреждения артерии [30], указывая тем самым, что HK в плазме вносит вклад в артериальный тромбоз у мышей. У мышей Kng1 — / — , подвергшихся временной окклюзии средней мозговой артерии, развились значительно меньшие инфаркты головного мозга и менее тяжелые неврологические нарушения без увеличения инфаркта-ассоциированного кровоизлияния [31].Этот защитный эффект сохранялся за счет уменьшения тромбообразования в ишемизированных сосудах и улучшения мозгового кровотока [31]. Поскольку Kng1 дефицитные мыши также обнаруживают менее серьезные повреждения гематоэнцефалического барьера и образование отеков, а местная воспалительная реакция снижается по сравнению с контролем, Kng1, по-видимому, играет важную роль в образовании патологических тромбов и воспалении, но незаменим для гемостаза [31].

Когда происходит повреждение артерии, активированные эндотелиальные клетки и открытые субэндотелиальные материалы, такие как коллаген, могут служить поверхностями для сборки и активации контактной системы, что приводит к генерации тромбина под действием FXIa и последующей активации тромбоцитов.Активированные тромбоциты могут дополнительно связывать факторы контактной системы, такие как FXII, опосредуя тромбоцит-зависимую прокоагулянтную активность [32]. Кроме того, тромбоциты выделяют полифосфат активатора FXII, что приводит к активации контактной системы и продукции фибрина на активированных поверхностях тромбоцитов в развивающемся тромбе. С другой стороны, FXIIa оказывает прямое действие на рецептор, активируемый протеазой, у мышей, обеспечивая ключ к активации тромбоцитов, управляемой контактной системой.

Венозный тромбоз

Тромбоз глубоких вен (ТГВ), который может вызвать тромбоэмболию легочной артерии, является опасным для жизни состоянием, но его механизм остается гораздо менее понятным, чем артериальный тромбоз.Генетические и фармацевтические исследования также демонстрируют, что контактная система играет решающую роль в венозном тромбозе. В модели повреждения FeCl3 у мышей с дефицитом PK наблюдается снижение тромбоза венозного тромбоза на 50% [28]. Селективный нокдаун прекалликреина у мышей с использованием технологии антисмысловых олигонуклеотидов (ASO) также приводит к антитромботическому фенотипу в модели тромбоза нижней полой вены, вызванной стенозом [29]. Точно так же истощение FXII или XI у кроликов с использованием ASO значительно ослабляет катетер-индуцированный венозный тромбоз [33].фон Брюль и др. обнаружили, что генетическое устранение FXII обеспечивает защиту от амплификации ТГВ у мышей [34]. В их модели тромборезидентные нейтрофилы связывают FXII и поддерживают его активацию за счет высвобождения внеклеточных ловушек нейтрофилов (NET) [35], что необходимо для последующего распространения DVT [34]. Когда полиР вводится внутривенно, он активирует FXII и приводит к летальной эмболии легочной артерии у мышей дикого типа, что предотвращается либо дефицитом FXII, либо ингибитором FXII, что указывает на критическую роль контактной системы [6,36].Рекомбинантный ингибитор контактной фазы Ixodes ricinus (Ir-CPI) представляет собой белок типа Kunitz, экспрессируемый слюнными железами клеща Ixodes ricinus, специфически взаимодействует с активированными человеческими FXIIa, FXIa и калликреином и продлевает АЧТВ in vitro [36]. Внутривенное введение Ir-CPI крысам и мышам вызывало дозозависимое снижение образования венозных тромбов [36].

Учитывая результаты, полученные на моделях мышей, которые показывают, что мыши с дефицитом белков контактной системы имеют нормальный гемостаз, как и их человеческие аналоги, образование фибрина, управляемое контактной системой, особенно важно для образования патологических тромбов, но не влияет на физиологический гемостаз.Это повышает вероятность того, что контактная система нацеливания может служить стратегией для профилактики или лечения патологического тромбоза, который имеет меньший риск тяжелого кровотечения, чем используемые в настоящее время антикоагулянты [33] . Например, избирательное истощение фактора XII антисмысловыми олигонуклеотидами ослабляет тромбоз катетера у кроликов [33]. Ингибирование активации FXII с помощью пептидного ингибитора PCK у мышей также обеспечивает защиту от церебральной ишемии, не вызывая чрезмерного кровотечения в месте хирургической травмы.Более того, рекомбинантный ингибитор на основе инфестина-4, который специфически воздействует на активность FXII, обеспечивает защиту от церебральной ишемии в экспериментальных моделях инсульта, хотя и не влияет на гемостатическую способность у мышей, получавших ингибитор [37].

Фибринолиз

Помимо активации внутреннего пути коагуляции, одно из последующих событий контактной системы включает фибринолиз. Активацию плазминогена in vivo можно воспроизводимо исследовать путем кратковременной инфузии дезамино-D-аргинина вазопрессина (DDAVP).Леви и др. обнаружили, что образование плазмина под действием DDAVP-стимула, что отражается циркулирующими комплексами плазмин-a2-антиплазмин, было ниже у пациентов с дефицитом FXII, чем у здоровых добровольцев, предполагая, что активация контактной системы произошла после инфузии DDAVP у здоровых добровольцев [38]. Активность активации плазминогена в нормальной плазме после инфузии DDAVP была только частично заблокирована (на две трети) специфическими антителами к активатору плазминогена тканевого типа (t-PA) и PA урокиназного типа.Остаточная активность могла быть подавлена ​​ингибирующим моноклональным антителом против FXII и отсутствовала у пациентов с дефицитом FXII [38]. Таким образом, активация контактной системы способствует фибринолизу. Нарушение фибринолитической активности у пациентов с дефицитом FXII может объяснить возникновение тромбоэмболических осложнений у этих пациентов. Пациенты с дефицитом фактора XI страдают аномальным кровотечением. У еврейских пробандов-ашкенази с тяжелым дефицитом FXI была повышенная доля эпизодов кровотечений после операций на участках с усиленным локальным фибринолизом, таких как мочевыводящие пути, или во время удаления зубов, что позволяет предположить, что FXI играет роль в подавлении фибринолиза [39 ].В соответствии с этой гипотезой системное включение антител против фактора XI привело к почти двукратному увеличению эндогенного фибринолиза по сравнению с контрольным антителом, что указывает на новую роль внутреннего пути коагуляции [40]. В статической модели коагуляции in vitro, в которой свертывание крови инициируется в рекальцифицированной цитратной плазме тканевым фактором, нанесенным на дно микротитровальных планшетов, когда образовывались более крупные сгустки (200–300 мкл плазмы), FXI не только увеличивал активацию протромбина и фибрина. скорость образования, но также ингибирует фибринолиз.Таким образом, помимо усиления коагуляции, инициированной тканевым фактором, FXI ингибирует фибринолиз для стабилизации образовавшегося сгустка [22].

Контактная система при воспалении

Контактная система широко участвует в воспалительной реакции и аутоиммунных заболеваниях. В течение долгого времени было известно, что активация этой системы производит мощный провоспалительный нонапептид брадикинин (BK; Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg) посредством расщепления HK посредством PK. Таким образом, контактная система была также названа плазменной калликреин-кининовой системой (ККС).Брадикинин и родственные кинины действуют на два типа рецепторов, обозначенных как B1R и B2R, оба из которых являются рецепторами, связанными с G-белком. B2R конститутивно экспрессируется в различных сосудистых и несосудистых клетках и быстро десенсибилизируется. B1R индуцируется воспалительными цитокинами и устойчив к десенсибилизации. Эти рецепторы брадикинина участвуют в регуляции различных физиологических и патологических процессов. Способ действия кининов основан на взаимодействиях между кининами и их специфическими рецепторами, что может привести к активации нескольких систем вторичных мессенджеров.Во время воспалительных реакций активированные лейкоциты и эндотелиальные клетки экспрессируют B1R, который чувствителен к пептидам, производным от брадикинина. Когда кинин B2R активируется, проницаемость сосудов увеличивается, в том числе за счет NO-индуцированного расслабления периваскулярных гладкомышечных клеток. Имеются данные о том, что существует постоянное FXII-зависимое образование брадикинина in vivo, поскольку уровни брадикинина снижены на 50% у мышей с дефицитом FXII. BK быстро разлагается рядом пептидаз, включая ангиотензинпревращающий фермент.В результате терапевтическое нацеливание этой пептидазы повышает уровни BK и считается частично ответственным за кровооснижающие эффекты этой широко используемой терапии.

Инфекционные болезни и сепсис

Позвоночные хозяева контролируют инфекцию путем быстрой мобилизации растворимых и клеточных микробицидных систем, которые уничтожают вторгающиеся патогены. Активация контактной системы является основной частью систем защиты организма-хозяина плазмы и играет решающую роль в качестве первой линии защиты организма от патогенов.Растущее число исследований показало, что контактная система важна для защиты хозяина от инфекции, вызываемой бактериями, паразитическими простейшими и вирусами [20,41,42]. Как упоминалось выше, бактерии могут активировать контактную систему непосредственно посредством физического взаимодействия или косвенно посредством высвобождения, например протеаз и полиР. Подобно клеточной поверхности белки контактной системы связываются с бактериями, непосредственно опосредуя сборку и активацию контактной системы на бактериальной поверхности [43]. Протеиназы, секретируемые бактериями, такими как стафофаины, выделяемые золотистым стафилококком, непосредственно расщепляют HK.Некоторые протеиназы, такие как Porphyromonas gingivalis, опосредованно расщепляют HK путем протеолитической активации FXII или PK [44]. Полифосфат из бактерий также активирует FXII, инициирует образование BK и BK-опосредованную утечку из сосудов и вызывает болевые ощущения. Активация контактной системы способствует защите хозяина от бактериальной инфекции [43]. И калликреин, и FXIIa активируют систему комплемента, что приводит к уничтожению бактерий. Брадикинин может привлекать нейтрофилы и макрофаги к месту инфекции и активировать врожденные сигнальные клетки через путь B2R рецептора брадикинина [45].Однако постоянная активация контактной системы, управляемая бактериями, может привести к патологическим уровням кининов в плазме крови одновременно с потреблением контактных факторов. У пациентов обильная продукция BK может вызывать гипотонию и сосудистую утечку, вызывая неблагоприятные эффекты и способствуя полиорганной недостаточности. Действительно, у пациентов с тяжелым сепсисом кининовая система активируется, что подтверждается повышенным уровнем брадикинина в плазме и потреблением прекалликреина и FXII. Однако в двойном слепом рандомизированном многоцентровом исследовании антагонист B2R не показал улучшения результатов у пациентов с синдромом системного воспалительного ответа и сепсисом [46].Этот результат отражает сложность роли контактной системы в воспалительных каскадах.

Активация контактной системы также участвует в заражении паразитами. Trypanosoma cruzi связывает HK и расщепляет HK с помощью крузипаина с высвобождением брадикинина, количество которого увеличивается до 35 раз в присутствии гепарансульфатных протеогликанов [47]. Освободившиеся кинины активируют врожденный иммунитет, сильно стимулируя созревание дендритных клеток через B2R. Однако избыток брадикинина приводит к стойкому паразитизму в отечных тканях.Недавнее исследование показало, что активация контактной системы также важна для индуцированной вирусом проницаемости эндотелиальных клеток [48]. Хантавирусная инфекция вызывает утечку из сосудов из-за изменений эндотелиального барьера. Инкубация белков плазмы с инфицированными хантавирусом эндотелиальными клетками приводит к расщеплению HK, увеличению ферментативной активности FXIIa и калликреина и высвобождению брадикинина, что приводит к резкому увеличению проницаемости эндотелиальных клеток [45]. Другой вирус HSV1 напрямую связывается с FXII и опосредует его активацию в присутствии PK.Ингибитор активированного FXII, анти-FXII, анти-калликреин и анти-FXI Abs ингибируют свертывание, инициированное HSV1 [20]. Таким образом, вирус может запускать и усиливать коагуляцию через фазу контакта и внутренний путь, предполагая дополнительный механизм, который способствует патологии сосудов при вирусной инфекции.

Ревматоидный артрит (РА)

Воспалительная реакция при артрите состоит из острой фазы с отеком, болью и миграцией нейтрофилов, которые, как известно, связаны с активацией калликреина плазмы и высвобождением брадикинина.У пациентов с РА повышенные уровни калликреина и брадикинина в плазме обнаруживаются в синовиальной жидкости и плазме и положительно коррелируют со степенью боли в суставах и воспаления. Экспрессия рецептора брадикинина также увеличивалась в циркулирующих и синовиальных нейтрофилах пациентов с РА. Представление о том, что KKS играет важную роль в патогенезе артрита, подтверждается наблюдениями на животных моделях. Крысы Lewis имеют мутацию в HK (S511N), что делает его чувствительным к расщеплению калликреином плазмы, введение пептидогликана — полисахарида (PG-PS) полимеров клеточной стенки стрептококка вызывает системный воспалительный ответ, включая артрит, у крыс Lewis, но не у других линий, таких как как крысы Buffalo и Fischer.Наряду с синовитом и эрозией суставов у крыс Lewis наблюдается снижение прекалликреина и HK в плазме, вероятно, из-за потребления белков-предшественников после активации KKS. Специфический ингибитор калликреина предотвращает артрит и системные осложнения в модели PG-PS [49]. Штамм крыс Brown-Norway-Katholiek (B / N / Ka) имеет серьезный дефицит обоих кининогенов плазмы (HK и LK) из-за единственной точечной мутации Ala163Thr, которая приводит к нарушенной секреции кининиогена из печени.Крысы с дефицитом кининогена на генетическом фоне Льюиса демонстрируют ослабленный острый и хронический воспалительный артрит [50], демонстрируя, что HK плазмы является ключевым медиатором воспалительных заболеваний.

Хотя эти экспериментальные и клинические наблюдения демонстрируют, что KKS играет решающую роль в патогенезе артрита, молекулярные и клеточные механизмы, посредством которых активация KKS опосредует артрит, остаются неизвестными. Недавно мы сообщаем, что ингибирование калликреина плазмы улучшает артрит на двух моделях крыс Льюиса, модели PG-PS и модели индуцированного коллагеном артрита, эффект калликреина плазмы, вероятно, осуществляется через брадикинин [51].Брадикинин имеет два рецептора, конститутивно экспрессируемый B2R и индуцибельный B1R, оба относятся к рецепторам, связанным с G-белком. Недавнее исследование Song et al. продемонстрировали, что дефицит B2R не ослабляет артрит на мышиной модели артрита, индуцированного антителами против коллагена (CAIA) [52]. Однако, используя ту же модель CAIA, мы обнаружили, что двойной дефицит B1R и B2R значительно ингибирует развитие и тяжесть CAIA [53]. Снижение уровня HK в плазме наблюдалось на ранней стадии CAIA [53], что свидетельствует об активации KKS и генерации брадикинина в острой фазе заболевания.Эти наблюдения предоставляют первое генетическое свидетельство, показывающее, что брадикинин имеет решающее значение в патогенезе CAIA, а B1R, вероятно, является ключевым рецептором, который опосредует провоспалительный эффект брадикинина при артрите.

Функция рецепторов брадикинина при артрите кажется универсальной, включая локальную ткань суставов и циркулирующие воспалительные клетки. Во-первых, компоненты KKS могут попадать в синовиальную суставную щель либо путем транссудации из плазмы, либо из дегранулирующих нейтрофилов, хемотаксически привлеченных в синовиальную оболочку.Чрезмерное высвобождение кининов в синовиальных тканях может стимулировать синтез второй волны провоспалительных медиаторов (IL-1β, IL-6, простагландины, лейкотриены и гистамин) для усиления воспалительного заболевания суставов. Повышенная экспрессия рецепторов брадикинина в суставах может увеличить выработку цитокинов. Во-вторых, повышенная экспрессия рецептора брадикинина в циркулирующих моноцитах может усиливать системное воспаление и их перемещение в воспаленную синовиальную ткань. Экспрессия B1R в CAIA может быть индуцирована провоспалительными цитокинами, такими как IL1β, IL-6, и, вероятно, происходит как часть провоспалительного механизма обратной связи.Дефицит B1RB2R значительно ингибировал экспрессию мРНК IL-1β и IL-6, но не экспрессию мРНК TNFα, что позволяет предположить, что рецепторы брадикинина по-разному регулируют экспрессию этих цитокинов, и их роль в патогенезе CAIA, по крайней мере частично, заключается в регуляции ИЛ-1β и ИЛ-6.

Клинические и экспериментальные наблюдения показали, что синовиальная неоваскуляризация является критическим компонентом прогрессирования заболевания при РА [54,55]. Растет количество доказательств, указывающих на то, что эндотелиальные клетки-предшественники костного мозга (EPC) участвуют в синовиальной неоваскуляризации при артрите [56,57].Таким образом, то, как EPC попадают в воспаленную синовиальную оболочку и участвуют в синовиальной неоваскуляризации, становится важным вопросом. Недавно мы продемонстрировали, что HKa регулирует функции EPC in vitro [58,59], показывая связь между активацией KKS и биологией EPC. В модели артрита на грызунах мы обнаружили другую роль KKS в функции самонаведения EPCs при артрите [51]. В модели артрита на крысах Льюиса EPC привлекаются к воспаленной синовиальной оболочке и образуют новые сосуды, которые блокируются специфическим ингибитором калликреина плазмы; Брадикинин стимулирует трансэндотелиальную миграцию EPCs путем селективной активации экспрессии рецептора хоминга C-X-C мотива рецептора 4 (CXCR4) [51].Наше исследование предоставляет новые доказательства того, что активация KKS связана с синовиальным рекрутированием EPC в острой фазе артрита, EPC, вероятно, являются новой мишенью для брадикинина в условиях острого артрита. Множественная функция контактной системы при артрите демонстрирует, что терапевтические подходы, направленные на активацию KKS, имеют значительный потенциал при артрите.

Воспалительное заболевание кишечника (ВЗК)

ВЗК — это группа воспалительных состояний толстой и тонкой кишки, основные типы которых включают язвенный колит (ЯК) и болезнь Крона (БК).Активация KKS в плазме наблюдалась у пациентов с ВЗК [60]. У пациентов с активным язвенным колитом наблюдалось значительное снижение уровней прекалликреина, высокомолекулярного кининогена и ингибитора С1 в плазме по сравнению с контрольной группой. Уменьшение количества компонентов KKS является результатом потребления при активации. Активация KKS может опосредовать воспаление в активной фазе язвенного колита. У пациентов с болезнью Крона уровни прекалликреина, фактора XI, HK и его расщепленной формы в плазме были нормальными.Однако у них были значительно более высокие уровни антигена и функционального ингибитора Cl. Необнаруживаемая активация контактной системы в периферической крови может быть связана с высокими уровнями в плазме Cl-ингибитора, важного ингибитора контактной системы в кровообращении [61]. Белки B2R и B1R экспрессируются в эпителиальных клетках нормального кишечника и в клетках пациентов с ЯК и БК. Белок B1R локализован в макрофагах в центре гранулем при CD. Экспрессия белка B2R в верхушках энтероцитов в базальной области и внутриклеточно в воспалительной ткани сходна с нормальной тканью.Напротив, белок B1R локализован в базальной области энтероцитов в нормальном кишечнике, но в апикальной части энтероцитов в воспаленной ткани. По сравнению с нормальным контролем, белок B1R значительно повышен как в активном, так и при ЯК кишечнике [61]. У пациентов с активным ЯК мРНК B1R значительно выше, чем мРНК B2R. Однако у неактивных пациентов с ЯК мРНК B1R и B2R экспрессируются сравнительно. Таким образом, повышенная экспрессия гена и белка B1R при активной ВЗК обеспечивает структурную основу важной роли брадикинина в хроническом воспалении и может отражать воспаление кишечника.

Роль KKS при ВЗК была выявлена ​​исследованиями с использованием ингибиторов калликреина, антагонистов брадикинина или дефицита кининогена. Кинетика воспаления у инбредных крыс Lewis, которым вводили PG-PS, коррелирует с активацией контактной системы. Крысы Lewis имели двухфазное течение энтероколита. Потребление белков-предшественников PK и HK крысами Lewis указывает на активацию системы контакта с плазмой и тесно коррелирует с хроническим воспалением кишечника. В другой модели энтероколита, индуцированного индометацином, у крыс наблюдалась активация KKS, проявляющаяся в значительном снижении функциональных уровней прекалликреина и HK в плазме, а также в результате расщепления HK [62].Поскольку активация KKS происходит в связи с повреждением кишечника, независимо от запускающего агента, можно предположить, что активация этой системы является неотъемлемой частью воспаления кишечника у генетически восприимчивых хозяев. Ингибирование калликреина в плазме значительно уменьшало острое воспаление кишечника и более резко уменьшало рекрутирование тканевых гранулоцитов. Более того, в модели PG-PS IBD дефицит HK модулирует хроническое воспаление кишечника [63]. Эти результаты указывают на важность контактной системы при хроническом энтероколите и системном воспалении.

Недавние исследования с использованием модели ВЗК на мышах пролили свет на механизм, лежащий в основе роли контактной системы в патогенезе ВЗК. Колит, вызванный 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислотой (TNBS), связан с повреждением тканей, инфильтрацией нейтрофилов, которая может быть уменьшена селективным антагонистом B1R SSR240612 и дефицитом B1R [64]. Хотя эти результаты предполагают роль B1R в патогенезе ВЗК, этот эффект кажется модельно-специфичным. В модели колита, индуцированного декстрансульфатом натрия (DSS), колит значительно обострялся у мышей B1R — / — по сравнению с мышами дикого типа.Более того, лечение селективным антагонистом B1R, DALBK или SSR240612, не имело эффекта на DSS-индуцированный колит [64]. Напротив, селективный антагонист B2R предотвращал обострение колита у мышей B1R — / — . Экспрессия мРНК B2R была значительно повышена в ткани толстой кишки мышей B1R — / — после введения DSS. Таким образом, обострение DSS-индуцированного колита у мышей, лишенных B1R, происходит из-за компенсаторной активации B2R. Хотя это исследование предполагает, что B2R является основным рецептором, опосредующим роль брадикинина в IBD, мыши B2R — / — не защищены от заболевания в той же модели DSS [65].Таким образом, роль брадикинина и специфическое участие двух его рецепторов в патогенезе ВЗК очень сложна, требуется дополнительная работа для оценки их динамического взаимодействия и особого участия в развитии и прогрессировании заболеваний.

Тромбоз и воспаление являются отличительными чертами различных повреждений тканей, не поддающихся терапевтическому вмешательству. Поскольку контактная система играет важную роль в обоих процессах, она во многих отношениях представляет собой интерфейс между тромботическим и воспалительным контурами и является важным медиатором развития повреждения тканей.Конкретная роль контактной системы в обоих процессах и их перекрестных помех требует дальнейших исследований.

Контактный путь свертывания и воспаления

Реферат

Контактная система, также называемая системой калликреин-кинин плазмы, состоит из трех сериновых протеиназ: факторов свертывания крови XII (FXII) и XI (FXI) и прекалликреина плазмы (PK) и неферментативный кофактор высокомолекулярный кининоген (HK). Эта система активно исследуется более 50 лет.Компоненты этой системы и их взаимодействия были выяснены в экспериментах in vitro, что указывает на то, что эта система протромботическая, активируя внутренний путь, и провоспалительная, производя биоактивный пептид брадикинин. Хотя активация контактной системы связана с различными типами заболеваний человека, лишь в нескольких случаях ее роль четко определена. За последние 10 лет наше понимание контактной системы, особенно ее биологии и (патофизиологии), значительно расширилось благодаря исследованиям с использованием генно-модифицированных животных моделей.В этом обзоре мы опишем обновленный взгляд на контактную систему как на критический (пато) физиологический посредник коагуляции и воспаления.

Ключевые слова: Контактная система, коагуляция, воспаление, тромбоциты, инфекция, аутоиммунное заболевание, биология сосудов

Контактная система — это группа белков плазмы, которая реагирует на присутствие (пато) физиологических материалов и патогенов инвазии. Эта система состоит из трех сериновых протеиназ: факторов свертывания крови XII (FXII) и XI (FXI), прекалликреина плазмы (PK) и неферментативного кофактора высокомолекулярного кининогена (HK) [1].Эти белки плазмы были сгруппированы вместе как контактная система, поскольку они требовали контакта с искусственными отрицательно заряженными поверхностями для активации зимогена in vitro. При активации этой системы он может вызвать свертывание крови и отвечает за образование провоспалительных продуктов, таких как брадикинин. Эта система также называется системой калликреин-кинин плазмы и функционирует при некоторых воспалительных состояниях, таких как ревматоидный артрит (РА) и воспалительное заболевание кишечника (ВЗК) [2].

Исследования их биохимических и биологических свойств показали, что белки контактной системы взаимодействуют с рядом физиологических и патофизиологических систем. Биологическая роль контактной системы заключается в инициировании и участии в патофизиологических ответах на повреждение, в основном в процессах коагуляции и воспаления. Было показано, что активация этой системы вовлечена в широкий спектр болезненных состояний человека, включая сепсис и эндотоксемию, ОРДС, ДВС, брюшной тиф, пятнистую лихорадку Скалистых гор, болезнь Крона, трансфузионные реакции, отторжение почечного аллотрансплантата, нефротический синдром и т. Д. наследственный ангионевротический отек и при экстракорпоральном кровообращении [1].В моделях сепсиса, артрита и энтероколита на животных ингибиторы ферментов контактных факторов модулируют гипотензию, воспаление или увеличивают выживаемость, что предполагает участие этой системы в защите хозяина и врожденном иммунитете [3]. Контактная система эволюционно консервативна (дефицит контактных факторов очень редок), и активация контактной системы была связана с различными типами заболеваний человека, однако в настоящее время все еще остается загадкой, какова ее физиологическая функция у человека.За последние 10 лет, благодаря исследованиям с использованием генно-модифицированных моделей животных, наше понимание контактной системы, особенно ее физиологии и патофизиологии, значительно расширилось. В этом обзоре мы сначала опишем молекулярные и клеточные механизмы, которые управляют активацией контакта на нефизиологических материалах. Далее мы суммируем ключи, связывающие контактную систему с коагуляцией и воспалением при здоровье и болезни, и обсудим недавние результаты фундаментальных и клинических исследований о вкладе контактной системы в сердечно-сосудистые, инфекционные, воспалительные и аутоиммунные заболевания, а также их потенциал быть мишенью для лечения как тромботических, так и воспалительных заболеваний.

Активация контактной системы на основе сборки

В плазме циркулирует около 75% ПК, нековалентно связанного с HK в соотношении 1: 1, в то время как остальные ПК циркулируют свободно. Помимо PK, HK образует гетеродимер с фактором XI, и PK, и FXI связаны с поверхностью через HK и имеют общий консервативный сайт связывания HK. Неферментный кофактор HK отвечает за связывание с отрицательно заряженными поверхностями и сборку этих белков, образуя комплекс [1]. Как только FXII связывается с поверхностями, он претерпевает конформационные изменения, чтобы стать автоактивируемым (автоактивация), активированный FXIIa катализирует активацию PK.Между тем, FXII становится все более восприимчивым к расщеплению плазменным калликреином (PK) и сам активируется FXII (FXIIa). Активированный калликреин плазмы превращает FXII в FXIIa (трансактивация), тем самым образуя петлю обратной связи активации, которая преодолевает инактивацию калликреина и FXII их противоположными ингибиторами, такими как ингибитор C1-эстеразы. В отсутствие фактора XII прекалликреин не активируется на искусственной поверхности. Именно из-за этого открытия эта система называется контактной системой.На ранней фазе контактной активации способность независимого связывания HK с поверхностью ограничена. Однако после активации PK и FXII одноцепочечный HK может расщепляться на двухцепочечный HKa и высвобождать брадикинин. По сравнению с HK, HKa обладает большей способностью связываться с поверхностями и провоспалительным действием [4]. Более того, фактор XI активируется в комплексе с HK и FXII, в результате чего инициируется внутренний путь коагуляции. Вся указанная выше информация собрана из наблюдений in vitro, то, как контактная система активируется in vivo, не было хорошо охарактеризовано.

Молекулярно-опосредованная сборка и активация контактной системы

Контактная система в основном известна своей активацией отрицательно заряженными молекулярными поверхностями, такими как каолин, стекло, диоксид кремния, эллаговая кислота, сульфат декстрана, гиперсульфатированный хондроитинсульфат и наночастицы [1] . Хотя это множественные нефизиологические контактные активаторы, эта реакция формирует основу для анализа активированного частичного тромбопластинового времени свертывания (АЧТВ). Этот анализ обычно используется для оценки дефектов внутреннего пути коагуляции, таких как гемофилия A и B.Недавние исследования выявили эндогенные активаторы контактной системы, такие как полифосфат, коллаген, неправильно свернутые белковые агрегаты, липополисахариды (ЛПС), гликозаминогликаны и нуклеиновые кислоты [5]. Совсем недавно мы сообщили, что фосфатидилсерин может также служить активатором контактной системы in vivo [4].

Полифосфат

Полифосфат был первоначально идентифицирован в клетках немлекопитающих, но позже было показано, что он обогащен плотными тромбоцитами гранулами [6]. Полифосфат может высвобождаться из активированных тромбоцитов и может управлять активацией контактной системы [6].Помимо тромбоцитов, бактерии, такие как Escherichia coli , Vibrio cholerae , Corynebacterium diphtheriae , Haemophilus influenzae , содержат большое количество полифосфата, которое больше, чем у тромбоцитов, и содержит> 300 фосфатных единиц [7]. Бактериальный полифосфат активирует FXII и инициирует выработку брадикинина, который может способствовать хемотаксису лейкоцитов, болевым ощущениям и утечке сосудов [8].

Неправильно свернутые белковые агрегаты

Неправильно свернутые белковые агрегаты являются белком-активатором контактной системы [9].Исследование in vitro показало, что различные агрегаты неправильно свернутого белка, такие как агрегаты β-амилоидного пептида, непосредственно активируют FXII, что приводит к активации калликреина [9]. Соответственно, брадикинин вырабатывается в спинномозговой жидкости пациентов с болезнью Альцгеймера. У пациентов, страдающих системным амилоидозом, заболеванием, при котором циркулируют и откладываются агрегаты легких цепей иммуноглобулина, также наблюдается активация системы калликреин-кинин, вызванная FXII. Связывание FXII с неправильно свернутыми белковыми агрегатами отличается тем, что его связывание с отрицательно заряженными поверхностями опосредуется доменом фибронектина типа 1, а его связывание с агрегатами осуществляется через фибронектин типа 2, второй EGF и домены крингла.

Фосфатидилсерин (PS)

Недавно мы сообщили, что в очищенных системах HK специфически связывается с липосомами PS и расщепляется в присутствии PK и XII [4]. Узнавая PS, HK предпочтительно связывается с апоптотическими клетками, но не с жизнеспособными клетками, что опосредует фагоцитоз апоптотических клеток (эффероцитоз). Связывание HK с апоптотическими клетками вызывает его быстрое расщепление до двухцепочечной формы HK (HKa) и брадикинина. И H-цепь, и L-цепь HKa связаны с липосомами PS и апоптотическими клетками [4].

Коллаген

Фактор XII связывается с фибриллами коллагена различного происхождения, имеющими отрицательный заряд [10]. При воздействии плазмы коллаген I типа вызывает образование тромбина и свертывание плазмы, что зависит от активности FXII [10]. Кроме того, PK также связывается с коллагеном, тем самым ингибируя индуцированную коллагеном агрегацию тромбоцитов [11].

Опосредованная клеточной мембраной сборка и активация контактной системы

Физиологическая отрицательно заряженная поверхность для активации контактной системы фактически представляет собой сборку этих белков на биологических поверхностях, то есть клеточных мембранах [1].Специфические взаимодействия с биологическими мембранами эндотелиальных клеток, тромбоцитов, нейтрофилов и моноцитов указывают на то, что сборка и активация этой системы происходит в физиологической среде. Белки контактной системы могут собираться на клеточной мембране посредством связывания со своими рецепторами и гликозаминогликанами (ГАГ) протеогликанов, включая гепарансульфат (HS) и хондроитинсульфат (CS) [12,13]. Детальные исследования белков контактной системы, взаимодействующих с клетками, привели к пониманию того, насколько эта система физиологически активна.Опорным белком для сборки контактной системы на клеточных мембранах является HK [14]. На самом деле HK имеет три домена, которые соответствуют предполагаемому рецептору (рецепторам) кининогена на эндотелиальных клетках. Было показано, что три рецептора опосредуют связывание HK на поверхности клетки: uPAR, gC1qR и цитокератин-1 [1]. Мы сообщали, что HK связывается с uPAR через свой D5 в мембранных рафтах эндотелиальных клеток [15], а D3 и D5 HK стимулируют моноциты через uPAR и Mac1 для продукции цитокинов и хемокинов [16]. Помимо здоровых клеток, апоптотические клетки могут также обеспечивать поверхность для сборки и активации контактной системы [4].Недавно мы сообщили, что HK связывает uPAR на моноцитах / макрофагах и фосфатидилсерин на апоптотических клетках, что приводит к поглощению апоптотических клеток и сборке и активации контактной системы на апоптотической клеточной поверхности [4]. Поскольку эффероцитоз необходим для регуляции иммунных ответов и тканевого гомеостаза, участие HK в распознавании и связывании апоптотических клеток показывает новую роль контактной системы в «апоптотическом» врожденном иммунитете. GAG на клеточной поверхности открывают огромное количество специфических сайтов связывания для контактной системы.HK и FXII связываются с высоким сродством (K D ≤ 144 нМ) с эндотелиальными GAG в присутствии ионов цинка, тем самым модулируя образование BK, управляемое контактной системой [17].

Помимо эукариоцитов, прокариоциты, такие как бактерии и вирусы, также обеспечивают поверхности для сборки и активации контактной системы. Белки контактной системы связываются как с грамотрицательными бактериями, такими как Escherichia coli [18], так и с грамположительными бактериями, такими как Streptococcus pyogenes [19]. И D3, и D5 H HK участвуют в специфическом связывании с бактериями.Взаимодействие HK с бактериями напоминает связывание белков с эндотелиальными клетками, что приводит к активации контактной системы. Вирус, такой как вирус простого герпеса типа 1 (HSV1), также связан с контактной системой [20]. HSV1 связывается с FXII и опосредует его активацию в присутствии PK [20].

Активация контактной системы запускает как коагулянтный, так и воспалительный пути, а также инициирует протромботические и провоспалительные реакции через внутренний путь коагуляции (образование тромбина) и систему калликреин-кинин (производство кининов), соответственно.Как описано выше, биохимия контактной системы in vitro хорошо изучена за последние пять десятилетий, недавние исследования с использованием генетических манипуляций на мышах и изучение генетической изменчивости человека в факторах контактной системы позволили признать (пато) физиологическую роль контактная система в здоровье и в болезни.

Контактная система в пути коагуляции: активация внутреннего пути

Артериальное или венозное кровообращение может подвергаться тромбозу, вызывая инфаркт миокарда и инсульт или тромбоэмболию легочной артерии соответственно, что является основной причиной смерти в мире.Коагуляция необходима не только для поддержания целостности системы кровообращения (гемостаз), но также способствует образованию сгустка крови, ведущему к ишемии и повреждению тканей (тромбозу). Тромбоз, вызванный системой свертывания плазмы, приводит к образованию фибрина. Формирование фибрина инициируется двумя различными путями: воздействием крови на поврежденные стенки сосудов (внешние) или на поверхности активации крови (внутренние). При сборке на активирующей поверхности контактная система (FXII, PK и HK) активируется и стимулирует внутренний путь коагуляции путем активации FXI.Кроме того, внутренний путь коагуляции, опосредованный контактной системой, может пересекаться с внешним путем коагуляции. Например, контактная система коагуляции может быть инициирована либо контактной поверхностью в плазме у женщин на поздних сроках беременности, либо мицеллярным стеаратом, добавленным в плазму. С любой из контактных поверхностей увеличение коагулянтной активности фактора VII (VIIc) и FXIIa зависело от эффективности контактной поверхности [21]. Индуцированный стеаратом VIIc ингибировался на 60-70% в присутствии моноклональных антител против фактора IX и отсутствовал в плазме с дефицитом FXII.Добавление очищенного человеческого фактора XII к этой плазме восстановило увеличение VIIc. В FIX-дефицитной или FXI-дефицитной плазме индуцированное стеаратом увеличение VIIc было значительно снижено, что указывает на то, что в присутствии контактной поверхности активация контактной системы приводит к активации FVII [21]. В другом исследовании in vitro, в котором FXI-зависимый эффект на образование сгустка, инициированный тканевым фактором, FXI увеличивал активацию протромбина и скорость образования фибрина, выявляя роль фактора XI в распространении роста сгустка после инициации, зависимой от тканевого фактора [22 ].

В отличие от наблюдений за аномалиями внешних путей, клинические исследования показали, что у людей с дефицитом какого-либо фактора контактной системы нет дефекта кровотечения. Например, у г-жи Мэйм Уильямс отсутствовали обе формы кининогена. Как и г-н Хагеман (с дефицитом FXII), она умерла от тромбоэмболии легочной артерии [23], демонстрируя, что пациенты с дефицитом контактного фактора не защищены от тромботических расстройств. Хотя исследование уникальных пациентов с дефицитом или контактными факторами может способствовать нашему пониманию их функции, дефицит контактной системы редко встречается у людей, и ни одно контролируемое крупное клиническое исследование не коррелировало между дефицитом контактной системы и патофизиологией, такой как тромботическая / геморрагическая болезнь.Вместо этого роль контактной системы в тромбозе недавно была улучшена исследованиями с использованием моделей на животных. Хотя считалось, что контактная система не имеет значения для гемостаза, исследования на животных моделях показывают, что образование тромба нарушено у мышей с дефицитом. Таким образом, контактная система играет решающую роль в патологическом тромбозе при повреждении артерий и вен.

Фенотип дефицита контактного фактора при артериальном тромбозе

Дефицит FXII

Renne et al.являются первыми, кто сообщил, что у мышей с дефицитом FXII был дефект в образовании тромбов, вызванный различными методами травм, демонстрируя решающую роль FXII в образовании фибрина in vivo [24]. Восстановление FXII нулевых мышей с человеческим FXII восстановило пролонгированное aPTT, обнаруженное у нелеченных животных, и полностью восстановило способность инфузированных животных к образованию тромбов, предполагая аналогичную роль FXII у мышей и людей [24]. Действительно, контактная система очень консервативна среди видов млекопитающих.Кроме того, мыши с дефицитом гена FXII защищены от церебральной ишемии, связанной со сниженным образованием фибрина в микрососудистом русле ишемической ткани, что согласуется с важной ролью FXII в образовании тромба при тромбоэмболической болезни [25]. Мыши, лишенные FXI, аналогичным образом защищены от образования окклюзионного фибрина [26]. Таким образом, контактная система имеет решающее значение для патологического свертывания крови через активацию внутреннего пути [27]. В отличие от FXII и других белков контактной системы, дефицит FXI и нижестоящих FVIII и FIX приводит к легкому или тяжелому нарушению свертываемости крови, предполагая, что внутренний путь способствует амплификации тромбина после начальной стимуляции внешнего пути свертывания крови тканевым фактором. .

PK дефицит

PK представляет собой многофункциональную сериновую протеазу, участвующую в контактной активации коагуляции. Подобно дефициту у людей, PK-дефицитные мыши выявляли повышенное АЧТВ без увеличения времени кровотечения [28]. PK-дефицитные мыши были полностью защищены от окклюзии при индуцированном FeCl3 артериальном тромбозе по сравнению с гетерозиготами и однопометниками дикого типа [28], демонстрируя, что делеция прекалликреина в плазме предотвращает образование окклюзионных тромбов. Соответственно, лечение мышей антисмысловым олигонуклеотидом прекалликреина (ASO) может иметь положительный терапевтический индекс [29].

HK дефицит

HK играет важную роль в сборке контактной системы. В то время как ген кининогена человека имеет единственную копию, геном мыши содержит 2 гомологичных гена кининогена, Kng1 и Kng2, которые экспрессируются тканеспецифическим образом [20]. Меркулов и др. обнаружили, что mKng1 экспрессируется главным образом в печени, у мышей с дефицитом Kng1 отсутствовали плазменные HK и низкомолекулярный кининоген (LK), а также Delta-HK-D5, изоформа кининогена, лишенная домена 5 Kng1 [30].Подобно мышам с дефицитом FXII, мыши Kng1 — / — демонстрируют значительно увеличенное время до окклюзии сонной артерии после введения Rose Bengal и лазерно-индуцированного повреждения артерии [30], указывая тем самым, что HK в плазме вносит вклад в артериальный тромбоз у мышей. У мышей Kng1 — / — , подвергшихся временной окклюзии средней мозговой артерии, развились значительно меньшие инфаркты головного мозга и менее тяжелые неврологические нарушения без увеличения инфаркта-ассоциированного кровоизлияния [31].Этот защитный эффект сохранялся за счет уменьшения тромбообразования в ишемизированных сосудах и улучшения мозгового кровотока [31]. Поскольку Kng1 дефицитные мыши также обнаруживают менее серьезные повреждения гематоэнцефалического барьера и образование отеков, а местная воспалительная реакция снижается по сравнению с контролем, Kng1, по-видимому, играет важную роль в образовании патологических тромбов и воспалении, но незаменим для гемостаза [31].

Когда происходит повреждение артерии, активированные эндотелиальные клетки и открытые субэндотелиальные материалы, такие как коллаген, могут служить поверхностями для сборки и активации контактной системы, что приводит к генерации тромбина под действием FXIa и последующей активации тромбоцитов.Активированные тромбоциты могут дополнительно связывать факторы контактной системы, такие как FXII, опосредуя тромбоцит-зависимую прокоагулянтную активность [32]. Кроме того, тромбоциты выделяют полифосфат активатора FXII, что приводит к активации контактной системы и продукции фибрина на активированных поверхностях тромбоцитов в развивающемся тромбе. С другой стороны, FXIIa оказывает прямое действие на рецептор, активируемый протеазой, у мышей, обеспечивая ключ к активации тромбоцитов, управляемой контактной системой.

Венозный тромбоз

Тромбоз глубоких вен (ТГВ), который может вызвать тромбоэмболию легочной артерии, является опасным для жизни состоянием, но его механизм остается гораздо менее понятным, чем артериальный тромбоз.Генетические и фармацевтические исследования также демонстрируют, что контактная система играет решающую роль в венозном тромбозе. В модели повреждения FeCl3 у мышей с дефицитом PK наблюдается снижение тромбоза венозного тромбоза на 50% [28]. Селективный нокдаун прекалликреина у мышей с использованием технологии антисмысловых олигонуклеотидов (ASO) также приводит к антитромботическому фенотипу в модели тромбоза нижней полой вены, вызванной стенозом [29]. Точно так же истощение FXII или XI у кроликов с использованием ASO значительно ослабляет катетер-индуцированный венозный тромбоз [33].фон Брюль и др. обнаружили, что генетическое устранение FXII обеспечивает защиту от амплификации ТГВ у мышей [34]. В их модели тромборезидентные нейтрофилы связывают FXII и поддерживают его активацию за счет высвобождения внеклеточных ловушек нейтрофилов (NET) [35], что необходимо для последующего распространения DVT [34]. Когда полиР вводится внутривенно, он активирует FXII и приводит к летальной эмболии легочной артерии у мышей дикого типа, что предотвращается либо дефицитом FXII, либо ингибитором FXII, что указывает на критическую роль контактной системы [6,36].Рекомбинантный ингибитор контактной фазы Ixodes ricinus (Ir-CPI) представляет собой белок типа Kunitz, экспрессируемый слюнными железами клеща Ixodes ricinus, специфически взаимодействует с активированными человеческими FXIIa, FXIa и калликреином и продлевает АЧТВ in vitro [36]. Внутривенное введение Ir-CPI крысам и мышам вызывало дозозависимое снижение образования венозных тромбов [36].

Учитывая результаты, полученные на моделях мышей, которые показывают, что мыши с дефицитом белков контактной системы имеют нормальный гемостаз, как и их человеческие аналоги, образование фибрина, управляемое контактной системой, особенно важно для образования патологических тромбов, но не влияет на физиологический гемостаз.Это повышает вероятность того, что контактная система нацеливания может служить стратегией для профилактики или лечения патологического тромбоза, который имеет меньший риск тяжелого кровотечения, чем используемые в настоящее время антикоагулянты [33] . Например, избирательное истощение фактора XII антисмысловыми олигонуклеотидами ослабляет тромбоз катетера у кроликов [33]. Ингибирование активации FXII с помощью пептидного ингибитора PCK у мышей также обеспечивает защиту от церебральной ишемии, не вызывая чрезмерного кровотечения в месте хирургической травмы.Более того, рекомбинантный ингибитор на основе инфестина-4, который специфически воздействует на активность FXII, обеспечивает защиту от церебральной ишемии в экспериментальных моделях инсульта, хотя и не влияет на гемостатическую способность у мышей, получавших ингибитор [37].

Фибринолиз

Помимо активации внутреннего пути коагуляции, одно из последующих событий контактной системы включает фибринолиз. Активацию плазминогена in vivo можно воспроизводимо исследовать путем кратковременной инфузии дезамино-D-аргинина вазопрессина (DDAVP).Леви и др. обнаружили, что образование плазмина под действием DDAVP-стимула, что отражается циркулирующими комплексами плазмин-a2-антиплазмин, было ниже у пациентов с дефицитом FXII, чем у здоровых добровольцев, предполагая, что активация контактной системы произошла после инфузии DDAVP у здоровых добровольцев [38]. Активность активации плазминогена в нормальной плазме после инфузии DDAVP была только частично заблокирована (на две трети) специфическими антителами к активатору плазминогена тканевого типа (t-PA) и PA урокиназного типа.Остаточная активность могла быть подавлена ​​ингибирующим моноклональным антителом против FXII и отсутствовала у пациентов с дефицитом FXII [38]. Таким образом, активация контактной системы способствует фибринолизу. Нарушение фибринолитической активности у пациентов с дефицитом FXII может объяснить возникновение тромбоэмболических осложнений у этих пациентов. Пациенты с дефицитом фактора XI страдают аномальным кровотечением. У еврейских пробандов-ашкенази с тяжелым дефицитом FXI была повышенная доля эпизодов кровотечений после операций на участках с усиленным локальным фибринолизом, таких как мочевыводящие пути, или во время удаления зубов, что позволяет предположить, что FXI играет роль в подавлении фибринолиза [39 ].В соответствии с этой гипотезой системное включение антител против фактора XI привело к почти двукратному увеличению эндогенного фибринолиза по сравнению с контрольным антителом, что указывает на новую роль внутреннего пути коагуляции [40]. В статической модели коагуляции in vitro, в которой свертывание крови инициируется в рекальцифицированной цитратной плазме тканевым фактором, нанесенным на дно микротитровальных планшетов, когда образовывались более крупные сгустки (200–300 мкл плазмы), FXI не только увеличивал активацию протромбина и фибрина. скорость образования, но также ингибирует фибринолиз.Таким образом, помимо усиления коагуляции, инициированной тканевым фактором, FXI ингибирует фибринолиз для стабилизации образовавшегося сгустка [22].

Контактная система при воспалении

Контактная система широко участвует в воспалительной реакции и аутоиммунных заболеваниях. В течение долгого времени было известно, что активация этой системы производит мощный провоспалительный нонапептид брадикинин (BK; Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg) посредством расщепления HK посредством PK. Таким образом, контактная система была также названа плазменной калликреин-кининовой системой (ККС).Брадикинин и родственные кинины действуют на два типа рецепторов, обозначенных как B1R и B2R, оба из которых являются рецепторами, связанными с G-белком. B2R конститутивно экспрессируется в различных сосудистых и несосудистых клетках и быстро десенсибилизируется. B1R индуцируется воспалительными цитокинами и устойчив к десенсибилизации. Эти рецепторы брадикинина участвуют в регуляции различных физиологических и патологических процессов. Способ действия кининов основан на взаимодействиях между кининами и их специфическими рецепторами, что может привести к активации нескольких систем вторичных мессенджеров.Во время воспалительных реакций активированные лейкоциты и эндотелиальные клетки экспрессируют B1R, который чувствителен к пептидам, производным от брадикинина. Когда кинин B2R активируется, проницаемость сосудов увеличивается, в том числе за счет NO-индуцированного расслабления периваскулярных гладкомышечных клеток. Имеются данные о том, что существует постоянное FXII-зависимое образование брадикинина in vivo, поскольку уровни брадикинина снижены на 50% у мышей с дефицитом FXII. BK быстро разлагается рядом пептидаз, включая ангиотензинпревращающий фермент.В результате терапевтическое нацеливание этой пептидазы повышает уровни BK и считается частично ответственным за кровооснижающие эффекты этой широко используемой терапии.

Инфекционные болезни и сепсис

Позвоночные хозяева контролируют инфекцию путем быстрой мобилизации растворимых и клеточных микробицидных систем, которые уничтожают вторгающиеся патогены. Активация контактной системы является основной частью систем защиты организма-хозяина плазмы и играет решающую роль в качестве первой линии защиты организма от патогенов.Растущее число исследований показало, что контактная система важна для защиты хозяина от инфекции, вызываемой бактериями, паразитическими простейшими и вирусами [20,41,42]. Как упоминалось выше, бактерии могут активировать контактную систему непосредственно посредством физического взаимодействия или косвенно посредством высвобождения, например протеаз и полиР. Подобно клеточной поверхности белки контактной системы связываются с бактериями, непосредственно опосредуя сборку и активацию контактной системы на бактериальной поверхности [43]. Протеиназы, секретируемые бактериями, такими как стафофаины, выделяемые золотистым стафилококком, непосредственно расщепляют HK.Некоторые протеиназы, такие как Porphyromonas gingivalis, опосредованно расщепляют HK путем протеолитической активации FXII или PK [44]. Полифосфат из бактерий также активирует FXII, инициирует образование BK и BK-опосредованную утечку из сосудов и вызывает болевые ощущения. Активация контактной системы способствует защите хозяина от бактериальной инфекции [43]. И калликреин, и FXIIa активируют систему комплемента, что приводит к уничтожению бактерий. Брадикинин может привлекать нейтрофилы и макрофаги к месту инфекции и активировать врожденные сигнальные клетки через путь B2R рецептора брадикинина [45].Однако постоянная активация контактной системы, управляемая бактериями, может привести к патологическим уровням кининов в плазме крови одновременно с потреблением контактных факторов. У пациентов обильная продукция BK может вызывать гипотонию и сосудистую утечку, вызывая неблагоприятные эффекты и способствуя полиорганной недостаточности. Действительно, у пациентов с тяжелым сепсисом кининовая система активируется, что подтверждается повышенным уровнем брадикинина в плазме и потреблением прекалликреина и FXII. Однако в двойном слепом рандомизированном многоцентровом исследовании антагонист B2R не показал улучшения результатов у пациентов с синдромом системного воспалительного ответа и сепсисом [46].Этот результат отражает сложность роли контактной системы в воспалительных каскадах.

Активация контактной системы также участвует в заражении паразитами. Trypanosoma cruzi связывает HK и расщепляет HK с помощью крузипаина с высвобождением брадикинина, количество которого увеличивается до 35 раз в присутствии гепарансульфатных протеогликанов [47]. Освободившиеся кинины активируют врожденный иммунитет, сильно стимулируя созревание дендритных клеток через B2R. Однако избыток брадикинина приводит к стойкому паразитизму в отечных тканях.Недавнее исследование показало, что активация контактной системы также важна для индуцированной вирусом проницаемости эндотелиальных клеток [48]. Хантавирусная инфекция вызывает утечку из сосудов из-за изменений эндотелиального барьера. Инкубация белков плазмы с инфицированными хантавирусом эндотелиальными клетками приводит к расщеплению HK, увеличению ферментативной активности FXIIa и калликреина и высвобождению брадикинина, что приводит к резкому увеличению проницаемости эндотелиальных клеток [45]. Другой вирус HSV1 напрямую связывается с FXII и опосредует его активацию в присутствии PK.Ингибитор активированного FXII, анти-FXII, анти-калликреин и анти-FXI Abs ингибируют свертывание, инициированное HSV1 [20]. Таким образом, вирус может запускать и усиливать коагуляцию через фазу контакта и внутренний путь, предполагая дополнительный механизм, который способствует патологии сосудов при вирусной инфекции.

Ревматоидный артрит (РА)

Воспалительная реакция при артрите состоит из острой фазы с отеком, болью и миграцией нейтрофилов, которые, как известно, связаны с активацией калликреина плазмы и высвобождением брадикинина.У пациентов с РА повышенные уровни калликреина и брадикинина в плазме обнаруживаются в синовиальной жидкости и плазме и положительно коррелируют со степенью боли в суставах и воспаления. Экспрессия рецептора брадикинина также увеличивалась в циркулирующих и синовиальных нейтрофилах пациентов с РА. Представление о том, что KKS играет важную роль в патогенезе артрита, подтверждается наблюдениями на животных моделях. Крысы Lewis имеют мутацию в HK (S511N), что делает его чувствительным к расщеплению калликреином плазмы, введение пептидогликана — полисахарида (PG-PS) полимеров клеточной стенки стрептококка вызывает системный воспалительный ответ, включая артрит, у крыс Lewis, но не у других линий, таких как как крысы Buffalo и Fischer.Наряду с синовитом и эрозией суставов у крыс Lewis наблюдается снижение прекалликреина и HK в плазме, вероятно, из-за потребления белков-предшественников после активации KKS. Специфический ингибитор калликреина предотвращает артрит и системные осложнения в модели PG-PS [49]. Штамм крыс Brown-Norway-Katholiek (B / N / Ka) имеет серьезный дефицит обоих кининогенов плазмы (HK и LK) из-за единственной точечной мутации Ala163Thr, которая приводит к нарушенной секреции кининиогена из печени.Крысы с дефицитом кининогена на генетическом фоне Льюиса демонстрируют ослабленный острый и хронический воспалительный артрит [50], демонстрируя, что HK плазмы является ключевым медиатором воспалительных заболеваний.

Хотя эти экспериментальные и клинические наблюдения демонстрируют, что KKS играет решающую роль в патогенезе артрита, молекулярные и клеточные механизмы, посредством которых активация KKS опосредует артрит, остаются неизвестными. Недавно мы сообщаем, что ингибирование калликреина плазмы улучшает артрит на двух моделях крыс Льюиса, модели PG-PS и модели индуцированного коллагеном артрита, эффект калликреина плазмы, вероятно, осуществляется через брадикинин [51].Брадикинин имеет два рецептора, конститутивно экспрессируемый B2R и индуцибельный B1R, оба относятся к рецепторам, связанным с G-белком. Недавнее исследование Song et al. продемонстрировали, что дефицит B2R не ослабляет артрит на мышиной модели артрита, индуцированного антителами против коллагена (CAIA) [52]. Однако, используя ту же модель CAIA, мы обнаружили, что двойной дефицит B1R и B2R значительно ингибирует развитие и тяжесть CAIA [53]. Снижение уровня HK в плазме наблюдалось на ранней стадии CAIA [53], что свидетельствует об активации KKS и генерации брадикинина в острой фазе заболевания.Эти наблюдения предоставляют первое генетическое свидетельство, показывающее, что брадикинин имеет решающее значение в патогенезе CAIA, а B1R, вероятно, является ключевым рецептором, который опосредует провоспалительный эффект брадикинина при артрите.

Функция рецепторов брадикинина при артрите кажется универсальной, включая локальную ткань суставов и циркулирующие воспалительные клетки. Во-первых, компоненты KKS могут попадать в синовиальную суставную щель либо путем транссудации из плазмы, либо из дегранулирующих нейтрофилов, хемотаксически привлеченных в синовиальную оболочку.Чрезмерное высвобождение кининов в синовиальных тканях может стимулировать синтез второй волны провоспалительных медиаторов (IL-1β, IL-6, простагландины, лейкотриены и гистамин) для усиления воспалительного заболевания суставов. Повышенная экспрессия рецепторов брадикинина в суставах может увеличить выработку цитокинов. Во-вторых, повышенная экспрессия рецептора брадикинина в циркулирующих моноцитах может усиливать системное воспаление и их перемещение в воспаленную синовиальную ткань. Экспрессия B1R в CAIA может быть индуцирована провоспалительными цитокинами, такими как IL1β, IL-6, и, вероятно, происходит как часть провоспалительного механизма обратной связи.Дефицит B1RB2R значительно ингибировал экспрессию мРНК IL-1β и IL-6, но не экспрессию мРНК TNFα, что позволяет предположить, что рецепторы брадикинина по-разному регулируют экспрессию этих цитокинов, и их роль в патогенезе CAIA, по крайней мере частично, заключается в регуляции ИЛ-1β и ИЛ-6.

Клинические и экспериментальные наблюдения показали, что синовиальная неоваскуляризация является критическим компонентом прогрессирования заболевания при РА [54,55]. Растет количество доказательств, указывающих на то, что эндотелиальные клетки-предшественники костного мозга (EPC) участвуют в синовиальной неоваскуляризации при артрите [56,57].Таким образом, то, как EPC попадают в воспаленную синовиальную оболочку и участвуют в синовиальной неоваскуляризации, становится важным вопросом. Недавно мы продемонстрировали, что HKa регулирует функции EPC in vitro [58,59], показывая связь между активацией KKS и биологией EPC. В модели артрита на грызунах мы обнаружили другую роль KKS в функции самонаведения EPCs при артрите [51]. В модели артрита на крысах Льюиса EPC привлекаются к воспаленной синовиальной оболочке и образуют новые сосуды, которые блокируются специфическим ингибитором калликреина плазмы; Брадикинин стимулирует трансэндотелиальную миграцию EPCs путем селективной активации экспрессии рецептора хоминга C-X-C мотива рецептора 4 (CXCR4) [51].Наше исследование предоставляет новые доказательства того, что активация KKS связана с синовиальным рекрутированием EPC в острой фазе артрита, EPC, вероятно, являются новой мишенью для брадикинина в условиях острого артрита. Множественная функция контактной системы при артрите демонстрирует, что терапевтические подходы, направленные на активацию KKS, имеют значительный потенциал при артрите.

Воспалительное заболевание кишечника (ВЗК)

ВЗК — это группа воспалительных состояний толстой и тонкой кишки, основные типы которых включают язвенный колит (ЯК) и болезнь Крона (БК).Активация KKS в плазме наблюдалась у пациентов с ВЗК [60]. У пациентов с активным язвенным колитом наблюдалось значительное снижение уровней прекалликреина, высокомолекулярного кининогена и ингибитора С1 в плазме по сравнению с контрольной группой. Уменьшение количества компонентов KKS является результатом потребления при активации. Активация KKS может опосредовать воспаление в активной фазе язвенного колита. У пациентов с болезнью Крона уровни прекалликреина, фактора XI, HK и его расщепленной формы в плазме были нормальными.Однако у них были значительно более высокие уровни антигена и функционального ингибитора Cl. Необнаруживаемая активация контактной системы в периферической крови может быть связана с высокими уровнями в плазме Cl-ингибитора, важного ингибитора контактной системы в кровообращении [61]. Белки B2R и B1R экспрессируются в эпителиальных клетках нормального кишечника и в клетках пациентов с ЯК и БК. Белок B1R локализован в макрофагах в центре гранулем при CD. Экспрессия белка B2R в верхушках энтероцитов в базальной области и внутриклеточно в воспалительной ткани сходна с нормальной тканью.Напротив, белок B1R локализован в базальной области энтероцитов в нормальном кишечнике, но в апикальной части энтероцитов в воспаленной ткани. По сравнению с нормальным контролем, белок B1R значительно повышен как в активном, так и при ЯК кишечнике [61]. У пациентов с активным ЯК мРНК B1R значительно выше, чем мРНК B2R. Однако у неактивных пациентов с ЯК мРНК B1R и B2R экспрессируются сравнительно. Таким образом, повышенная экспрессия гена и белка B1R при активной ВЗК обеспечивает структурную основу важной роли брадикинина в хроническом воспалении и может отражать воспаление кишечника.

Роль KKS при ВЗК была выявлена ​​исследованиями с использованием ингибиторов калликреина, антагонистов брадикинина или дефицита кининогена. Кинетика воспаления у инбредных крыс Lewis, которым вводили PG-PS, коррелирует с активацией контактной системы. Крысы Lewis имели двухфазное течение энтероколита. Потребление белков-предшественников PK и HK крысами Lewis указывает на активацию системы контакта с плазмой и тесно коррелирует с хроническим воспалением кишечника. В другой модели энтероколита, индуцированного индометацином, у крыс наблюдалась активация KKS, проявляющаяся в значительном снижении функциональных уровней прекалликреина и HK в плазме, а также в результате расщепления HK [62].Поскольку активация KKS происходит в связи с повреждением кишечника, независимо от запускающего агента, можно предположить, что активация этой системы является неотъемлемой частью воспаления кишечника у генетически восприимчивых хозяев. Ингибирование калликреина в плазме значительно уменьшало острое воспаление кишечника и более резко уменьшало рекрутирование тканевых гранулоцитов. Более того, в модели PG-PS IBD дефицит HK модулирует хроническое воспаление кишечника [63]. Эти результаты указывают на важность контактной системы при хроническом энтероколите и системном воспалении.

Недавние исследования с использованием модели ВЗК на мышах пролили свет на механизм, лежащий в основе роли контактной системы в патогенезе ВЗК. Колит, вызванный 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислотой (TNBS), связан с повреждением тканей, инфильтрацией нейтрофилов, которая может быть уменьшена селективным антагонистом B1R SSR240612 и дефицитом B1R [64]. Хотя эти результаты предполагают роль B1R в патогенезе ВЗК, этот эффект кажется модельно-специфичным. В модели колита, индуцированного декстрансульфатом натрия (DSS), колит значительно обострялся у мышей B1R — / — по сравнению с мышами дикого типа.Более того, лечение селективным антагонистом B1R, DALBK или SSR240612, не имело эффекта на DSS-индуцированный колит [64]. Напротив, селективный антагонист B2R предотвращал обострение колита у мышей B1R — / — . Экспрессия мРНК B2R была значительно повышена в ткани толстой кишки мышей B1R — / — после введения DSS. Таким образом, обострение DSS-индуцированного колита у мышей, лишенных B1R, происходит из-за компенсаторной активации B2R. Хотя это исследование предполагает, что B2R является основным рецептором, опосредующим роль брадикинина в IBD, мыши B2R — / — не защищены от заболевания в той же модели DSS [65].Таким образом, роль брадикинина и специфическое участие двух его рецепторов в патогенезе ВЗК очень сложна, требуется дополнительная работа для оценки их динамического взаимодействия и особого участия в развитии и прогрессировании заболеваний.

Тромбоз и воспаление являются отличительными чертами различных повреждений тканей, не поддающихся терапевтическому вмешательству. Поскольку контактная система играет важную роль в обоих процессах, она во многих отношениях представляет собой интерфейс между тромботическим и воспалительным контурами и является важным медиатором развития повреждения тканей.Конкретная роль контактной системы в обоих процессах и их перекрестных помех требует дальнейших исследований.

Контактная активация — обзор

Кровь реагирует со всеми неэндотелиальными поверхностями. Биоматериалы для контакта с кровью предназначены для минимизации этой реакции, чтобы быть максимально биосовместимыми с живыми тканями и клетками, хотя совершенно инертный, нетромбогенный материал остается неуловимым. Реакция между кровью и биоматериалами сложна и постоянно меняется.Он начинается с немедленной адсорбции белков плазмы на поверхности. 1 , 2 Фибриноген является основным белком, но также адсорбируются альбумин, фибронектин, комплемент и другие. Адсорбция фибриногена привлекает и активирует фагоциты, такие как макрофаги и нейтрофилы. 3 Тромбоциты также прикрепляются к адсорбированным белкам; 4 конформационное состояние белка 5 и количество адсорбированного белка 6 , как известно, являются медиаторами адгезии тромбоцитов.Контактный белок, фактор XII, также активируется, запуская ряд процессов. Существует множество превосходных глав в книгах 1 , 7–9 и отдельных исследований 10–16 , в которых подробно описывается поверхность раздела кровь-биоматериал, активация контакта с кровью и последующий системный воспалительный ответ на CPB. Для целей этой главы обобщены наиболее важные элементы, чтобы проиллюстрировать биохимические и физиологические процессы, на которые оказывает положительное влияние миниатюризация экстракорпорального кровообращения.

4.2.1 Активация контакта с кровью и системная воспалительная реакция на CPB

Контактная активация крови искусственными поверхностями контура CPB (насосы, оксигенаторы, теплообменники, резервуары, трубки, фильтры) стимулирует воспалительную реакцию всего тела . 11–14 Воспалительная реакция характеризуется аномалиями сосудистого тонуса, нарушением водного баланса, повышенной проницаемостью сосудов и дисфункцией крови и органов. 8 У большинства пациентов воспалительная реакция, возникающая во время CPB, имеет ограниченный клинический эффект, но некоторые страдают экстремальной реакцией, известной как синдром системной воспалительной реакции.(SIRS) Воспалительная реакция во время CPB очень сложна и включает ряд взаимосвязанных процессов. Это результат не только контактной активации CPB, но и хирургического инсульта, ишемии-реперфузионного повреждения и эндотоксемии. При контакте с обходным контуром активируется ряд различных компонентов крови, включая каскад коагуляции, калликреин-кинин, фибринолитическую систему и систему комплемента, тромбоциты, цитокины и лейкоциты.

Основным агентом, запускающим контактную активацию инородных поверхностей CPB, является фактор XII (фактор Хагемана), который активируется при контакте крови с неэндотелиальными поверхностями, 1 , 8 , 9 и запускает коагуляционный, фибринолитический и калликреиновый каскады.Некоторое свертывание крови происходит, несмотря на гепаринизацию, и наблюдаются повышенные уровни плазмина фибринолитического агента. В системе калликреина вырабатывается брадикинин, который увеличивает проницаемость сосудов, вызывает сокращение гладкомышечных клеток и, кроме того, активирует фактор Хагемана и плазминоген. Эти процессы тесно связаны и взаимозависимы, и на рис. 4.1 суммированы каскады, которые активируются контактной активацией между кровью и инородными поверхностями контура CPB.

4.1. Системы, подверженные воздействию CPB, их взаимодействия и результаты.

CPB активирует систему комплемента, в основном альтернативным путем, который инициируется контактом крови с инородными поверхностями. 15 , 16 Некоторая активация классического пути также происходит на границах раздела кровь-воздух контура CPB. 15 Активация комплемента приводит к продукции анафилатоксинов C3a и C5a, которые вызывают сужение сосудов и повышенную проницаемость сосудистых капилляров у пациентов с CPB, на более высоких уровнях, чем у пациентов, перенесших кардиохирургию без CPB. 16 Уровни C3a повышаются во время CPB, достигают пика в конце обхода и возвращаются к нормальным уровням через 48 часов. C5a, который активируется альтернативным путем, прикрепляется к сайтам связывания нейтрофилов и вызывает адгезию нейтрофилов к эндотелию сосудов. 17 Таким образом, активация системы комплемента чужеродными поверхностями контура CPB приводит к повреждению клеток, активации эндотелиальных клеток и лейкоцитов, высвобождению гистамина, повышенной проницаемости сосудов и генерализованной воспалительной реакции. 9 , 14 .

CPB вызывает активацию каскадов свертывания и фибринолиза, запускаемых активацией фактора XII. Повышенная фибринолитическая активность приводит к увеличению времени кровотечения и кровопотере, а также к снижению активности тромбоцитов. Тромбин, продукт процесса свертывания крови, активирует эндотелиальные клетки для экспрессии селектинов и молекул адгезии, что способствует привлечению и адгезии лейкоцитов. Наряду с нейтрофилами, моноцитами и макрофагами эндотелиальные клетки играют центральную роль в воспалительной реакции на CPB.Эндотелиальные клетки активируются тромбином, фактором комплемента C5a и провоспалительными цитокинами.

Нейтрофилы играют центральную роль в опосредовании системного воспалительного ответа на CPB. Они активируются системой дополнения, 18 , а также калликрейном. 19 , 20 Содержащиеся в своих гранулах нейтрофилы содержат протеолитические и цитотоксические ферменты, хемокины, цитокины и метаболиты арахиндоната. 1 Активированные нейтрофилы высвобождают цитотоксические ферменты, включая эластазу, миелопероксидазу и лактоферрин, 19–22 при дегрануляции.Ферменты участвуют в разрушении тканей вместе со свободными радикалами кислорода. Активация лейкоцитов во время CPB оценивалась путем измерения уровней таких ферментов. 23–26 Эластаза — мощный фермент; он может повредить эндотелий за счет расщепления коллагена, эластина, фибронектина и протеогликанов, составляющих его структуру, и оказывает влияние на коагуляцию и тромбоциты, что может привести к некоторым геморрагическим осложнениям, возникающим в результате CPB.Эластаза связывается с α1-антипротеазой, и уровни этого комплекса действуют как маркер дегрануляции нейтрофилов и воспалительного ответа. Активированные нейтрофилы также вызывают повреждение эндотелия, высвобождая супероксиды и протеолитические ферменты.

Цитокины играют ключевую роль посредника в воспалительной реакции на CPB. Они являются важными маркерами воспаления, и видно, что концентрации некоторых из них увеличиваются во время и после CPB. 25 , 27–30 Ряд различных цитокинов важны на различных стадиях CPB; каждый цитокин имеет разные стимулы и действия.Важная функция цитокинов состоит в том, что они активируют другие цитокины, создавая каскад реакций. В общих чертах, каскад цитокинов стимулируется эндотоксином и элементами системы комплемента и приводит к выработке молекул адгезии, которые способствуют прикреплению нейтрофилов к эндотелию и последующей миграции, дегрануляции и высвобождению протеолитических ферментов. Ниже описаны конкретные действия некоторых из наиболее важных цитокинов.

TNF-α происходит из макрофагов, и его высвобождение стимулируется белком комплемента C5a, IL-1β и эндотоксином. 8 , 14 Ключевые действия TNF-α заключаются в стимуляции дегрануляции нейтрофилов и экспрессии молекул адгезии лейкоцитов. Уровни TNF-α в плазме значительно увеличиваются через 2 часа после шунтирования, что указывает на ключевую роль в реакции острой фазы, и снова через 18-24 часа. 14 IL-1 является ключевым интерлейкином из-за его многочисленных взаимодействий с другими клетками воспалительного ответа. IL-1 вырабатывается моноцитами и макрофагами в ответ на стимуляцию TNF-α, эндотоксина и анафилатоксинов C3a и C5a системы комплемента.Уровни IL-1 повышаются после CPB, достигая максимума через 24 часа. 31 IL-6 представляет собой цитокин, который синтезируется моноцитами, эндотелиальными клетками и фибробластами в ответ на стимуляцию TNF-α, IL-1 и эндотоксином, 14 и координирует «реакцию острой фазы». 8 , 14 Во время CPB уровни IL-6 повышаются во время повторного нагревания, достигают пика через 24 часа после завершения обхода и возвращаются к норме в течение 48 часов. 32–34 IL-8 высвобождается из фибробластов, эндотелиальных клеток и лейкоцитов под влиянием IL-1 и TNF-α, и его основная роль заключается в качестве мощного хемоаттрактанта нейтрофилов.Уровни IL-8 повышаются при повторном нагревании, достигая пика через 1–3 часа и все еще повышается через 24 часа. 35 Высвобождение IL-8 коррелирует с длиной CPB и временем пережима. 28 TNF-α, IL-1, IL-6 и IL-8 являются провоспалительными цитокинами. Также производятся противовоспалительные цитокины; IL-10 является одним из наиболее широко изученных. Во время CPB уровни IL-10 повышаются вскоре после начала обхода и возвращаются к нормальным уровням примерно через 24 часа после CPB. 36–38 Противовоспалительное действие IL-10 включает уменьшение адгезии лейкоцитов к эндотелиальным клеткам, 39 и ограничение продукции провоспалительных цитокинов. 40 , 41

CPB связан с временным дефицитом количества и функции тромбоцитов. 9 Воздействие искусственных поверхностей контура CPB является значительным фактором этого нарушения, 42 , 43 и гемодилюция также является фактором. 44 Уровни циркулирующих тромбоцитов снижаются на 30–50% во время CPB, 44 с прилипанием к контуру, механическими повреждениями и накоплением в органах, на которые приходится большая часть потребления.Помимо потребления тромбоцитов, также наблюдаются морфологические изменения, 45 наряду с агрегацией тромбоцитов и конъюгацией между тромбоцитами и нейтрофилами. 46 Дисфункция тромбоцитов во время CPB приводит к нарушению гемостаза и может привести к кровотечениям в послеоперационном периоде. Активированные тромбоциты участвуют в стимулировании воспалительного ответа посредством выработки провоспалительных цитокинов, 47 , 48 , а также являются важными медиаторами адгезии и трансмиграции эндотелия нейтрофилов. 9

Что такое управление контактами? — Salesforce EMEA

1. Доступ к данным в реальном времени из любого места
В традиционной настольной CRM или системе управления контактами информация доступна только через рабочую станцию ​​с установленным программным обеспечением — людям приходится полагаться на устаревший моментальный снимок базы данных.

Облачное программное обеспечение CRM предоставляет самую последнюю информацию, которая доступна всем мгновенно с любого подключенного устройства в любом месте.Это связано с тем, что он использует многопользовательскую облачную архитектуру, что означает, что все пользователи и приложения используют общую инфраструктуру, которая поддерживается и обновляется централизованно.

2. Интеграция информации о клиентах из других источников

Когда клиент находится в центре облачной системы управления контактами, легче заполнить любые недостающие пробелы в нем, используя другие, совместимые источники.

Подключено к другим облачным источникам данных, таким как Data.com, система управления контактами может автоматически заполнять пропуски в информации о клиенте.

3. Интеграция социальной информации

Облако также можно легко использовать для анализа социальных взаимодействий и разговоров, которые ведут контакты в Facebook, Twitter, LinkedIn и других социальных сетях.

Есть ли у клиента проблема с продуктом, который он обсуждает с другими людьми? Подключенная система управления контактами может дать организациям представление обо всех этих взаимодействиях в режиме реального времени и заранее найти решение.

Но социальные сети выходят далеко за рамки решения вопросов поддержки и решения проблем, с которыми могут столкнуться любые контакты. Интегрируя социальные сети и управление контактами, легко увидеть, кто из них контактирует, с кем они разговаривают, кто являются ключевыми игроками и влиятельными лицами, с которыми в идеале следует связаться, а также указать, кто может представить их.

4. Умное сотрудничество с коллегами

Хотя продавцы часто являются амбициозными людьми, выработавшими личный стиль, который подходит им, когда дело доходит до подачи, продажи и заключения сделки, бывают случаи, когда бизнесу необходимо сплотиться как единая команда, чтобы заключить сделку.

Это особенно актуально, если:

  • сделка сложная
  • сделка находится под угрозой срыва
  • , главный представитель по работе с клиентами, не разбирается в некоторых ключевых аспектах сделки.

В такие моменты продавцам необходимо отбросить свое эго и найти способы умно работать вместе, дополняя друг друга своими сильными сторонами на благо всей команды. Расширенные CRM и контактные системы предназначены для поддержки именно такого рода сотрудничества.

Конечно, нет двух одинаковых сделок, поэтому менеджер по продажам должен решить, кто и какую роль лучше всего сыграет, чтобы добиться успеха или обеспечить долгосрочное обязательство. Это будет варьироваться в зависимости от учетной записи: тот, кто идеально подходит в качестве лидера отношений в одной учетной записи, может добиться большего успеха на стороне доставки с другой возможностью.

(PDF) Контактный путь свертывания и воспаления

Тромбоз при ишемии головного мозга без нарушения гемостаза. J Exp

Med.2006. 203 (3): 513–8. PMCID: 2118228.

26. Cheng Q, Tucker EI, Pine MS, Sisler I., Matafonov A, Sun MF, et al. Роль

-опосредованной фактора XIIa активации фактора XI в образовании тромба in vivo.

Кровь. 2010. 116 (19): 3981–9. PMCID: 2981546.

27. Ренне Т., Нисвандт Б., Гайлани Д. Внутренний путь коагуляции

необходим для стабильности тромба у мышей. Blood Cells Mol Dis.

2006; 36 (2): 148–51.

28. Берд Дж. Э., Смит П. Л., Ван X, Шумахер В. А., Барбера Ф., Ревелли Дж. П. и др.

Влияние дефицита калликреина в плазме на гемостаз и тромбоз у

мышей: мышиный ортолог по признаку Флетчера. Thromb Haemost.

2012; 107 (6): 1141–50.

29. Ревенко А.С., Гао Д., Кросби Дж. Р., Бхаттачарджи Г., Чжао С., Мэй С. и др.

Избирательное истощение прекалликреина в плазме или фактора XII свертывания крови подавляет тромбоз

у мышей без повышенного риска кровотечения. Кровь.

2011; 118 (19): 5302–11.

30. Меркулов С., Чжан В.М., Комар А.А., Шмайер А.Х., Барнс Э., Чжоу Й. и др.

Делеция гена 1 кининогена мыши (mKng1) вызывает потерю кининогена в плазме

и задерживает тромбоз. Кровь. 2008. 111 (3): 1274–81.

PMCID: 2214772.

31. Лангхаузер Ф., Гоб Э., Крафт П., Гейс С., Шмитт Дж., Бреде М. и др. Дефицит кининогена

защищает от ишемической нейродегенерации у мышей, уменьшая тромбоз

, повреждение гематоэнцефалического барьера и воспаление. Кровь. 2012; 120

(19): 4082–92. PMCID: 3543983.

32.Van Der Meijden PE, Van Schilfgaarde M, Van Oerle R, Renne T, ten Cate H,

Spronk HM. Микрочастицы, происходящие из тромбоцитов и эритроцитов, вызывают образование тромбина

через фактор XIIa. J Thromb Haemost. 2012. 10 (7): 1355–62.

33. Яу Дж. У., Ляо П., Фреденбург Дж. К., Стаффорд А. Р., Ревенко А. С., Мониа Б. П. и др.

Селективное истощение фактора XI или фактора XII антисмысловыми олигонуклеотидами

ослабляет тромбоз катетера у кроликов. Кровь. 2014. 123 (13): 2102–7.

34. von Brühl M-L, Stark K, Steinhart A, Chandraratne S, Konrad I, Lorenz M,

et al. Моноциты, нейтрофилы и тромбоциты взаимодействуют, чтобы инициировать и распространять венозный тромбоз у мышей in vivo. J Exp Med. 2012;

209 (4): 819–35.

35. Оемке С., Моргелин М., Хервальд Х. Активация контакта с человеком.

Система

на внеклеточных ловушках нейтрофилов. J. Врожденный иммунитет. 2009. 1 (3): 225–30.

36. Декрем Y, Рат Дж., Блазиоли В., Коши П., Роберт С., Бофейс Дж. И др.Ir-CPI, ингибитор контактной фазы коагуляции

из клеща Ixodes ricinus, ингибирует образование тромба

без нарушения гемостаза. J Exp Med. 2009; 206

(11): 2381–95.

37. Сюй И, Цай Т.К., Кастриота Дж., Чжоу Й., Хус Л., Йохновиц Н. и др. Ингибирование фактора XIIa

Инфестином-4: механизм действия in vitro и антитромботический эффект in vivo

. Thromb Haemost. 2014. 111 (4): 694–704.

38. Levi M, Hack CE, de Boer JP, Brandjes DP, xFc, ller HR, et al.Снижение фибринолитической активности, связанной с активацией контакта

у пациентов с дефицитом фактора XII

Еще одно доказательство роли контактной системы в фибринолизе in vivo. J

Clin Invest 1991; 88 (4): 1155–60.

39. Асакай Р., Чанг Д.В., Дэви Е.В., Селигсон У. Дефицит фактора XI у

евреев-ашкенази в Израиле. N Engl J Med. 1991. 325 (3): 153–8.

40. Миннема М.С., Фридрих П.В., Леви М., фон дем Борне П.А., Мосньер Л.О.,

Мейерс Дж.С. и др.Усиление тромболизиса яремной вены кролика путем нейтрализации

фактора XI. Доказательства in vivo роли фактора XI как фибринолитического фактора

. J Clin исследования. 1998. 101 (1): 10–4.

41. Фрик И.М., Бьорк Л., Хервальд Х. Двойная роль контактной системы в

бактериальных инфекционных заболеваниях. Thromb Haemost. 2007. 98 (9): 497–502.

42. Scharfstein J, Andrade D, Svensjö E, Oliveira AC, Nascimento CR. Kallikrein-

Кинин-система в экспериментальной болезни Шагаса: парадигма для исследования влияния воспалительного отека

на GPCR-опосредованные пути инвазии клеток-хозяев

by Trypanosoma cruzi.Frontiers Immunol. 2013; 3: 396.

43. Фрик И.М., Окессон П., Хервальд Х., Моргелин М., Мальмстен М., Нэглер Д.К. и др.

Контактная система — новая ветвь врожденного иммунитета, генерирующая

антибактериальных пептидов. EMBO J. 2006; 25 (23): 5569-78.

44. Имамура Т., Потемпа Дж., Пайк Р.Н., Трэвис Дж. Зависимость повышения проницаемости сосудов

от цистеиновых протеиназ в везикулах

Porphyromonas gingivalis. Заражение иммунной. 1995; 63 (5): 1999–2003.

PMCID: 173256.

45. Шарфштейн Дж., Андраде Д., Свенсьё Е., Оливейра А.С., Насименто ЧР. Система

калликреин-кинин в экспериментальной болезни Шагаса: парадигма к

Изучение влияния воспалительного отека на GPCR-опосредованные пути

инвазии клеток-хозяев Trypanosoma cruzi. Frontiers Immunol. 2013; 3: 396.

46. Фейн А.М., Бернард Г.Р., Крайнер Г.Дж. и др. Лечение тяжелого системного

синдрома воспалительного ответа и сепсиса новым антагонистом брадикинина

, дельтибантом (cp-0127): результаты рандомизированного двойного слепого плацебо-контролируемого исследования

.ДЖАМА. 1997. 277 (6): 482–7.

47. Лима APCA, Almeida PC, Tersariol ILS, Schmitz V, Schmaier AH, Juliano L,

et al. Гепарансульфат модулирует высвобождение кинина трипаносомой cruzi

за счет активности крузипаина. J Biol Chem. 2002. 277 (8): 5875–81.

48. Тейлор С.Л., Валь-Йенсен В., Коупленд А.М., Ярлинг П.Б., Шмальджон С.С.

Проницаемость эндотелиальных клеток во время хантавирусной инфекции включает фактор

XII-зависимую повышенную активацию калликреин-кининовой системы.

PLoS Pathog. 2013; 9 (7): e1003470. PMCID: 3715459.

49. ДеЛа Кадена Р.А., Ласкин К.Дж., Пиксли Р.А., Сартор Р.Б., Шваб Дж. Х., Бэк Н. и др.

Роль калликреин-кининовой системы в патогенезе воспаления, индуцированного стенкой бактериальной клетки.

. Am J Physiol. 1991; 260 (2 Pt 1): G213–9.

50. Сайнс И.М., Исордия-Салас I, Кастанеда Д.Л., Агелан А., Лю Б., ДеЛа Кадена Р.А.,

et al. Модуляция воспаления дефицитом кининогена на крысиной модели воспалительного артрита

.Ревматоидный артрит. 2005. 52 (8): 2549–52.

51. Дай Дж., Агелан А., Ян А., Зулуага В., Секстон Д., Колман Р. В. и др. Роль активации

калликреин-кининовой системы плазмы в синовиальном рекрутировании

эндотелиальных клеток-предшественников при экспериментальном артрите. Ревматоидный артрит.

2012; 64 (11): 3574–82. PMCID: 3477304.

52. Сонг Дж.Дж., Хван И, Чо К.Х., Гарсия М.А., Ким А.Дж., Ван Т.Х. и др. Плазма

карбоксипептидаза B подавляет воспалительные реакции при аутоиммунном артрите

.J Clin Invest. 2011. 121 (9): 3517–27.

53. Xie Z, Dai J, Yang A, Wu Y. Роль брадикинина в развитии артрита, индуцированного антителами против коллагена

. Ревматология (Оксфорд). 2014; 53

(7): 1301–6. PMCID: 4065007.

54. Szekanecz Z, Besenyei T, Szentpétery Á, Koch AE. Ангиогенез и

васкулогенез при ревматоидном артрите. Curr Opin Rheumatol. 2010; 22

(3): 299–306.

55. Тайру Н., Кириакидис С., Доусон П., Палеолог Э.Ангиогенез как терапевтическая мишень

при артрите в 2011 году: извлечение уроков из опыта колоректального рака

. Ангиогенез. 2011. 14 (3): 223–34.

56. Сильверман, доктор медицины, Haas CS, Rad AM, Arbab AS, Koch AE. Роль сосудистой молекулы 1 адгезии клеток

/ антигена очень поздней активации 4 в рекрутировании эндотелиальных клеток-предшественников

в синовиальную оболочку ревматоидного артрита. Артрит

Ревм. 2007. 56 (6): 1817–26.

57. Ругер Б., Гиуреа А., Ванивенхаус А. Х., Цехетгрубер Н., Холлеманн Д., Янагида

Г. и др.Клетки-предшественники эндотелия в синовиальной ткани пациентов с ревматоидным артритом и остеоартритом

. Ревматоидный артрит. 2004. 50 (7): 2157–66.

58. Wu Y, Dai J, Schmuckler NG, Bakdash N, Yoder MC, Complete CM, et al.

Расщепленный высокомолекулярный кининоген ингибирует образование трубок из

эндотелиальных клеток-предшественников посредством подавления матриксной металлопротеиназы 2.

J Thromb Haemost. 2010. 8 (1): 185–93.

59. Дай Дж, Чжу Х, Йодер М.К., Ву И, Колман Р.В.Расщепленный высокомолекулярный кининоген

ускоряет начало старения эндотелиальных клеток-предшественников

за счет индукции активных форм кислорода. Артериосклер Thromb Vasc Biol.

2011; 31 (4): 883–9.

60. Девани М., Куньо М., Векки М., Ферреро С., Ди Берардино Ф., Авесани Е.С. и др.

Активация калликреин-кининовой системы при болезни Крона: различия в кишечных

и системных маркерах. Am J Gastroenterol. 2002. 97 (8): 2026–2032.

61.Стадницки А., Пастуча Е., Новачик Г., Мазурек Ю., Плевка Д., Махник Г. и др.

Иммунолокализация и экспрессия кининовых рецепторов B1R и B2R в

воспалительных заболеваниях кишечника человека. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.

2005; 289 (2): G361-6.

62. Стадницки А., Сартор Р. Б., Джанардхам Р., Стадницка И., Адам А. А., Блейс-младший С. и др.

Активация системы калликреин-кининоген и рецепторы брадикинина (B2) в

индуцированный индометацином энтероколит у генетически восприимчивых крыс Льюиса.

Кишка. 1998. 43 (3): 365–74.

63. Исордия-Салас I, Пиксли Р.А., Ли Ф., Сайнс И., Сартор Р.Б., Адам А. и др. Дефицит кининогена

модулирует хроническое воспаление кишечника у генетически предрасположенных крыс

. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2002; 283 (1): G180–6.

64. Hara DB, Leite DFP, Fernandes ES, Passos GF, Guimarães AO, Pesquero JB,

et al. Актуальность активации рецептора кинина B1 на мышиной модели колита

.Br J Pharmacol. 2008. 154 (6): 1276–86.

65. Лу Ф., Фернандес С.М., Дэвис А.Е. Роль систем комплемента и контакта

в модели колита, индуцированного декстрансульфатом натрия: эффект ингибитора

C1 при воспалительном заболевании кишечника. Am J Physiol Gastrointest Liver

Physiol. 2010; 298 (6): G878–83.

Wu Thrombosis Journal (2015) 13:17 Стр. 9 из 9

Что такое управление контактами | Подробное определение управления контактами

Программное обеспечение для управления взаимоотношениями с клиентами

Инструмент CRM, как правило, объединяет вышеуказанные функции управления контактами с дополнительными функциями, которые помогают вашему бизнесу управлять своими отношениями и создавать отличное обслуживание клиентов.Это поможет организовать всю вашу маркетинговую и коммерческую деятельность с помощью таких функций, как автоматизация, маркетинг по электронной почте,
и трубопроводы.

Однако не все программные решения CRM предлагают одинаковые функции. Точные из них, которые у вас есть, обычно зависят от выбранного вами поставщика и плана.

Вот некоторые общие функции CRM:

Отслеживание взаимодействий с клиентами

Как и программное обеспечение для управления контактами, программное обеспечение CRM позволяет отслеживать ваши взаимодействия с клиентами, потенциальными и потенциальными клиентами.

Вы можете хранить электронные письма, сообщения поддержки или телефонные разговоры в записи для контакта. Большая часть этого происходит автоматически при правильной интеграции. Если вы используете автоматизацию маркетинга, вы даже можете записывать, как взаимодействовал клиент.
с вашими кампаниями.

Вот как это может быть полезно:

Представьте, что торговый представитель звонит с потенциальным клиентом. Вместо того, чтобы идти на встречу, не зная о клиенте, представитель может просто открыть запись CRM и увидеть подробный обзор всего, что компания знает о клиенте.Этот
ставит их в более удобное положение для успешного взаимодействия.

Поскольку программное обеспечение CRM доступно для всей организации, каждый в вашем бизнесе имеет доступ к одним и тем же данным о каждом клиенте.

Оценка лидов

Оценка лидов позволяет определить, кто из ваших контактов с наибольшей вероятностью купит ваш продукт, исходя из того, как они взаимодействуют с вашей маркетинговой кампанией. Каждый лид получает очки, когда выполняет определенные действия, такие как открытие писем, загрузка
ресурсы или посещение определенных страниц вашего сайта.

Тот, кто загрузил вашу электронную книгу, но никогда не открывал ее и не взаимодействовал с последующими электронными письмами, получит более низкий балл, чем тот, кто загрузил электронную книгу, подписался на веб-семинар, а затем посетил страницу с ценами на вашем веб-сайте.

Когда потенциальный клиент достигает заранее заданного балла, ваш отдел маркетинга может отправить его вашему отделу продаж, который начнет заключительный этап процесса преобразования. Это экономит время, поскольку торговые представители не тратят энергию на потенциальных клиентов, которые вряд ли конвертируются.

Автоматизация отдела продаж

Программное обеспечение CRM также имеет функции автоматизации отдела продаж, которые могут улучшить процессы отдела продаж и снизить вероятность ошибок.

Представьте, что потенциальный клиент запрашивает обратный звонок на вашем сайте. CRM может регистрировать эту информацию и предупреждать представителя о том, что им необходимо выполнить определенное действие. Когда представитель получает уведомление и звонит, он может отметить, что выполнил задачу в CRM.

Автоматизация отдела продаж не только гарантирует, что звонок по продажам совершается в нужное время, но также предотвращает получение потенциальным клиентам нескольких звонков от разных представителей, которые не знали, что кто-то уже предпринял какие-то действия.

Автоматизация маркетинга

Многие поставщики CRM включают программное обеспечение для автоматизации маркетинга, которое помогает вам установить
проводить эффективные маркетинговые кампании.