Содержание

Webof-sar.ru не работает сегодня только у меня? Статус Webof-sar.ru

Статус сервера

онлайн

Код состояния

200

Время отклика

1.605 sec

Узнайте, работает ли Webof-sar.ru в нормальном режиме или есть проблемы сегодня

Не открывается, не грузится, не доступен, лежит или глючит?

Самые частые проблемы Webof-sar.ru

Не определены.

Что делать, если сайт WEBOF-SAR.RU недоступен?

Если WEBOF-SAR.RU работает, однако вы не можете получить доступ к сайту или отдельной его странице, попробуйте одно из возможных решений:

Кэш браузера.

Чтобы удалить кэш и получить актуальную версию страницы, обновите в браузере страницу с помощью комбинации клавиш Ctrl + F5.

Блокировка доступа к сайту.

Очистите файлы cookie браузера и смените IP-адрес компьютера.

Антивирус и файрвол.
Проверьте, чтобы антивирусные программы (McAfee, Kaspersky Antivirus или аналог) или файрвол, установленные на ваш компьютер — не блокировали доступ к WEBOF-SAR.RU.

DNS-кэш.

Очистите DNS-кэш на вашем компьютере и повторите попытку доступа на сайт.
Смотреть видео-инструкцию  ↓

VPN и альтернативные службы DNS.

VPN: например, мы рекомендуем NordVPN.

Альтернативные DNS: OpenDNS или Google Public DNS.

Плагины браузера.

Например, расширение AdBlock вместе с рекламой может блокировать содержимое сайта. Найдите и отключите похожие плагины для исследуемого вами сайта.

Сбой драйвера микрофона

Быстро проверить микрофон: Тест Микрофона.

webof-sar.ru ▷ WebOf-SaR: Рекламный сервис


Errors

Malformed byte sequence: “d0”.

Malformed byte sequence: “e5”.

Malformed byte sequence: “ea”.

Malformed byte sequence: “eb”.

Malformed byte sequence: “e0”.

Malformed byte sequence: “ec”.

Malformed byte sequence: “ed”.

Malformed byte sequence: “fb”.

Malformed byte sequence: “e9”.

Malformed byte sequence: “f1”.

Malformed byte sequence: “f0”.

Malformed byte sequence: “e2”.

Malformed byte sequence: “e8”.

Malformed byte sequence: “f2”.

Malformed byte sequence: “ee”.

Malformed byte sequence: “f7”.

Malformed byte sequence: “f3”.

Malformed byte sequence: “ef”.

Malformed byte sequence: “e4”.

Malformed byte sequence: “e6”.

Malformed byte sequence: “ff”.

Malformed byte sequence: “e1”.

Malformed byte sequence: “e3”.

Malformed byte sequence: “cf”.

Malformed byte sequence: “fe”.

Malformed byte sequence: “f5”.

Malformed byte sequence: “f4”.

Malformed byte sequence: “e7”.

Malformed byte sequence: “f9”.

Internal encoding declaration “windows-1251” disagrees with the actual encoding of the document (“utf-8”).

Malformed byte sequence: “cd”.

Malformed byte sequence: “f8”.

Malformed byte sequence: “fc”.

The text content of element “script” was not in the required format: Expected space, tab, newline, or slash but found “{” instead.

The “font” element is obsolete. Use CSS instead.

End tag “span” seen, but there were open elements.

Unclosed element “font”.

End tag “font” violates nesting rules.

Stray end tag “span”.

Malformed byte sequence: “c2”.

Malformed byte sequence: “c5”.

Malformed byte sequence: “c3”.

Malformed byte sequence: “c8”.

Malformed byte sequence: “d1”.

Malformed byte sequence: “d2”.

Malformed byte sequence: “c0”.

Malformed byte sequence: “d6”.

Malformed byte sequence: “df”.

Malformed byte sequence: “d5”.

Malformed byte sequence: “ce”.

Malformed byte sequence: “c4”.

Malformed byte sequence: “ca”.

Malformed byte sequence: “d3”.

Malformed byte sequence: “d4”.

Malformed byte sequence: “f6”.

No space between attributes.

Attribute “p” not allowed on element “a” at this point.

No “p” element in scope but a “p” end tag seen.

Duplicate ID “middle”.

Duplicate ID “container”.

Duplicate ID “sideLeft2_2”.

Malformed byte sequence: “cc”.

Duplicate ID “help_osn_chet”.

Malformed byte sequence: “c1”.

Malformed byte sequence: “db”.

Malformed byte sequence: “c9”.

Malformed byte sequence: “c7”.

Attribute “bordercolor” not allowed on element “table” at this point.

The “cellspacing” attribute on the “table” element is obsolete. Use CSS instead.

The “cellpadding” attribute on the “table” element is obsolete. Use CSS instead.

The “border” attribute on the “table” element is obsolete. Use CSS instead.

A numeric character reference expanded to the C1 controls range.

Malformed byte sequence: “cb”.

Malformed byte sequence: “c6”.

Malformed byte sequence: “dc”.

Warnings

The “border” attribute is obsolete. Consider specifying “img { border: 0; }” in CSS instead.

The first occurrence of ID “middle” was here.

The first occurrence of ID “container” was here.

The first occurrence of ID “sideLeft2_2” was here.

The “language” attribute on the “script” element is obsolete. You can safely omit it.

The first occurrence of ID “help_osn_chet” was here.

NON-DOCUMENT-ERROR

zed — Нормальный Заработок (5)

Для добавления ваших друзей к себе в команду.
Если у вас еще нет друзей готовых работать то просто пропустите эту часть нажав на далее.
Когда же у вас будут люди готовые работать прочитайте данную часть.
Как добавить людей в вам в команду?
Вот вы нашли человека который хочет с вами работать.Как же добавить его в свою команду?Ваши действия просты:
1)Дать ссылку на эту статью чтобы он все прочитал
2)Дать ваши реферальные ссылки для регистрации
Где найди ваши реферальные ссылки с помощью которой ваш друг будет в вашей команде?
На webof-sar.ru
Переходим по ссылке http://webof-sar.ru/reflinks.php
Тут вы видим Ваши реферальные ссылки для привлечения на проект !!!
Выбиратете любую ссылку типов:
http://webof-sar.ru/faq.php?r=*****
http://webof-sar.ru/?r=*****
http://webof-sar.ru/register.php?r=*****
Затем даете ее вашему другу для регистрации.
На www.seosprint.net
Переходим по ссылке http://www.seosprint.net/promo.php
Тут вы видим Свою ссылку для привлечения реферала !!!
Выбираете ссылку типа:
http://www.seosprint.net/?ref=******
Затем даете ее вашему другу для регистрации.
На UH.ru
Переходим по ссылке http://uh.ru/profile/affiliate/
Там ищем свою партнерскую ссылку для регистрации типа:
http://uh.ru/a/0/*****
Затем даете ее вашему другу для регистрации.
На бонусах WMB
После получения любого бонуса вы увидите свою реферальную ссылку.Например:
http://rostov-wm.ru/bonus/index.php?sale=************
http://worldwm.org/bonus.php?sale=************
http://wmgoods.org/bonus.php?sale=************

Пример сообщения вашему другу:
Информация о том где я тебе предлагаю работать
=) http://sky-777.ucoz.ru/index/normalnyj_zarabotok/0-28ссссссссссссссссссссссссссс
Вот ссылки для регистрации чтобы ты был в моей команде:
Тут указываете ваши реферальные ссылки во всех проэктах где вы работаете
(WEBOF-SAR.ru ; seosprint.net ; UH.ru )
А так же ваши реферальные ссылки бонусов

(бонусы WMB)
У вас получится что-то вроде:

Информация о том где я тебе предлагаю работать

=) http://sky-777.ucoz.ru/index/normalnyj_zarabotok/0-28
Вот ссылки для регистрации чтобы ты был в моей команде:
http://webof-sar.ru/?r=20001
http://www.seosprint.net/?ref=847680
http://uh.ru/a/0/87564
А так же ссылки на WMB бонусы:
http://www.wm-debt.ru/creds.php?sale=123352969532
http://worldwm.org/bonus.php?sale=123352969532
http://rostov-wm.ru/bonus/index.php?sale=123352969532
http://wmgoods.org/bonus.php?sale=123352969532
http://vip-wm.ru/index.php?sale=123352969532
http://qep.su/bonus.php?sale=123352969532
http://pronets.ru/bonus.php?sale=123352969532

Статья находится в разработке до 30.05.2012

Работа и развлечения.

















 


   В основном все сайты САР очень похожи. За
стандартный серфинг сайта начисляют две  копейки (0,02) на аккаунт сайта САР. Деньги с
аккаунта сайта САР можно вывести на Ваш кошелек
WebMoney после набора
минимальной суммы для заказа выплаты, как правило, требуемую сумму можно набрать
за 2-3 дня. Заказанные выплаты некоторые САР обрабатывают автоматики, и деньги
на свой кошелек Вы получаете почти мгновенно.

   Стандартный показ сайда рекламодателя длиться 20 секунд. Получается
в течение часа серфингом можно просмотреть (в одном окне браузера) около 180
сайтов. В среднем на каждом сайте САР в серфинге бывает от 10 до 100 сайтов,
которые можно просматривать раз в сутки. Чтобы провести в серфинге хотя бы час
нужно иметь аккаунты более чем на 20 сайтах САР. Список моих реферальных ссылок
на такие сайты САР приведен ниже. Регистрируясь по этим ссылкам, вы получаете
максимально возможный рефбек (от 50% до 90% в зависимости от САР). Если в САР
авторефбек не предусмотрен то устанавливаю его в ручную всем моим
рефералам без исключений.

 
 





WebMoney (WMR)

САР


Система Активной Рекламы  





     











































min.

 САР

1

2.00
 http://www.seosprint.net

2

2.00
 http://profitcentr.com

3

0.00
 http://wmreklama.com

4

0.00
 http://best-sar.ru

5

2.00



 http://www.wmrub.com

6

2.00
 http://www.fastprom.net

7

2.00
 http://seo-fast.ru

8

9.00
 http://www.ipgold.ru

9

0.00
 http://www.profitseo.net

10

2.00
 http://osw-money.ru

11

2.00
 http://neverends.ru

15

0.00
 http://www.stablefox.ru

16

0.00
 http://workshpil.ru

17

0.00
 http://baks-mail.ru

18

0.00
 http://www.smartbux.ru

19

0.00
 http://add-promotion.ru

21

0.00
 http://anticrizisbux.info

22

0.00
 http://alex-bux.com

23

0.00
 http://spectrum-bux.ru

24

0.00
 http://www.crazyy.ru

26

0.00
 http://evro-bux.com

28

0.10
 http://nanabux.ru

29

0.50
 http://luxads.ru

31

0.50
 http://gregbux.ru

33

1.00
 http://as-bux.hhos.ru

34

1.00
 http://niki-bux.ru

35

1.00
 http://reklama.fl54.ru

36

0.00
 http://spartak-bux.ru

39

1.00
 http://seomany.ru

40

0.00
 http://greenmany.ru

41

0.00
 http://webof-sar.ru

42

2.00
 http://joker-bux.ru

43

1.00
 http://miragi.ru

44

0.00
 http://clicken.ru

45

1.50
 http://streamwm.ru

46

2.00
 http://www.untwistpro.ru

47

5.00
 http://vns-sc.ru

48

5.00
 http://vns-lite.ru

49

5.00
 http://liderwm2.ru



 

 
Выплаты мгновенные!


 





WebMoney (WMU)

САР


Система Активной Рекламы  





   







min.

 САР

1

0.50
 http://wmu.in.ua

2

5.00
 http://tu-best.ru

3

5.00
 http://superwm2012.ru



 

 


 
 





WebMoney (WMB)

САР


Система Активной Рекламы  





   







min.

 САР

1

30.00
 http://gala-bux.ru

2

18.00
 http://chumak.org

3

50.00
 http://www.ewit.org.ua



 

 


 
 





WebMoney (WMZ)

САР


Система Активной Рекламы  





   










min.

 САР

1

0.10
 http://www.vip-prom.net

2

0.10
 http://www.wmmail.ru

3

0.10
 http://rublevka-wm.ru

4

0.25
 http://wmwolga.ru

5

0.50
 http://strategybux.com

6

0.50



 http://ipcoin.ru



 

 



 
 

sar.ru — отзыв о сайте

Владельцу сайта webof-sar.ru

Кнопка для размещения на сайте
Копировать код


<a href=»http://lynix.info/anonce/httpwebof-sarru-otzyv-o-saite» target=»_blank»><img src=»http://lynix.info/img/review_1.png» alt=»Независимые отзывы о webof-sar.ru» title=»Независимые отзывы о webof-sar.ru»></a>

Кнопка для размещения на сайте
Копировать код


<a href=»http://lynix.info/anonce/httpwebof-sarru-otzyv-o-saite» target=»_blank»><img src=»http://lynix.info/img/review_2_1.png» alt=»Независимые отзывы о webof-sar.ru» title=»Независимые отзывы о webof-sar.ru»></a>

Сайт являются средством для обмена информацией между пользователями. Администрация не несет ответственности за ее достоверность и актуальность.

Отзыв о сайте:

Не очень люблю зарабатывать на буксах. Но свой заработок я начинал именно на таких сайтах, потому что они дают постоянный, но не пассивный заработок для любого желающего. У сайта очень привлекательный дизайн, и очень большой и разный функционал. Пользоваться сайтом очень легко, заданий на нем очень много, серфинга также достаточно. Платит сайт не очень много, но работа есть всегда и это самое главное. Выплаты приходят моментально, почти на все платежные системы.

Тематика сайта:

Достоинства:

Достоинства: 

Приятный дизайн, функционал

Недостатки:

Недостатки: 

Маленькие деньги

ФГБНУ «ПНИИЭО АПК»


По итогам проведенных научных исследований в 2020 году в соответствии с государственным заданием разработаны 3 модели, опубликованы 2 монографии, 6 статей в журналах, индексируемых Web of Science, 6 – в журналах, индексируемых Scopus, 3 – в зарубежном журнале, 37 – в ведущих рецензируемых научных журналах, входящих в Перечень рецензируемых научных изданий Высшей аттестационной комиссии при Минобрнауки России.


Получены свидетельства о государственной регистрации базы данных «Количественная оценка экономической ценности земель сельскохозяйственного назначения», программ для ЭВМ «Модель оценки кадастровой стоимости пахотных угодий муниципальных районов Саратовской области по результатам возделывания сельскохозяйственных культур на основе снижения производственной себестоимости единицы продукции (МОК-САР)», «Модель комплексной оценки стоимости земель сельскохозяйственного назначения (МКО-ЗЕМСКИ)».


Проведена научно-практическая конференция с международным участием «Актуальные проблемы цифровой экономики в агропромышленном комплексе России», посвященная 90-летию ФГБНУ «Поволжский научно-исследовательский институт экономики и организации агропромышленного комплекса».


Поддерживается научное сотрудничество с ТОО «Казахский научно-исследовательский институт экономики агропромышленного комплекса и развития сельских территорий» (КазНИИЭАПКиРСТ; Республика Казахстан, г. Алматы).


 


 


Новая экономическая

теория


Современная экономическая теория и принципы развития агропромышленного комплекса страны в условиях глобализации и интеграционных процессов в мировой экономике


Формирование новой социальной парадигмы


Теория и механизмы формирования новой социальной парадигмы устойчивого развития сельских территорий


Управление земельными отношениями


Комплексные исследования проблем трансформации земельных отношений и управления земельными ресурсами в сельском хозяйстве

Телепартнерка -Лучшие партнерские программы-Игры Онлайн — «Телепартнерка»

» Календарь
«  Август 2021  »
Пн Вт Ср Чт Пт Сб Вс
            1
2 3 4 5 6 7 8
9 10 11 12 13 14 15
16 17 18 19 20 21 22
23 24 25 26 27 28 29
30 31
» От Великих.
» Обратите внимание
» Три в одном

Здравствуйте уважаемый посетитель!   

Наш сайт никому и никогда не обещает быстрой денежной прибыли, а на против предостерегает пользователей интернета, что не стоит искушать себя мыслью о легких деньгах и если вы регистрируйтесь в каком-либо проекте где обещают, что завтра вы уже будете получать чуть ли не тысячу долларов, советуем не тратить свое время напрасно. Да, в интернете существуют разные направления для заработка, например партнерские программы, на сегодняшний день самый честный вид получения дохода в сети интернет.

Деньги с неба не падают что-бы получить доход в интернете и вы решили попробовать,  настраивайтесь сразу — придется очень много работать. Пройдет не один день и не два когда вы получите первую прибыль, интернет — это та среда, где подводные рифы присутствуют на каждом шагу. Интернет- это то место где ваш успех не зависит от толщины кошелька ваших родителей, а учит вас , первое — принимать решение самостоятельно, второе — не надо идти у кого либо на поводу. Советуем внимательнее просмотреть весь наш материал о лучших партнерских программах.

Вы попали на сайт, который  ставит перед собой задачу показать своим пользователям как реально зарабатывать деньги на партнерских программах. Сайт «Телепартнерка» постарается донести до своего пользователя как можно больше новых и доходных партнерских программ. Здесь вы увидите только те программы по которым конкретно были получены выплаты. А так  же в разделе программы и тесты вы сможете скачать бесплатно нужный софт для своего компьютера, проверенный на 100%. Зарегистрированный пользователь может оставлять запрос на нужную ему программу (не связанную с нарушением Российского законодательства)Постараемся выполнить запросы и пожелания всех своих пользователей.   

 А если вас не интересуют партнерские программы и софт для компьютера, вы можете просто отдохнуть. 

К вашему вниманию    

представлены яркие, красочные и увлекательные игры. Более того открыл свои двери наш интернет магазин, который рад  всегда новым покупателям. Надеемся что вы не зря потратите время листая страницы нашего сайта. И ещё хочу добавить,что весь материал на сайте «Телепартнерка» посвещен партнерским программам и получения честного дохода 

в сети Интернет. 




                                            

                                                                                                                                                                                                                             

                              

Совсем недавно в рунете появился сайт WEBOF-SAR, скажу вам честно с первых дней заслуживает уважение.Регистрируясь на проекте вы получаете полный набор качественной услуги для продвижения своего сайта. Что нам предлогают? 

Низкие цены, защита от накруток, постоянное обновление защиты, статистика в реальном времени, возможность выделить ссылку цветом, возможность разместить рекламу в VIP, только заинтересованные пользователи. Автоматические размещения всей рекламы. В полный пакет услуг входит, шестнадцать видов эффективной рекламы.

 

                                                                                                                                                               

  

» Здесь все раскажут
» Получить Бонусы WM
» Не лохотрон !!!
» Статистика

Онлайн всего: 1

Гостей: 1

Пользователей: 0

» Лучшие партнеры
» Деньги >>>
» Реклама

Webof-sar: WebOf-SaR: Русский язык

Синтезаторный завод на заказ на сайте, доминант, наискосок. Продолговите нам самим по себе.

4,55

Рейтинг CuteStat

webof-sar.ru 1 декада 2 месяца. Он занимает 188 733 место в мире по посещаемости. Это домен с расширением ru . Этот веб-сайт оценивается в 63 600 долларов США, а ежедневный доход составляет около 106 долларов США. Поскольку в последнее время пользователи не сообщали об активных угрозах, просмотр webof-sar.ru БЕЗОПАСЕН.


Обновить статистику

Оценка PageSpeed ​​
Рейтинг Siteadvisor

Нет проблем с риском

Отчет о трафике

Уникальных посетителей за день: 8 474
Ежедневных просмотров страниц: 42 370

Оценочная стоимость

Доход в день: 106 долларов.00
Оценочная стоимость: 63 600,00 долл. США

Индексы поисковых систем

Google проиндексированных страниц: 1,700
Проиндексированных страниц Bing: Непригодный

Поисковые обратные ссылки

Google Обратные ссылки: 520 000
Bing Обратные ссылки: Непригодный

Информация по безопасности

Безопасный просмотр Google: Нет проблем с риском
Рейтинг сайта: Нет проблем с риском
Надежность WOT: Непригодный
WOT Конфиденциальность: Непригодный
WOT Безопасность детей: Непригодный

Рейтинг и рейтинг веб-сайта

Alexa Рейтинг: 188 733
Авторитет домена: Непригодный

Информация о веб-сервере

Размещенный IP-адрес:

5.63.155.144

Страна размещения:

RU

Широта местоположения:

55.7386

Долгота местоположения:

37,6068

Структура ресурсов страницы

Домашняя страница Ссылки Анализ

Социальная активность

Акции в Facebook: Непригодный
Facebook Нравится: Непригодный
Facebook Комментарии: Непригодный

Анализ страницы веб-сайта

h2 Заголовки: 2 h3 Заголовки: Непригодный
h4 Заголовки: Непригодный h5 Заголовки: 2
H5 Заголовки: Непригодный H6 Заголовки: Непригодный
Всего IFRAME: Непригодный Всего изображений: 1
Google AdSense: Непригодный Google Analytics: UA-135285576-1

Анализ заголовка HTTP


HTTP / 1.1200 OK
Сервер : nginx / 1.16.1
Дата : понедельник, 9 декабря 2019 г., 04:27:33 GMT
Content-Type : text / html; charset = WINDOWS-1251
Transfer-Encoding : фрагментировано
Connection : keep-alive
X-Powered-By : PHP / 5.4.45
Истекает : Чт, 19 ноября 1981 г. 08:52:00 GMT
Cache-Control : no-store, no-cache, must-revalidate, post-check = 0, pre-check = 0
Pragma : no-cache
Vary : Accept-Encoding
Content -Кодирование : gzip

Информация о домене

Регистратор домена: R01-RU

Дата регистрации: 1 июня 2011 г., 16:49
1 декада 2 месяца 18 часов назад
Срок годности: 1 июня 2020 г., 17:49
1 год 2 месяца 2 дня назад
Статус домена:

зарегистрированный

делегированный

проверено

Информация о сервере доменных имен

Хост IP-адрес Страна
нс5.hosting.reg.ru 31.31.194.32 Россия
ns6.hosting.reg.ru 31.31.196.15 Россия

Анализ записи DNS

Хост Тип TTL Экстра
webof-sar.ru А 3599
IP: 5.63.155.144
webof-sar.ru NS 3600
Цель: нс6.hosting.reg.ru
webof-sar.ru NS 3600
Цель: нс 5.hosting.reg.ru
webof-sar.ru SOA 3598

ИМЯ: webof-sar.ru
RNAME: support.webof-sar.ru
Серийный номер: 2018050733
Обновить: 3600

Retry: 3600
Expire: 604800
Minimum
TTL:
86400

webof-sar.ru МХ 3600
Приоритет: 10
Цель: почта.webof-sar.ru
webof-sar.ru TXT 3600
TXT: ulogin-проверка: 89f8b33c4db5
webof-sar.ru TXT 3600
TXT: v = spf1 ip4: 5.63.155.144 a mx ~ все

Сайтов с аналогичным рейтингом

Alexa Traffic Рейтинг

Поисковый трафик Alexa

Полный поиск в WHOIS

домен: WEBOF-SAR.RU
Сервер: ns5.hosting.reg.ru.
nсервер: ns6.hosting.reg.ru.
состояние: ЗАРЕГИСТРИРОВАНО, ДЕЛЕГАТИВНО, ПОДТВЕРЖДЕНО
человек: Частное лицо
регистратор: R01-RU
admin-contact: https://partner.r01.ru/contact_admin.khtml
created: 2011-06-01T11: 04: 55Z
оплачено до: 2020-06-01T12: 04: 55Z
free-date: 2020-07-02
источник: TCI

Последнее обновление 2019-12-09T04: 26: 31Z

Комментарии / Рейтинги / Обзоры / Отзывов о webof-sar.ru

(PDF) Метод исследования и цифрового формирования сигналов радиолокационного зондирования

Типы фазовой модуляции радиолокационного сигнала можно разделить на 2 основных типа:

непрерывный и дискретный. На практике наиболее часто используемым типом непрерывной модуляции является линейная частотная модуляция

(LFM), а дискретной — сигналы с фазовой кодовой модуляцией.

LFM-сигнал (щебетание) — типичный вид зондирующего сигнала в большинстве современных космических аппаратов

SAR, зондирующих Землю.Известны также примеры использования импульсов с фазовой кодировкой. Периодически повторяющаяся 127-битная M-последовательность

, например, использовалась для дистанционного картирования Венеры

с космических аппаратов «Венера-15» и «Венера-16» [4]. 64-битная псевдослучайная двоичная последовательность

(PRBS) была выбрана для эксперимента «Магеллан» по картированию поверхности Венеры [5].

М-последовательность используется американскими учеными для радиолокационного картирования Луны и планет

с Земли [6].

Поскольку SAR в основном применялись для задач обнаружения, где основными требованиями были высокое отношение сигнал / шум

и хорошее пространственное разрешение, критерием выбора зондирующего сигнала

был главный лепесток функции автокорреляции. ширина и ближайшие

уровней боковых лепестков. Что касается чирпа, то, несмотря на то, что его функция отклика имеет высокие первые боковые лепестки (-

13 дБ), их положение хорошо известно, и они могут быть отклонены с помощью весовых функций

, таких как окно Хэмминга [7, с.63], решена и задача интегрального подавления боковых лепестков

. Что касается импульсов с фазовой кодировкой, модулированных M-последовательностью, их отклик

функциональных боковых лепестков пиков удален от главного лепестка, а их пиковые уровни, зависящие от

от длины последовательности, намного меньше, чем у ЛЧМ. Вышеуказанные свойства обеспечивают

некоторые преимущества использования фазокодированного импульса в качестве зондирующего сигнала для получения лучшего различия деталей изображения SAR

.Однако у M-последовательностей есть некоторые недостатки. В частности,

не является известным способом фильтрации боковых лепестков, потому что их внешний вид не может быть выражен аналитически

с помощью какой-либо простой функции.

В настоящее время, когда качество распределенных измерений характеристик местности, полученных из

изображений РСА, становится все более интересным в связи с их применением для ряда задач

, таких как мониторинг арктической ледовой обстановки, разливов рек, загрязнения моря и местности, лес

и здоровье сельского хозяйства, особую актуальность приобретает проблема улучшения радиометрических характеристик SAR за счет уменьшения уровня боковых лепестков интегрального отклика

.

3 Как выбрать модуляцию зондирующего сигнала

В настоящее время, когда качество измерения распределенных характеристик местности, полученное из

РСА изображений, становится все более интересным в связи с их применением для ряда задач

, таких как мониторинг арктической ледовой обстановки , разливов рек, загрязнения моря и местности, лесов

и здоровья сельского хозяйства особую актуальность приобретает проблема улучшения радиометрических характеристик SAR за счет

уменьшения уровня боковых лепестков интегрального отклика.

Существует множество различных функций для модуляции сигнала, некоторые из них были предложены автором

[8] и представлены в таблице 1.

На вопрос, какой тип сигнала лучше, нет однозначного ответа. Причина в том, что выбор

зависит от предназначения спроектированной системы и из-за новых функций для модуляции сигнала

. По этой причине метод

, позволяющий исследовать различные типы сигналов, оценить их практическую осуществимость и сделать осознанный выбор, был разработан и представлен ниже.

1. Выбор модулирующей функции или семейства таких функций, которые планируется проанализировать

. Исследование одномерной АКФ модулирующей функции для оценки применимости

для решения требуемой задачи.

2. Построение цифровой модели семейства модулирующих функций (например, в Matlab)

в соответствии с частотой дискретизации и, при необходимости, адаптированной к характеристикам тракта передачи-приема

проектируемого SAR.

3. Синтез двумерной функции отклика в координатах дальность-азимут

или двумерной функции неоднозначности в координатах дальность-скорость (для импульса —

, (2019) https: // doi. org / 10.1051 / itmconf / 201930

ITM Web of Conferences

30

CriMiCo’2019

1150

5030 30

SARS-CoV-2 вариант B.1.617 устойчив к инфекции, вызванной бамланивимабом, и избегает антител вакцинация

РЕЗЮМЕ

Появление вариантов SARS-CoV-2 угрожает усилиям по сдерживанию пандемии COVID-19.Число случаев COVID-19 и смертей в Индии резко возросло за последние недели, и считается, что за многие из этих случаев отвечает новый вариант SARS-CoV-2, B.1.617. Спайковый белок B.1.617 несет в себе две мутации в рецепторном связывающем домене, который взаимодействует с рецептором ACE2 и составляет главную мишень нейтрализующих антител. Поэтому мы проанализировали, является ли B.1.617 более способным проникать в клетки и / или уклоняется ли от ответа антител. B.1.617 вводился в две из восьми тестируемых линий клеток со слегка повышенной эффективностью и блокировался ингибиторами входа.Напротив, B.1.617 был устойчивым к бамланивимабу, антителу, используемому для лечения COVID-19. Наконец, B.1.617 избегал антител, индуцированных инфекцией или вакцинацией, хотя и с умеренной эффективностью. В совокупности наше исследование показывает, что уклонение антител от B.1.617 может способствовать быстрому распространению этого варианта.

ВВЕДЕНИЕ

Коронавирус 2 тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV-2) является возбудителем разрушительной пандемии коронавирусной болезни 2019 г. (COVID-19), которая более чем через год после ее возникновения связана с рекордными цифрами в случаев и смертей (W.H.O., 2021). Эффективные противовирусные препараты в основном отсутствуют, хотя рекомбинантные антитела, нацеленные на вирусный спайковый белок (S), могут значительно снизить вирусную нагрузку и получили разрешение на экстренное использование (EUA) (Chen et al., 2021a; Gottlieb et al., 2021). Лекарства, которые нацелены на дисрегулируемые цитокиновые ответы, характерные для COVID-19, доступны, но их клиническая польза является контролируемой (Tomazini et al., 2020; W.H.O. REACT Working Group et al., 2020). Хотя прогресс в разработке лечения является умеренным, доступны вакцины на основе мРНК и векторов, которые обеспечивают эффективную защиту от болезней (Baden et al., 2021; Polack et al., 2020). Как следствие, вакцинация рассматривается как ключевой инструмент борьбы с пандемией COVID-19 и, в конечном итоге, ее прекращения.

Стратегии борьбы с пандемией COVID-19 с помощью вакцин или немедикаментозных вмешательств оказались под угрозой из-за появления вызывающих озабоченность вариантов SARS-CoV-2 (VOC). Эти варианты содержат мутации, которые обеспечивают повышенную трансмиссивность или уклонение от иммунитета (Plante et al., 2021). Исследования мутаций, присутствующих в VOC, в основном сосредоточены на вирусном S-белке.Белок S встраивается в вирусную мембрану и облегчает проникновение вируса в клетки-мишени. Для этого поверхностная единица S1 белка S сначала связывается с клеточным рецептором ACE2 (Hoffmann et al., 2020; Zhou et al., 2020) через свой рецептор-связывающий домен (RBD). Впоследствии белок S активируется TMPRSS2 или родственными клеточными протеазами (Hoffmann et al., 2021b; Hoffmann et al., 2020), а трансмембранная единица S2 белка S способствует слиянию вирусной и клеточной мембран, позволяя доставка вирусного генома в хозяйскую клетку.Эти процессы необходимы для заражения SARS-CoV-2 и нацелены на лекарства и нейтрализующие антитела.

Прототипом ЛОС с повышенной пригодностью является вариант B.1.1.7, который появился в Соединенном Королевстве и в настоящее время распространяется во многих странах. В.1.1.7 реплицируется на более высоких уровнях у пациентов и более эффективно передается от человека к человеку по сравнению с ранее циркулировавшими вирусами (Frampton et al., 2021; Graham et al., 2021; Leung et al., 2021). Повышенная трансмиссивность может быть связана с мутацией N501Y в RBD, которая может увеличивать связывание с ACE2 (Ali et al., 2021; Луан и др., 2021). Однако точные механизмы, лежащие в основе более надежной передачи B.1.1.7, еще предстоит выяснить. Напротив, различия в опосредованной антителами нейтрализации между ранее циркулировавшими вирусами и вариантом B.1.1.7 незначительны, при этом B.1.1.7 немного менее чувствителен к нейтрализации (Chen et al., 2021b; Collier et al., 2021; Hoffmann et al., 2021a; Kuzmina et al., 2021; Muik et al., 2021; Planas et al., 2021; Shen et al., 2021; Supasa et al., 2021; Wang et al., 2021а; Xie et al., 2021). В целом, B.1.1.7 демонстрирует повышенную приспособленность и будет превосходить ранее циркулировавшие вирусы в иммунологически наивной популяции.

В популяциях с высоким процентом людей с уже существующим иммунным ответом против SARS-CoV-2 варианты вируса, которые могут уклоняться от иммунного контроля, имеют избирательное преимущество. Такими вариантами являются вариант B.1.351, который стал доминирующим в Южной Африке (Тегалли и др., 2021), и вариант Р.1, который стал доминирующим в Бразилии (Фариа и др., 2021) (Chen et al., 2021b; Dejnirattisai et al., 2021; Edara et al., 2021; Гарсия-Бельтран и др., 2021 г .; Hoffmann et al., 2021a; Кузьмина и др., 2021; Planas et al., 2021; Wang et al., 2021a; Чжоу и др., 2021). Эти варианты содержат мутации в S-белке, которые снижают нейтрализацию антителами, включая E484K, который находится в RBD и присутствует как в B.1.351, так и в P1 (Li et al., 2021; Liu et al., 2021; Wang et al., 2021c). В настоящее время антитела с уклонением от формы наиболее заметны для варианта B.1.351, но неясно, могут ли возникнуть варианты, которые проявляют повышенную или даже полную устойчивость к нейтрализации.

В последние недели в Индии наблюдается резкий рост случаев COVID-19 и смертей (W.H.O., 2021). Считается, что многие случаи связаны с заражением новым вариантом B.1.617, который несет восемь мутаций в S-белке, включая мутации L452R и E484Q в RBD, которые вносят изменения в положения аминокислот, которые, как известно, модулируют опосредованное антителами нейтрализация (Li et al., 2021; Li et al., 2020). Однако в настоящее время неизвестно, уклоняется ли B.1.617 от нейтрализации, опосредованной антителами.Точно так же неизвестно, проявляет ли вариант измененную зависимость входа от факторов клетки-хозяина, которая может изменять тропизм клеток, эффективность проникновения и чувствительность к ингибиторам входа.

Здесь мы сообщаем, что белок S из B.1.617 опосредует умеренно усиленное проникновение в линии клеток легких и кишечника человека Calu-3 и Caco-2, соответственно, и что вход ингибируется растворимым ACE2 и Camostat, последний из которых нацелен на TMPRSS2. Напротив, вход, управляемый B.Белок 1.617 S был полностью устойчив к нейтрализации моноклональным антителом с EUA для лечения COVID-19 (бамланивимаб). Наконец, вход, управляемый белком B.1.617 S, был частично устойчив к нейтрализации антителами, вызванными инфекцией или вакцинацией вакциной Comirnaty / BNT162b2.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Белок S варианта B.1.617 опосредует повышенное проникновение в определенные линии клеток кишечника и легких человека

Белок S варианта B.1.617 SARS-CoV-2 (идентификатор доступа GISAID: PI_ISL_1360382) содержит в общей сложности восемь мутаций по сравнению с белками S вирусов, отобранных в начале пандемии (рис. 1).Семь мутаций расположены в субъединице S1, три из которых присутствуют в N-концевом домене (R21T, E154K, Q218H), две — в RBD (L452R, E484Q) и две между RBD и границей S1 / S2 (D614G , P681R). Еще одна мутация находится в субъединице S2 (h2101D) (рис. 1). Поскольку быстрое распространение варианта B.1.617 в Индии могло быть связано с повышенной способностью проникать в клетки или инфицировать более широкий спектр клеток-мишеней, мы проанализировали клеточный тропизм и эффективность проникновения варианта B.1,617. Для этого мы использовали частицы вируса везикулярного стоматита (VSV), псевдотипированные с белком S либо SARS-CoV-2 дикого типа (WT) (изолят Wuhan-1 с обменом D614G), либо вариантов B.1.617 или B.1.351. Эти псевдотипные частицы точно имитируют проникновение в клетки SARS-CoV-2 и ранее использовались для идентификации факторов хозяина, необходимых для проникновения клеток SARS-CoV-2, и для изучения нейтрализации SARS-CoV-2 антителами (Hoffmann et al., 2021a ; Hoffmann et al., 2020; Riepler et al., 2020; Schmidt et al., 2020).

Рисунок 1. Схематический обзор белка S из варианта B.1.617

SARS-CoV-2 Расположение мутаций в контексте организации домена S белка B.1.617 показано на верхней панели. RBD, рецептор-связывающий домен; TD, трансмембранный домен. Расположение мутаций в контексте тримерного S-белка показано на нижних панелях. Цветовой код: голубой, субъединица S1 с RBD темно-синего цвета; серый, субъединица S2; оранжевый, сайты расщепления S1 / S2 и S2 ’; красные, мутировавшие аминокислотные остатки.

Всего мы проанализировали восемь клеточных линий — Vero, Caco-2, Calu-3, Calu-3 (ACE2), 293T, A549 (ACE2), A549 (ACE2 + TMPRSS2) и Huh-7, большинство из которых обычно используются в качестве моделей клеточных культур для различных аспектов репликации SARS-CoV-2. Клетки Calu-3 (ACE2), A549 (ACE2) и A549 (ACE2 + TMPRSS2) были сконструированы для экспрессии ACE2 или ACE2 в сочетании с TMPRSS2.

Для большинства клеточных линий мы не наблюдали значительных различий в эффективности входа в клетки между белками WT и вариантом S (рис. 2А и рис. S1).Единственным исключением были клетки Caco-2 и Calu-3 (и клетки 293T в случае B.1.351), которые происходят из кишечника и легких человека, соответственно, и для которых белок S из B.1.617 (и B.1.351) ) опосредованный вход с умеренно повышенной эффективностью (Рисунок 2A и Рисунок S1). Следует отметить, что это увеличение было менее заметным, когда клетки Calu-3 были сконструированы для сверхэкспрессии ACE2. Кроме того, мы исследовали управляемое S-белком проникновение клеток в клетки BHK-21, которые были трансфицированы либо пустой плазмидой, либо плазмидой экспрессии ACE2.Как и ожидалось, клетки BHK-21, трансфицированные пустой плазмидой, не допускали проникновения, управляемого каким-либо из протестированных белков S, но были эффективно введены частицами, несущими гликопротеин VSV (VSV-G) (рис. 2B). Напротив, направленная экспрессия ACE2 делала эти клетки восприимчивыми к входу, управляемому S-белком, и эффективность входа была сравнима между S-белками WT, B.1.351 и B.1.617 (рис. 2B). Таким образом, мы демонстрируем, что S-белок SARS-CoV-2 B.1.617 обеспечивает умеренно усиленное проникновение в определенные клетки дыхательного и пищеварительного трактов.

Рис. 2. Белок S варианта B.1.617 SARS-CoV-2 обеспечивает эффективное проникновение в линии клеток человека

(A) Белок S варианта B.1.617 SARS-CoV-2 обеспечивает надежное проникновение в линии клеток. Указанные клеточные линии были инокулированы псевдотипическими частицами, несущими S-белки указанных вариантов SARS-CoV-2 или SARS-CoV-2 S дикого типа (WT). Эффективность трансдукции количественно оценивали путем измерения активности кодируемой вирусом люциферазы в клеточных лизатах. через 16-18 ч после трансдукции. Представлены средние (средние) данные из трех биологических повторов (каждая из которых проводилась с техническими четырех повторами), для которых трансдукция была нормализована относительно SARS-CoV-2 S WT (= 100%).Планки погрешностей указывают на стандартную ошибку среднего (SEM). Статистическая значимость различий между белками WT и вариантом S была проанализирована с помощью одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с посттестом Даннета (p> 0,05, недостоверно [нс]; p ≤ 0,05, *; p ≤ 0,01, **; p ≤ 0,001, ***). См. Также рисунок S1.

(B) Клетки BHK-21, трансфицированные пустой плазмидой или плазмидой ACE2, инокулировали псевдотипическими частицами, несущими указанные белки S, VSV-G или без вирусного гликопротеина (контроль, не показан).Представлены средние (средние) данные для трех биологических повторностей (каждая из которых проводилась с техническими четырехповторными повторностями), для которых трансдукция была нормализована относительно фона (сигнал, полученный для частиц без вирусного гликопротеина, = 1, обозначен пунктирной линией). Планки погрешностей указывают на SEM. Статистическую значимость различий между пустым вектором и клетками, трансфицированными ACE2, анализировали с помощью множественного t-критерия с коррекцией множественного сравнения (метод Холма-Сидака; p> 0,05, нс; p ≤ 0.001, ***).

Растворимый ACE2 и Camostat ингибируют вход в клетки, управляемый S-белком варианта B.1.617

Далее мы исследовали, может ли вход B.1.617 блокироваться ингибиторами, нацеленными на RBD (растворимый ACE2) и протеолитическую активацию (Camostat) Белок S. Растворимый ACE2 связывается с RBD и блокирует последующее включение связанного с мембраной ACE2. Он подавляет проникновение в клетки SARS-CoV и SARS-CoV-2 и разрабатывается для лечения COVID-19 (Kuba et al., 2005; Monteil et al., 2020).Растворимый ACE2 блокировал вход клеток Caco-2, управляемый белками WT, B.1.351 и B.1.617 S, с сопоставимой эффективностью, но не препятствовал входу, управляемому VSV-G (рис. 3A). Аналогичные результаты были получены для Camostat, клинически подтвержденного ингибитора сериновой протеазы, активного против TMPRSS2 (Hoffmann et al., 2020) (рис. 3B). Эти результаты показывают, что растворимый ACE2 и Camostat будут активны против варианта B.1617.

Рис. 3. Вход, управляемый белком S SARS-CoV-2, вариант B.1.617, может быть заблокирован растворимым ACE2 и мезилатом Camostat.

(A) Частицы, несущие белок S, инкубировали с различными концентрациями растворимого ACE2 (sol-ACE2). ) в течение 30 мин при 37 ° C, прежде чем смеси были инокулированы на клетки Caco-2.

(B) Клетки-мишени Caco-2 предварительно инкубировали с различными концентрациями мезилата Camostat, ингибитора сериновой протеазы, в течение 1 ч при 37 ° C перед добавлением частиц, несущих S-белок. Все панели. Эффективность трансдукции количественно оценивали путем измерения активности люциферазы, кодируемой вирусом, в клеточных лизатах через 16-18 часов после трансдукции. Для нормализации вход, управляемый белком SARS-CoV-2 S, в отсутствие sol-ACE2 или Camostat был установлен как 0% ингибирования. Представлены средние (средние) данные из трех биологических повторов (каждая из которых выполнена с техническими четверными повторами.Планки погрешностей указывают на SEM. Статистическую значимость различий между белками WT и вариантом S или VSV-G анализировали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с посттестом Даннета (p> 0,05, нс [не указано]; p ≤ 0,001, ***).

Устойчивость к терапевтическому антителу Бамланивимаб

Нейтрализующие моноклональные антитела Казиривимаб (REGN10933), Имдевимаб (REGN10987) и Бамланивимаб (LY-CoV555) и Этесевимаб (LY-CoV016) получили для терапии COV016 (рис. S2) (рис. S2). Мы проанализировали, способны ли эти антитела ингибировать вход в клетку-хозяин, управляемый белком S варианта B.1,617. Нерелевантное контрольное антитело (hIgG) не смогло блокировать вход, опосредованный всеми протестированными вирусными гликопротеинами (рис. 4), как и ожидалось. Казиривимаб подавлял вход клетки-хозяина, опосредованный S-белком B.1.351, со сниженной эффективностью, в соответствии с опубликованными данными (Hoffmann et al., 2021a), а также подавлял вход, управляемый S-белком B.1.617, был уменьшен (Рисунок 4) в соответствии с наличием мутаций в сайте связывания антител (рисунок S2). Напротив, вход, опосредованный белками B.1.351 и B.1.617, эффективно ингибировался имдевимабом и смесью казиривимаба и имдевимаба, называемой REGN-COV (рис. 4).Кроме того, бамланивимаб не смог ингибировать вход, управляемый белком S варианта B.1.351, как ожидалось (Hoffmann et al., 2021a), а также не смог блокировать вход, управляемый белком S варианта B.1.617 (рисунок 4). . Устойчивость к бамланивимабу B.1.617 согласуется с мутациями в эпитопе, распознаваемом антителом (рисунок S2). Этесевимаб блокировал вход, управляемый белками WT и B.1.617 S, с сопоставимой эффективностью, но не смог ингибировать вход в клетки, управляемый белком B.1.351 S (рис. 4). Наконец, коктейль из бамланивимаба и этесевимаба оказался менее эффективным в ингибировании B.Вход клетки, управляемый белком 1.617 S, по сравнению с WT SARS-CoV-2 S, и полностью не удалось заблокировать вход, управляемый B.1.351 S (рисунок 4). Эти результаты предполагают, что монотерапия казиривимабом и особенно бамланивимабом может не подходить для лечения пациентов, инфицированных вариантом B1.617.

Рис. 4. Белок S варианта B.1.617 SARS-CoV-2 устойчив к нейтрализации бамланивимабом.

Частицы, несущие белок S, инкубировали с различными концентрациями моноклональных антител в течение 30 мин при 37 ° C перед тем, как смеси были инокулированы на Клетки Vero.Эффективность трансдукции количественно оценивали путем измерения активности люциферазы, кодируемой вирусом, в клеточных лизатах через 16-18 часов после трансдукции. Для нормализации вход, управляемый белком SARS-CoV-2 S, в отсутствие моноклональных антител был установлен как 0% ингибирования. Представлены средние (средние) данные из трех биологических повторов (каждая из которых выполнена с техническими четырех повторами). Планки погрешностей указывают на SEM. Статистическая значимость различий между белками дикого типа и вариантом S была проанализирована с помощью двухстороннего дисперсионного анализа ANOVA с посттестом Даннета (p> 0.05, нс [не указано]; p ≤ 0,05, *; p ≤ 0,01, **; p ≤ 0,001, ***). См. Также рисунок S2.

Снижение нейтрализации плазмой выздоравливающих пациентов с COVID-19

Инфекция SARS-CoV-2 вызывает образование нейтрализующих антител у большинства инфицированных пациентов, и считается, что эти ответы антител важны для защиты от повторного инфицирования (Rodda et al. ., 2021; Wajnberg et al., 2020). Таким образом, мы определили, уклоняется ли вариант B.1.617 от ингибирования антителами, что может способствовать увеличению динамики его передачи.Для этого мы проанализировали опосредованную антителами нейтрализацию с использованием образцов плазмы, полученных от 15 пациентов с COVID-19 в отделении интенсивной терапии университетской больницы Геттингена (таблица S1). Эти образцы плазмы были предварительно проверены на нейтрализующую активность и протестированы на их способность блокировать вход клетки-хозяина, управляемый белком S WT и белком S варианта B.1.617. Белок S варианта B.1.351 служил контролем, поскольку этот белок S эффективно избегает опосредованной антителами нейтрализации (Hoffmann et al., 2021а). Ингибирование проникновения, вызванное белком B.1.351 S, было почти в 6 раз менее эффективным по сравнению с белком WT S (Рисунок 5A и Рисунок S3A). Нейтрализация частиц, несущих белок S варианта B.1.617, также снизилась, но это снижение было менее заметным (~ 2 раза) (Рисунок 5A и Рисунок S3A). Эти результаты предполагают, что вариант B.1.617 может ускользать от опосредованного антителами контроля у выздоравливающих пациентов с COVID-19, хотя и с умеренной эффективностью.

Рис. 5. Белок S варианта B. SARS-CoV-2.1.617 избегает нейтрализации антителами, индуцированными после инфицирования или вакцинации BNT162b2

Белок S варианта B.1.617 SARS-CoV-2 уклоняется от нейтрализации выздоравливающей плазмой (A) или плазмой людей, вакцинированных BNT162b2 (B).

Обе панели: частицы, несущие белок S, инкубировали с различными разведениями плазмы (полученными от инфицированных или вакцинированных лиц) в течение 30 минут при 37 ° C перед тем, как смеси были инокулированы на клетки Vero. Эффективность трансдукции определяли количественно путем измерения кодируемой вирусом активности люциферазы в клеточных лизатах через 16-18 часов после трансдукции и использовали для расчета фактора разведения плазмы / сыворотки, который приводит к 50% снижению входа клеток, управляемого S-белком (нейтрализующий титр 50, NT50).Представлены средние (средние) данные для одной биологической повторности (выполненной с четырьмя техническими повторностями). Планки погрешностей указывают стандартное отклонение. Идентичные образцы плазмы соединены линиями, а числа в скобках указывают на среднее (среднее) снижение чувствительности к нейтрализации для белков S соответствующих вариантов SARS-CoV-2. Статистическая значимость различий между белками дикого типа и вариантом S была проанализирована с помощью парного двустороннего t-критерия Стьюдента (p> 0,05, нс; p ≤ 0.01, **; p ≤ 0,001, ***). См. Также рисунок S3.

Снижение нейтрализации плазмой пациентов, вакцинированных Comirnaty / BNT162b2

Доказано, что вакцинация Comirnaty / BNT162b2 безопасна и с высокой эффективностью защищает от COVID-19 (Polack et al., 2020). Вакцина основана на мРНК, кодирующей белок SARS-CoV-2 S. Вакцина вызывает реакцию антител и Т-клеток (Grifoni et al., 2020; Peng et al., 2020), а нейтрализующие антитела, вызванные вакцинацией, считаются важными для индуцированной вакциной защиты от инфекции SARS-CoV-2.

Таким образом, мы проанализировали, может ли проникновение клеток, управляемое белком S варианта B.1.617, эффективно ингибироваться плазмой от людей, вакцинированных Comirnaty / BNT162b2 (Таблица S2). Чтобы ответить на этот вопрос, мы проанализировали нейтрализацию 15 образцами плазмы, полученными от вакцинированных через две-три недели после того, как они получили вторую дозу вакцины. Все сыворотки эффективно ингибировали вход, управляемый белком S WT (фиг. 5B и фиг. S3B). Ингибирование входа, вызванное белком B.1.351 S, было более чем в 11 раз снижено по сравнению с диким животным (рисунок 5B), что соответствует ожиданиям (Hoffmann et al., 2021а). Вход, опосредованный S-белком варианта B.1.617, также ингибировался менее эффективно, но уклонение от опосредованного антителами ингибирования было менее выраженным (~ 3-кратное снижение) (рис. 5B). Таким образом, вариант B.1.617 может частично ускользать от контроля антителами, индуцированными вакцинацией Comirnaty / BNT162b2.

ОБСУЖДЕНИЕ

Недавний всплеск случаев COVID-19 и смертей в Индии происходит параллельно с распространением нового варианта SARS-CoV-2 B.1.617. Этот вариант содержит мутации в RBD и других частях белка S, которые могут изменять важные биологические свойства вируса, включая эффективность проникновения в клетки-мишени и чувствительность к лекарствам и антителам, нацеленным на процесс проникновения.Настоящее исследование показывает, что белок B.1.617 S может облегчить проникновение в клетки легкого Calu-3 и клетки толстой кишки Caco-2 с несколько повышенной эффективностью и показывает, что проникновение может быть заблокировано растворимым ACE2 и Camostat. Напротив, бамланивимаб, рекомбинантное антитело с EUA, не подавляло проникновение, вызванное белком B.1.617 S, и были получены доказательства умеренного уклонения от антител, вызванных инфекцией и вакцинацией Comirnaty / BNT162b2.

Распространение варианта B.1.617 в Индии может быть частично связано с повышенной пригодностью этого варианта, т.е.е. повышенная способность усиливаться у пациентов и передаваться между пациентами. Повышенная приспособленность была задокументирована для варианта B.1.1.7 SARS-CoV-2 (Frampton et al., 2021; Graham et al., 2021; Leung et al., 2021), но лежащий в основе механизм неясен. Повышенное проникновение в хозяйскую клетку из-за более эффективного связывания ACE2 или более надежной протеолитической активации S-белка может способствовать увеличению приспособленности. Вход в клетки-хозяева, управляемый белком B.1.617 S, не увеличивался при исследовании клеточных линий, экспрессирующих умеренные уровни эндогенного ACE2, таких как клетки 293T, что является аргументом против более эффективного использования ACE2 вариантом B.1,617. Точно так же сопоставимое ингибирование частиц, несущих белок WT или B.1.617 S, растворимым ACE2 указывает на отсутствие существенных различий в эффективности связывания ACE2. Однако белок B.1.617 S способствовал умеренно увеличенному проникновению в линии клеток легких и кишечника человека Calu-3 и Caco-2, соответственно, и этот эффект был гораздо менее выражен, когда ACE2 был сверхэкспрессирован в клетках Calu-3. Следовательно, можно предположить, что B.1.617 может иметь повышенную способность использовать определенные факторы, увеличивающие вход, которые выражаются в зависимости от типа клетки.Потенциальными кандидатами являются гепарансульфат (Clausen et al., 2020), Axl (Wang et al., 2021b) и нейропилин-1 (Cantuti-Castelvetri et al., 2020).

Другим объяснением увеличения распространения варианта B.1.617 в Индии может быть уклонение от иммунитета, то есть способность распространяться среди населения, в котором у значительной части людей уже есть иммунные ответы против SARS-CoV-2. Так обстоит дело в Индии, по крайней мере, в некоторых районах или сообществах с ограниченными ресурсами, в которых распространенность серотипа может превышать 70% (Kar et al., 2021; Малани и др., 2021 г .; Моханан и др., 2021). RBD белка B.1.617 S содержит две мутации, связанные с (L452R) или предполагаемые (E484Q) уклонения от антител. Таким образом, ранее было показано, что мутация L452R способствует ускользанию от нейтрализующих антител (Li et al., 2020). Более того, E484K, представленный вариантами B.1.351 и P.1, придает устойчивость к антителам (Li et al., 2021), и можно предположить, что обмен E484Q может иметь аналогичный эффект. Фактически, и L452R, и E484K, вероятно, ответственны за B.1.617 устойчивость к бамланивимабу (Starr et al., 2021) (рисунок S2). В свете этих результатов не было неожиданностью, что наблюдалось уклонение белка B.1.617 S от антител в плазме выздоравливающих пациентов с COVID-19 и лиц, вакцинированных Comirnaty / BNT162b2. Однако уклонение от опосредованной антителами нейтрализации с помощью B.1.617 S было явно менее выраженным по сравнению с белком S варианта B.1.351. Различия между этими вариантами в отношении дополнительных мутаций, расположенных внутри и вне RBD, вероятно, объясняют их дифференциальную чувствительность к нейтрализации.

В совокупности наши результаты предполагают, что, хотя B.1.617 может в некоторой степени избегать контроля со стороны антител, другие факторы могут способствовать его быстрому распространению, включая потенциальное улучшение физической формы или снижение соблюдения мер защиты от COVID-19 (например, ношение маски и социальное дистанцирование).

ВКЛАД АВТОРА

Концептуализация, M.H., S.P .; Финансирование, S.P .; Расследование, M.H., H.H.-W., N.K., A.K., I.N., L.G., A.S., A.-S.M .; Основные ресурсы, М.S.W., S.S., H.-M.J., M.V.S., G.M.N.B .; Письмо, M.H., S.P .; Рецензия и редактирование, все авторы.

ДЕКЛАРАЦИЯ ОБ ИНТЕРЕСАХ

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Культура клеток

293T (человек, женщина, почка; ACC-635, DSMZ, RRID: CVCL_0063), Huh-7 (человек, мужчина , печень; JCRB0403, JCRB; RRID: CVCL_0336, любезно предоставлено Thomas Pietschmann, TWINCORE, Центр экспериментальных и клинических исследований инфекций, Ганновер, Германия), BHK-21 (сирийский хомяк, самец, почка; ATCC Cat # CCL-10; RRID: CVCL_1915, любезно предоставленный Георгом Херрлером, Университет ветеринарной медицины, Ганновер, Германия) и клетки Vero76 (африканская зеленая мартышка, самка, почка; CRL-1586, ATCC; RRID: CVCL_0574, любезно предоставлено Андреа Майснер, Институт вирусологии) , Philipps University Marburg, Марбург, Германия) культивировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FCS, Biochrom или GIBCO), 100 Ед / мл пенициллина и 0.1 мг / мл стрептомицина (ПАН-Биотех). Caco-2 (человек, самец, кишечник; HTB-37, ATCC, RRID: CVCL_0025), Calu-3 (человек, мужчина, легкое; HTB-55, ATCC; RRID: CVCL_0609, любезно предоставлено Стефаном Людвигом, Институт вирусологии , University of Münster, Германия) и клетки Calu-3, стабильно сверхэкспрессирующие ACE2, Calu-3 (ACE2) (Hoffmann et al., 2021c), культивировали в минимально необходимой среде с добавлением 10% FCS, 100 Ед / мл пенициллина и 0,1 мг / мл стрептомицина (PAN-Biotech), 1x раствор незаменимых аминокислот (из 100x исходного, PAA) и 1 мМ пирувата натрия (Thermo Fisher Scientific).Клетки Calu-3 (ACE2) дополнительно получали 0,5 мкг / мл пуромицина (Invivogen). Клетки A549-ACE2 (Hoffmann et al., 2021a) и A549-ACE2 / TMPRSS2 (Hoffmann et al., 2021a) были получены из родительских клеток A549 (человека, мужчины, легкие; CRM-CCL-185, ATCC, RRID: CVCL_0023 ; любезно предоставлено Георгом Херрлером) и культивируется в среде DMEM / F-12 (ThermoFisher Scientific) с добавлением 10% FCS, 100 Ед / мл пенициллина и 0,1 мг / мл стрептомицина (PAN-Biotech), 1x заменимая аминокислота кислотный раствор (из 100-кратного исходного раствора, PAA), 1 мМ пирувата натрия (Thermo Fisher Scientific) и 0.5 мкг / мл пуромицина (Инвивоген). Клетки A549-ACE2 / TMPRSS2 дополнительно получали 1 мкг / мл бластицидина (Invivogen).

Все клеточные линии инкубировали при 37 ° C в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO 2 . Аутентификацию клеточных линий проводили путем STR-типирования, амплификации и секвенирования фрагмента гена цитохром с оксидазы, микроскопического исследования и / или в соответствии с их характеристиками роста. Кроме того, клеточные линии обычно тестировались на заражение микоплазмами.

Плазмиды экспрессии

Плазмиды экспрессии для DsRed (Hoffmann et al., 2020), гликопротеина вируса везикулярного стоматита (VSV, серотип Индиана) (VSV-G) (Brinkmann et al., 2017), WT SARS-CoV-2 S (оптимизированный по кодонам, на основе изолята Wuhan / Hu-1/2019, содержит обмен D614G; с усечением на С-конце 18 аминокислот) (Hoffmann et al., 2021a), SARS-CoV-2 S B.1.351 (оптимизированный по кодонам; с усечением на С-конце 18 аминокислот) (Hoffmann et al., 2021a), ангиотензин-превращающий фермент 2 (ACE2) (Hoffmann et al., 2013) и растворимый ACE2 (Hoffmann et al., 2021a) были описаны ранее. Чтобы сгенерировать вектор экспрессии для белка S варианта B.1.617 SARS-CoV-2, необходимые мутации были вставлены в последовательность S SARS-CoV-2 WT с помощью ПЦР с перекрывающимся удлинением. Полученную открытую рамку считывания дополнительно вставляли в плазмиду pCG1 (любезно предоставленную Роберто Каттанео, Медицинский колледж Майо, Рочестер, Миннесота, США), используя уникальные сайты рестрикции BamHI и XbaI. Целостность последовательности проверяли секвенированием с использованием коммерческой службы секвенирования (Microsynth SeqLab).Конкретные детали клонирования (например, последовательности праймеров и сайты рестрикции) доступны по запросу. Трансфекцию клеток 293T проводили методом кальциево-фосфатной преципитации, а клетки BHK-21 трансфицировали с использованием липофектамина LTX (Thermo Fisher Scientific).

Получение псевдотипов вируса везикулярного стоматита

Для этого исследования мы использовали частицы рабдовирусного псевдотипа, которые основаны на дефицитном по репликации векторе VSV, который не имеет генетической информации для VSV-G и вместо этого кодирует два репортерных белка, усиленный зеленый флуоресцентный белок. и люцифераза светлячков (FLuc), VSV * ΔG-FLuc (любезно предоставлена ​​Гертом Циммером, Институт вирусологии и иммунологии, Миттельхойзерн, Швейцария) (Berger Rentsch and Zimmer, 2011).Псевдотипирование VSV * ΔG-FLuc проводили в соответствии с опубликованным протоколом (Kleine-Weber et al., 2019). Сначала клетки 293T, которые экспрессировали соответствующий белок S, VSV-G (или не вирусный белок, контроль) после трансфекции, инокулировали VSV * ΔG-FLuc при множественности инфицирования, равной трем, и инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C. Затем инокулят аспирировали и клетки промывали фосфатно-солевым буфером (PBS). После этого клетки получали культуральную среду, содержащую антитело против VSV-G (культуральный супернатант из клеток гибридомы I1; ATCC No.CRL-2700; за исключением клеток, экспрессирующих VSV-G, которые получали только среду) и инкубировали в течение 16-18 часов. Затем собирали частицы псевдотипа. Для этого культуральный супернатант собирали и центрифугировали (2000 x g, 10 мин, комнатная температура) для осаждения клеточного дебриса. Наконец, осветленный супернатант разделяли на аликвоты и хранили при -80 ° C.

Производство растворимого ACE2

Для получения растворимого ACE2, слитого с Fc-частью человеческого иммуноглобулина G (IgG), sol-ACE2, клетки 293T выращивали в колбе T-75 и трансфицировали 20 мкг sol-ACE2. экспрессионная плазмида.Среду заменяли через 10 часов после трансфекции, и клетки дополнительно инкубировали в течение 38 часов. Затем собирали культуральный супернатант, клетки получали свежую среду и дополнительно инкубировали. Собранный супернатант дополнительно центрифугировали (2000 x g, 10 мин, 4 ° C) и хранили при 4 ° C. Еще через 24 ч супернатант культуры собирали и центрифугировали, как описано ранее. Затем осветленные супернатанты из обоих сборов объединяли, загружали в колонки концентратора белка Vivaspin с отсечкой по молекулярной массе 30 кДа (Sartorius) и центрифугировали при 4000 x g при 4 ° C до достижения коэффициента концентрации 20.Наконец, концентрированный золь-ACE2 разделяли на аликвоты и хранили при -80 ° C.

Сбор образцов сыворотки и плазмы

Все образцы плазмы были инактивированы нагреванием (56 ° C, 30 мин) перед анализом. Кроме того, всю плазму предварительно проверяли на наличие нейтрализующей активности против SARS-CoV-2 S дикого типа с использованием теста нейтрализации псевдотипа. Образцы плазмы выздоравливающих были собраны у пациентов с COVID-19, проходивших лечение в отделении интенсивной терапии Медицинского университета Геттингена с одобрения этического комитета Медицинского университета Геттингена (SeptImmun Study 25/4/19 Ü).Для сбора плазмы выздоравливающих использовали вакутайнеры для пробирок для приготовления клеток (CPT) с цитратом натрия, и плазму собирали в виде супернатанта над слоем PBMC. Плазма от людей, вакцинированных вакциной BNT162b2 / Comirnaty BioNTech / Pfizer, была получена через 24-31 день после второй дозы. Исследование было одобрено институциональным наблюдательным советом Ганноверской медицинской школы (8973_BO_K_2020). У вакцинированных пациентов кровь собирали в пробирки S-Monovette ® с ЭДТА (Sarstedt).

Трансдукция клеток-мишеней

Все эксперименты по трансдукции проводили в 96-луночном формате при конфлюэнтности клеток 50-80%. Для экспериментов по изучению тропизма клеток и эффективности проникновения клетки-мишени Vero, Caco-2, Calu-3, Calu-3 (ACE2), 293T, A549 (ACE2), A549 (ACE2 + TMPRSS2) и Huh-7 были засеяны одинаковыми объемами. препаратов псевдотипа. Клетки BHK-21 трансфицировали за 24 ч до инокуляции псевдотипа пустой плазмидой или плазмидой экспрессии ACE2 (0.1 мкг / лунку) с использованием липофектамина LTX (Thermo Fisher Scientific). Для изучения противовирусной активности мезилата Camostat клетки-мишени Caco-2, которые экспрессируют эндогенный TMPRSS2, предварительно инкубировали в течение 1 часа со средой, содержащей различные концентрации (100, 10, 1, 0,1 или 0,01 мкМ) мезилата Camostat ( приготовленный из 100 мМ исходного материала; Tocris) или растворителя диметилсульфоксида (DMSO, 1: 1000; Sigma-Aldrich) в качестве контроля перед инокулированием VSV, несущего S-белок, VSV-G или без гликопротеина. Для экспериментов, посвященных противовирусной активности растворимого ACE2, частицы псевдотипа, несущие S-белок, VSV-G или не содержащие белок, предварительно инкубировали с различными количествами концентрированного sol-ACE2 (конечные разведения sol-ACE2 в смесях: неразбавленные, 1:10, 1: 100, 1: 1000: 10000) или только среду в течение 30 минут при 37 ° C, прежде чем смеси добавляли к клеткам Caco-2.Во всех случаях эффективность трансдукции определялась через 16-18 ч после инокуляции. Для этого культуральный супернатант аспирировали. Затем клетки лизировали в PBS, содержащем 0,5% Triton-X-100 (Carl Roth), в течение 30 минут при комнатной температуре. После этого клеточные лизаты переносили в белые 96-луночные планшеты. Наконец, активность FLuc измеряли с использованием коммерческого субстрата (Beetle-Juice, PJK; Luciferase Assay System, Promega) и Hidex Sense Plate Reader (Hidex).

Тест нейтрализации псевдотипных частиц

Для экспериментов по нейтрализации частицы псевдотипа, несущие S-белок, предварительно инкубировали в течение 30 минут при 37 ° C с различными концентрациями моноклональных антител (Казиривимаб, Имдевимаб, Казиривимаб + Имдевимаб [1: 1], Бамланивимаб, Эзетевимаб, бамланивимаб + этесевимаб [1: 1] или неродственный контрольный IgG [2, 0.2, 0,02, 0,002, 0,0002, 0,00002 мкг / мл]) или образцы плазмы, полученные от выздоравливающих пациентов с COVID-19 или лиц, вакцинированных вакциной BNT162b2 / Comirnaty Pfizer / BioNTech (1:25, 1: 100, 1: 400, 1 : 1,600, 1: 6,400, 1: 25,600), прежде чем смеси были инокулированы в клетки Vero. Во всех случаях частицы, инкубированные только со средой, служили контролем. Эффективность трансдукции определяли через 16-18 ч после инокуляции, как описано выше.

Анализ данных

Результаты, представленные в этом исследовании, представляют собой средние (средние) данные, полученные из трех биологических повторностей, каждый из которых был проведен с техническими четырехкратными повторностями.Единственным исключением являются данные о нейтрализации плазмы от инфицированных / вакцинированных лиц, которые основаны на одном эксперименте (стандарт в данной области), проведенном с четырьмя техническими повторениями. Планки погрешностей определяются как стандартное отклонение (SD, данные нейтрализации с участием плазмы от инфицированных / вакцинированных лиц) или как стандартная ошибка среднего (SEM, все другие данные). Данные анализируются с помощью Microsoft Excel (в составе программного пакета Microsoft Office, версия 2019, Microsoft Corporation) и GraphPad Prism 8 версии 8.4.3 (программное обеспечение GraphPad).

Нормализация данных была выполнена следующим образом: (i) Для сравнения эффективности проникновения различных S-белков трансдукция была нормализована относительно WT SARS-CoV-2 S (установлено как 100%). Альтернативно, трансдукцию нормализовали относительно фонового сигнала (люминесценцию измеряли для клеток, инокулированных частицами, не несущими вирусного гликопротеина; установлено значение 1). (ii) Чтобы исследовать ингибирование управляемого S-белком входа в клетки с помощью sol-ACE2, мезилата Camostat, моноклональных антител или плазмы от инфицированных / вакцинированных лиц, трансдукцию нормализовали относительно контрольного образца (e.g., обработанные контролем клетки или псевдотипы, установленное как 0% ингибирования).

Значение нейтрализующего титра 50 (NT50), которое указывает на разведение плазмы, которое вызывает 50% снижение эффективности трансдукции, было рассчитано с использованием модели нелинейной регрессии (ингибитор против нормализованного ответа, переменный наклон). Статистическую значимость проверяли с помощью одно- или двустороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с апостериорным критерием Даннета, парным t-критерием Стьюдента или множественным t-критерием с поправкой на множественное сравнение (метод Холма-Сидака).Статистически значимыми считались только значения p 0,05 или ниже (p> 0,05, несущественно [нс]; p ≤ 0,05, *; p ≤ 0,01, **; p ≤ 0,001, ***). Подробности статистического теста и планки погрешностей указаны в подписях к рисункам.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Рисунок S1.

Данные о трансдукции нормализованы относительно фона анализа (относится к Фигуре 2). Эксперимент проводился, как описано в легенде на рисунке 1A. Представлены средние (средние) данные из тех же трех биологических повторов (каждая из которых проводилась с техническими четырех повторами), представленных на рисунке 1A, с той разницей, что на этот раз трансдукция была нормализована по сигналам, полученным от клеток, инокулированных частицами, не несущими вирусного гликопротеина (фон, установить как 1).Кроме того, включены данные о трансдукции частиц, несущих VSV-G. Планки погрешностей указывают на SEM.

Рисунок S2.

Расположение мутаций SARS-2-S B.1.351 и B. 1.617 RBD по отношению к интерфейсу связывания казиривимаба и имдевимаба (A), бамланивимаба (B) и эзетевимаба (C) (относится к рисунку 4). Белковые модели рецептор-связывающего домена SARS-2-S (RBD, синий) в комплексе с антителами Казиривимаб (розовый) и Имдевимаб (бирюзовый) были сконструированы на основе матрицы 6XDG (Hansen et al., 2020), в то время как белковые модели RBD SARS-2-S в комплексе с антителом бамланивимабом (фиолетовый) и этесевимабом (желтый) были основаны на PDB: 7L3N (Jones et al., 2020) и PDB: 7C01 (Shi et al., 2020) соответственно. Остатки, выделенные красным, указывают на аминокислотные вариации, обнаруженные в вариантах SARS-CoV-2.

Рисунок S3.

Индивидуальные данные нейтрализации (см. Рисунок 5). Псевдотипы, несущие указанные белки S, инкубировали (30 мин, 37 ° C) с разными разведениями плазмы, полученной от пациентов с COVID-19 (A) или лиц, вакцинированных вакциной Comirnaty / BNT162b2 от Pfizer / BioNTech (B) и инокулированных на мишень Vero. клетки.Эффективность трансдукции количественно оценивали путем измерения активности люциферазы, кодируемой вирусом, в клеточных лизатах через 16-18 часов после трансдукции. Представлены данные одного репрезентативного эксперимента, проведенного с четырьмя техническими повторами. Для нормализации ингибирование входа, управляемого S-белком, в образцах без плазмы было установлено как 0%. Планки ошибок указывают SD. Эти данные в дальнейшем использовали для расчета разведения плазмы / сыворотки, которое приводит к 50% снижению входа клеток, управляемого S-белком (нейтрализующий титр NT50, показан на фиг. 5).

Таблица S1: данные о пациентах с

COVID-19

Таблица S2: данные о пациентах, вакцинированных

BNTl62b2.

Данные о пациентах, вакцинированных BNTl62b2. Серологические данные показывают титр антител против спайкового белка (IgG), определенный с помощью количественного ELISA (SARS-CoV-2-QuantiVac; Euroimmun, Любек, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни антител выражены как RU / мл, оцененные по калибровочной кривой, со значениями выше 10 RU / мл, определенными как положительные, значения за пределами стандартной кривой выражены как> 120 RU / мл.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы хотели бы поблагодарить Роберто Каттанео, Георга Херрлера, Стефана Людвига, Андреа Майснер, Томаса Питчманна и Герта Циммера за предоставленные реагенты. Мы с благодарностью выражаем признательность лабораториям-отправителям, ответственным за получение образцов, и лабораториям-представителям, в которых данные о генетических последовательностях были получены и переданы через Инициативу GISAID, на которой основано это исследование. JM признает финансирование в рамках гранта Центра совместных исследований Немецкого исследовательского фонда (316249678 — SFB 1279), исследовательской и инновационной программы Европейского Союза Horizon 2020 в соответствии с соглашением о гранте № 101003555 (Fight-nCoV) и Федерального министерства экономики Германии (Combi -CoV-2).S.P. признает финансирование BMBF (Консорциум RAPID, 01KI1723D и 01KI2006D; RENACO, 01KI20328A, 01KI20396, консорциум COVIM), округа Нижняя Саксония и Немецкого исследовательского фонда (DFG). Н.К. признает финансирование BMBF (ANI-CoV, 01KI2074A). M.S.W. получил неограниченное финансирование от Sartorius AG, Lung Research.

Обзор литературы »Акушерство и гинекология

Появившись в Китае, новый коронавирус SARS-CoV-2 быстро распространился по всему миру. Беременные женщины — это пациенты, у которых есть факторы риска тяжелых / осложненных ОРВИ и гриппа; однако в настоящее время имеется лишь несколько работ, в которых освещаются особенности течения COVID-19, заболевания, вызываемого новым коронавирусом SARS-CoV-2, у беременных женщин и новорожденных.Цель обзора — поиск и анализ публикаций, посвященных особенностям течения COVID-19 у беременных и новорожденных. Беременность и роды, похоже, не усугубляют течение COVID-19; Напротив, последнее может ухудшить течение беременности: вызвать респираторный дистресс-синдром и привести к преждевременным родам и выкидышу. В настоящее время нет данных о передаче COVID-19 от матери к плоду через плаценту и от матери к ребенку во время грудного вскармливания.Опубликовано большое количество временных руководств по ведению беременных женщин с COVID-19.

С тех пор, как в декабре 2019 года в Ухане (Китай) был зарегистрирован первый случай тяжелого COVID-19, вызванного новым тяжелым острым респираторным синдромом, коронавирусом 2 (SARS-CoV-2), инфекция быстро распространилась почти по всему миру. страны. 11 марта Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) объявила COVID19 пандемией. Предыдущие исследования показали, что беременные женщины подвержены повышенному риску тяжелого или осложненного течения ОРВИ и гриппа [1, 2].Несмотря на важность проблемы, в современной литературе отсутствует информация об особенностях COVID-19 у беременных. Более того, подавляющее большинство соответствующих исследований было опубликовано за последние три месяца с середины февраля до середины мая 2020 года, что показывает, что эта проблема становится все более сложной клинической проблемой во всем мире. Также важно понимать, существует ли риск вертикальной передачи SARS-CoV-2.

Кроме того, имеется ограниченное количество данных об опасности инфекции SARS-CoV-2 для новорожденных.Этот вопрос требует дальнейшего изучения, понимания и разработки клинических руководств. В то же время недоношенные дети заслуживают особого внимания как группа новорожденных с низким иммунитетом и часто с сопутствующими заболеваниями.

Этот обзор направлен на изучение и анализ литературы, в которой описаны характерные особенности COVID-19 у беременных и новорожденных.

Клиническая характеристика COVID-19 у беременных

Беременность и роды, похоже, не усугубляют клиническое течение инфекции COVID-19 или признаки компьютерной томографии (КТ) пневмонии COVID-19.Одно из самых ранних исследований D. Liu et al. проанализировали клинические проявления и особенности КТ пневмонии COVID19 в клинике г. Ухань (Китай) с 20 января по 10 февраля 2020 г. [3]. Все 15 беременных женщин с пневмонией COVID-19 в этом исследовании имели клинические проявления и признаки легкой пневмонии. Инфекции SARS-CoV-2 у новорожденных не обнаружено. Доказано, что беременность и роды не усугубляют тяжесть пневмонии COVID19. Более того, исследователи подняли вопрос о том, необходима ли противовирусная терапия беременным женщинам с пневмонией COVID-19, поскольку симптомы у беременных были легкими, а противовирусная терапия рассматривалась как потенциальный риск для плода.Аналогичное исследование, также проведенное в Китае, также не сообщило об отсутствии серьезных осложнений у матери и новорожденного у беременных с пневмонией COVID-19 [4]. Лишь у некоторых пациентов при поступлении наблюдались респираторные симптомы. По сравнению с контрольной группой у пациентов с пневмонией COV1D-19 при поступлении было более низкое количество лейкоцитов, нейтрофилов, С-реактивного белка и аланинаминотрансферазы. Есть и другие подобные оптимистичные исследования [5–7].

В некоторых статьях сообщалось, что беременные женщины с COVID-19 имели значительно более легкое клиническое течение заболевания, чем небеременные пациентки с аналогичным инфекционным статусом [8].Однако авторы этого исследования отмечают, что это явление может быть связано с другими факторами, такими как, например, более молодой возраст пациентов или обязательное тестирование всех беременных женщин на новый коронавирус.

В других исследованиях сообщалось, что беременные женщины с COVID-19 имели нормальную температуру тела и легкие респираторные симптомы до родов, но имели послеродовую лихорадку [9]. В исследовании H. Chen et al. Девяти беременным женщинам с COVID-19 было выполнено кесарево сечение в третьем триместре [10].Из них у семи пациентов поднялась температура. Также наблюдались другие симптомы COVID-19, включая кашель (у четырех из девяти пациентов), миалгию (у трех), боль в горле (у двух) и недомогание (у двух). В двух случаях наблюдался дистресс плода. У пяти из девяти женщин была повышенная концентрация аминотрансферазы. Был сделан вывод, что клинические характеристики пневмонии COVID-19 у беременных женщин аналогичны таковым у небеременных взрослых пациентов, у которых развилась пневмония COVID-19.

Опубликованы данные об осложнениях беременности после инфицирования другими коронавирусами респираторного синдрома, такими как SARS-CoV и MERSCoV. Эти исследования показывают, что эти коронавирусы могут вызывать серьезные материнские и перинатальные осложнения; поэтому беременных женщин с инфекцией SARSCoV-2 следует лечить с некоторой осторожностью. Другие авторы предполагают, что инфекция SARS-CoV-2 имеет меньший потенциал вызывать неблагоприятные исходы беременности, чем коронавирусы SARS-CoV и MERS-CoV [11–13].

Однако более поздние исследования менее оптимистичны. Они предполагают, что, хотя беременность не ухудшает клиническое течение COVID-19, наоборот, COVID19 во время беременности может вызвать осложнения как для матери, так и для плода. Обзор L. Panahi et al. проанализировали 13 соответствующих статей и выявили, что COVID19 может вызвать дистресс плода, выкидыш, респираторную недостаточность и преждевременные роды у беременных [14]. С другой стороны, было обнаружено, что клинические симптомы COVID-19 у беременных не отличаются от таковых у небеременных женщин.Обзор E. Mullins et al. сообщили, что 15 (47%) из 32 беременных женщин с COVID-19 родились преждевременно, а у двух были тяжелые осложнения беременности [12]. В некоторых обзорах сообщается о перинатальной [15] и материнской смертности [16], связанной с COVID-19.

Трудно отличить распространенные осложнения, встречающиеся при беременностях высокого риска с сопутствующими заболеваниями, такими как преэклампсия, от COVID-19. S. Gidlöf et al. описали клинический случай дихориальной беременности двойней с тяжелой преэклампсией, осложненной COVID-19 [17].У 34-летнего первородящего с гипертонией и протеинурией на 29 неделе беременности был диагностирован гестационный сахарный диабет. Поскольку у нее были признаки пневмонии, был проведен носоглоточный тест на РНК COVID-19, и его результат был положительным. У женщины была тяжелая преэклампсия, осложненная COVID-19. Ей было выполнено экстренное кесарево сечение. У обоих близнецов были отрицательные результаты назофарингеального теста на COVID-19. Сложность заключается в возможности спутать проявления тяжелых осложнений беременности с признаками COVID-19.

Возможность передачи SARS-CoV-2 от матери ребенку

Проблема передачи SARS-CoV-2 от матери ребенку является двоякой, включая передачу либо внутриутробно, либо при грудном вскармливании. Кроме того, новорожденные могут заразиться COVID-19 после рождения, если они вступят в контакт с инфицированными респираторными каплями. Не вызывает сомнений возможность такого режима передачи SARSCoV-2. Поэтому в данной статье он не рассматривается. Давайте рассмотрим каждый из этих режимов передачи более подробно.

В настоящее время нет доказательств внутриутробной передачи COVID-19 от матери к плоду через плаценту. Значительный интерес представляет обзорная статья L. Panahi et al. опубликовано в марте 2020 г. [14]. Авторы провели поиск всех статей, опубликованных в различных базах данных, включая PubMed, Scopus, Embase, Science Direct и Web of Science с декабря 2019 года по 18 марта 2020 года. Обзор 13 заключительных статей, опубликованных в этой области, показал, что отчетов не было. вертикальной передачи SARS-CoV-2 во время беременности и клинические симптомы COVID-19 у беременных не отличались от таковых у небеременных женщин.

Аналогичные результаты были получены в других исследованиях, проведенных почти одновременно с приведенным выше обзором. Обзор E. Mullins et al. проанализировали 23 истории болезни или серии случаев и выявили 32 женщины, пострадавшие от COVID-19 во время беременности, родившие 30 детей [12]. У 25 младенцев случаев вертикальной передачи не зарегистрировано. Статья H. Chen et al. сообщили, что клинические симптомы COVID-19 у девяти беременных женщин в Уханьском университете были аналогичны таковым у небеременных женщин, и случаев передачи вируса детям выявлено не было [10, 18].

В более поздних исследованиях не сообщалось о случаях передачи SARSCoV-2 от матери ребенку [4, 6, 7, 17, 19, 20]. Однако есть редкие сообщения о передаче коронавируса от матери ребенку [21, 22]. В двух случаях остается неясным, произошла ли передача до или вскоре после рождения ребенка. В ходе дискуссии исследователи склоняются к мнению, что COVID-19 ребенок заразился после рождения. В исследовании D. Chen et al. сообщили о новорожденном, у которого был положительный результат теста на инфекцию SARSCoV-2 с помощью ПЦР в реальном времени через 36 часов после рождения [23].Остается неизвестным, был ли новорожденный инфицирован SARSCoV-2 внутриутробно или после родов.

Кроме того, исследованиями не выявлена ​​РНК SARS-CoV-2 в плаценте матерей с подтвержденным COVID-19 [7, 19].

Передача SARS-CoV-2 от матери ребенку при грудном вскармливании также, по-видимому, невозможна [10, 24]. Руководства предполагают, что либо матери, инфицированные COVID-19, могут кормить своих новорожденных грудью при строгих мерах инфекционного контроля, либо новорожденные могут получать свежее сцеженное грудное молоко [24, 25].

Клиническая характеристика COVID-19 у новорожденных

Отсутствуют исследования, посвященные изучению течения COVID-19 у новорожденных. У новорожденных было зарегистрировано немного случаев, а у инфицированных SARSCoV-2 заболевание протекало легко, и ни у одного из них не развились тяжелые неонатальные осложнения [23, 26, 27].

D. Chen et al. сообщили о случае передачи COVID-19 от матери новорожденному в Ухане (Китай) [23]. Новорожденный был переведен в специализированную больницу для детей с инфекцией SARS-CoV-2.После госпитализации у новорожденного не было температуры и кашля, но наблюдалась легкая одышка. Рентген грудной клетки показал легкую инфекцию. Неонатальный уход и наблюдение привели к быстрому исчезновению этих симптомов. Новорожденный был выписан домой через две недели после двух последовательных отрицательных результатов теста на РНК SARS-CoV-2. Другое исследование описало три случая заражения SARS-CoV-2 у новорожденных, у которых также было легкое заболевание [26].

Имеются отдельные сообщения о тяжелых бактериальных осложнениях у новорожденных с COVID-19 [28].Поэтому в таких случаях новорожденных следует обследовать на SARS-CoV-2.

Общие рекомендации по ведению беременных и новорожденных

В настоящее время имеющиеся научные данные основаны на небольших исследованиях с недостаточной продолжительностью последующего наблюдения. Поэтому важно провести дальнейшие исследования для изучения безопасности и здоровья беременных женщин и новорожденных с COVID-19. Беременные женщины подвержены респираторным инфекциям и развитию тяжелой пневмонии, что может сделать их более восприимчивыми к COVID-19, чем население в целом, особенно если у беременных есть хронические заболевания или послеродовые осложнения.Поэтому в стратегиях, направленных на профилактику и лечение инфекции COVID-19, беременных женщин и новорожденных следует рассматривать как критические группы с факторами риска.

В рекомендациях Национальной комиссии здравоохранения Китая предлагается, чтобы новорожденных, рожденных от женщин с подтвержденной или предполагаемой инфекцией COVID-19, необходимо изолировать в отдельной комнате в течение как минимум 14 дней после рождения и не кормить грудью. молоко от матери [29].

Американский колледж акушеров и гинекологов (ACOG) и Общество медицины материнского плода разработали алгоритм, который поможет практикующим врачам быстро обследовать и лечить беременных женщин с подтвержденным или подозреваемым COVID-19 [30].В алгоритме отмечается, что, в отличие от гриппа и других острых респираторных инфекций, касающихся COVID-19, ограниченные данные, доступные в настоящее время, не указывают на то, что беременные женщины подвергаются повышенному риску тяжелой заболеваемости. Однако, учитывая отсутствие опубликованных случаев и небольшой опыт лечения пациентов с другими коронавирусами, такими как SARS-CoV и MERSCoV, необходимо соблюдать особую осторожность при оценке и лечении беременных женщин. Алгоритм был разработан, чтобы помочь практикующим врачам быстро оценить и лечить беременных женщин с известным контактом и / или с симптомами, соответствующими COVID-19 (пациенты с подозрением на COVID-19).Следует помнить, что если вирус гриппа циркулирует в учреждении, он также может вызывать симптомы, совместимые с COVID19. Алгоритм для практикующих врачей по оценке и ведению беременных с подтвержденным или подозреваемым COVID-19 позволяет разделить беременных на группы, включая пациентов, которым не требуется особый пренатальный уход, и группы высокого, среднего и низкого риска.

Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) в США рекомендуют медицинским работникам получить подробную историю поездок для всех категорий пациентов, включая беременных женщин с высокой температурой или ОРИ [31].Поставщики медицинских услуг должны немедленно уведомить персонал инфекционного контроля в своем учреждении о присутствии лиц, подозреваемых в наличии COVID-19.

CDC опубликовал рекомендации для стационарных акушерских учреждений [32]. Они были разработаны для медицинских учреждений, предоставляющих акушерскую помощь беременным женщинам с подтвержденным или подозреваемым COVID-19 в стационарных акушерских учреждениях, включая акушерскую сортировку, роды и родоразрешение, выздоровление и стационарное послеродовое лечение.

Ключевые рекомендации включают следующее:

  • Медицинские работники должны незамедлительно уведомить персонал инфекционного контроля в своем учреждении о предполагаемом прибытии беременной пациентки, у которой подтвержден или подозревается COVID-19.
  • Пациенты с подтвержденным COVID-19 или подозрением на COVID-19 должны находиться под присмотром в отдельной комнате с закрытой дверью. Для пациентов, подвергающихся аэрозольным процедурам, следует оставить кабинеты для изоляции от инфекций, передающихся воздушно-капельным путем.
  • Младенцы, рожденные от матерей с диагнозом COVID-19 или с подозрением на него на момент родов, должны находиться под наблюдением.

Чтобы снизить риск передачи коронавируса от матери ребенку, учреждениям акушерства следует рассмотреть возможность временного разлучения матери с известным или подозреваемым COVID-19 и ее младенца (например, предоставление отдельных комнат).

Кроме того, CDC разработал Временное руководство по грудному вскармливанию и кормлению грудным молоком в контексте COVID-19 [33].Иногда кормление грудью или кормление грудным молоком не рекомендуется. Вопрос о том, следует ли и как начинать или продолжать грудное вскармливание, должна решать мать в сотрудничестве с ее семьей и поставщиками медицинских услуг. Матери с подтвержденным COVID-19 следует посоветовать принять все возможные меры предосторожности, чтобы избежать передачи вируса своему ребенку, включая гигиену рук и ношение тканевого покрытия лица. При сцеживании грудного молока сцеживанием вручную или с помощью молокоотсоса мать должна вымыть руки перед тем, как прикасаться к каким-либо частям насоса или бутылочки, и надеть тканевое покрытие лица.Кроме того, ей следует тщательно очищать и дезинфицировать молокоотсосы после каждого использования.

CDC рекомендует, чтобы все поставщики медицинских услуг, которые входят в палату матери или ребенка с подозрением или подтвержденным COVID-19, следовали рекомендованным мерам профилактики и контроля инфекций, включая использование рекомендованных средств индивидуальной защиты. Подробные рекомендации опубликованы во Временном клиническом руководстве по ведению пациентов с подтвержденным коронавирусным заболеванием (COVID-19) [31].

Королевский колледж акушеров и гинекологов (RCOG, Великобритания) опубликовал Руководство для медицинских работников по заражению COVID-19 во время беременности [34].Общие рекомендации по оказанию медицинских услуг беременным:

  • Учитывая риски для беременности, связанные с COVID-19, беременные женщины должны обеспечить соблюдение мер социального дистанцирования.
  • По возможности рекомендуется устанавливать все контакты по телефону или с помощью видеоконференцсвязи.

При дородовой помощи беременным женщинам с подтвержденным COVID-19, которые в настоящее время находятся в периоде самоизоляции, назначенные визиты следует отложить; никаких дополнительных тестов не требуется; даже если у женщины отрицательный результат на COVID-19, но у нее есть симптомы COVID-19, следует предполагать COVID.

Для женщин с подтвержденным COVID до рождения:

  • Неонатальная бригада должна быть проинформирована о скором рождении ребенка у женщины с умеренной или тяжелой формой COVID-19 как можно раньше.
  • Относительно способа доставки следует принимать индивидуальное решение. Кесарево сечение следует проводить в соответствии с индивидуальной оценкой по показаниям в соответствии с обычной практикой.
  • Учитывая связь COVID-19 с острым респираторным дистресс-синдромом, следует тщательно наблюдать за женщинами с легкими или тяжелыми симптомами COVID-19.Усилия должны быть направлены на достижение нейтрального баланса жидкости в родах.

Кроме того, Королевский колледж акушеров и гинекологов предлагает алгоритм, который поможет практикующим врачам в оценке и ведении беременных женщин с подтвержденным и подозреваемым COVID-19.

На веб-сайте Минздрава России представлены Временные рекомендации по профилактике, диагностике и лечению новой коронавирусной инфекции (COVID-19), которые в целом аналогичны Временным клиническим руководствам CDC [35].На момент написания (24.04.2020) это была 6-я версия рекомендаций. Оказание акушерской помощи пациентам с COVID-19 рассматривается в главе 5.5 Руководства. Кроме того, есть подразделы, посвященные ведению беременных, рожениц и рожениц. Стратегии акушерского ведения определяются несколькими аспектами, включая тяжесть состояния пациента, состояние плода и срок беременности. У пациенток с умеренным и тяжелым течением COVID-19 до 12 недель беременности прерывание беременности возможно после излечения заболевания.Регионарная анестезия является предпочтительным методом обезболивания при отсутствии противопоказаний. Противовирусная, антибактериальная, дезинтоксикационная терапия и респираторная поддержка проводятся по показаниям. Прогноз для матери и плода зависит от срока гестации, в котором возникло заболевание, наличия преморбидного фона (курение, ожирение, сопутствующие заболевания, включая заболевания дыхательных путей и ЛОР-органов, сахарный диабет и ВИЧ-инфекция), тяжести инфекционного процесса. , наличие осложнений и своевременность противовирусной терапии.В отдельном блоке описывается ведение новорожденных в условиях пандемии коронавируса COVID-19.

Заключение

Беременные женщины подвержены повышенному риску развития тяжелого или осложненного течения ОРВИ и гриппа. Таким образом, лечение инфекции COVID-19 у беременных требует тщательного взвешивания рисков и преимуществ для матери и плода. Беременность и роды, похоже, не усугубляют клиническое течение инфекции COVID-19 или признаки КТ COVID-19, а клинические характеристики пневмонии COVID-19 в целом аналогичны таковым у небеременных взрослых пациентов с COVID-19.Однако COVID-19 во время беременности может вызвать осложнения как для матери, так и для плода, включая дистресс плода, выкидыш, респираторную недостаточность и преждевременные роды. Также существует проблема различения проявлений тяжелых осложнений беременности и признаков COVID-19. В настоящее время нет данных о передаче SARS-CoV-2 от матери ребенку. Также маловероятно, что матери с COVID-19 могут передать вирус своим новорожденным через грудное молоко. Многие в целом аналогичные руководящие принципы ведения беременных женщин с COVID-19 были опубликованы с начала вспышки, в том числе Временные рекомендации по профилактике, диагностике и лечению новой коронавирусной инфекции (COVID-19), доступные на веб-сайте Минздрав России.

Припутневич Татьяна Валерьевна, заведующая отделением микробиологии, клинической фармакологии и эпидемиологии, Национальный медицинский исследовательский центр акушерства,

Гинекология и перинатология им. Академика В.И. Кулакова Минздрава России, кандидат медицинских наук.

Тел .: +7 (910) 414-56-16. Электронная почта:

.

Адрес: 117997, Москва, ул. Опарина, 4.

Гордеев Алексей Борисович, старший научный сотрудник лаборатории микробиологии отделения микробиологии, клинической фармакологии и эпидемиологии Национального медицинского исследовательского центра акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.Кулаков И.В. Минздрава России, к.м.н.

Тел .: +7 (916) 226-86-67. Электронная почта:

.

Адрес: 117997, Москва, ул. Опарина, 4.

Людмила Анатольевна Любасовская, заведующая отделением клинической фармакологии отдела микробиологии, клинической фармакологии и эпидемиологии, Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. Академика В.И. Кулакова Минздрава России, кандидат медицинских наук.

Тел .: +7 (906) 074-42-46. Электронная почта:

.

Адрес: 117997, Москва, ул. Опарина, 4.

Наталья Евгеньевна Шабанова, научный сотрудник отдела клинической фармакологии отдела микробиологии, клинической фармакологии и эпидемиологии ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии» Минздрава России имени академика В.И. Кулакова, кандидат медицинских наук.

Тел .: +7 (985) 097-58-27.Электронная почта:

.

Адрес: 117997, Москва, ул. Опарина, 4.

Выходные данные: Припутневич Т.В., Гордеев А.Б., Любасовская Л.А., Шабанова Н.Е.
Новый коронавирус SARS-CoV-2 и беременность: обзор литературы
Акушерство и гинекология / Акушерство и гинекология. 2020; 5: 6-12.
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2020.5.6-12

Блог о заработке в Интернете — Kiếm tiền online

САЙТ PTC NGA

Автор: tiendv
Чт Тоу, 6 чт 11, 2013

Tick và bỏ tick như hình.ở cái 18+ kia, chọn dòng 2 (cho phép nhiều hơn 18ads).

Cần điền thì iền pass cấp 2. Chú ý pass cấp 2 được gửi về hộp thư webmoney hoặc mail. Các bạn check kỹ sẽ thấy.

Cng tương tự như site trên, Tick và bỏ tick như hình , pass cấp 2 thì check ở hộp thư của webmoney nhé! Mình tìm trên mail thì không thấy.

Hướng dẫn reg 2 site mới:

Ai dùng roboform thì điền lại cái chỗ имя пользователя như trong hình nhé!

— Không được dùng chrome để dịch, nên reg bằng firefox

— Ấn vào (1) nó sẽ hiện ra bảng ăng ký

— ăng ký như bình thường

2.http://uspeh-bux.ru/?r=ddvtien17
— Không được dùng chrome để dịch, nên reg bằng firefox

— Sau khi ấn vào link trên bạn Нажмите như hình

— ăng ký bình thường như các site khác.

Популярное сообщение

  • Деньги на Paidcoin.com: бонусные деньги (600coin = 1 $) _ Thanh toán qua PayPal Link на сайте: http://paidcoin.com/landingpage.php?ref=16820 …

  • u tiên mình muốn nói đây là mình mượn bài giới thiệu về socialbox (có proof) của bác chantroitudo và bài share tool của candylove bên M…

  • Kim tiền với prom247 trả tiền bằng Webmoney Z Proof ây nha:

  • Ri, bây giờ n lúc giới thiệu site mới cho các mem: http://vidinterest.com — Một trang kiếm từ bằng cách добавить видео для просмотра. — Транг …

  • http://webof-sar.ru/partner.php?r=71980 http://wmreklama.com/advertise.php?r=52827 http://wmastra.ru/advertise.php?r=5502 http: // …

  • Kiếm tiền từ Like 143: Đăng ký nhận (250 монет + 0.50 $) — (25 монет Bonus hàng ngày) — (500 монет = 1 $) Thanh toán qua Ngân Lượng Link ăng ký: …

  • Cập nhật 30.10.2013 http://www.economybux.com/?ref=ddvtien17 — PTCEvolution http://www.lynkar.com/?ref=ddvtien17 — PTCEvolution Cập …

  • Sau khi bạn NG NHẬP, bạn có thể ghi nhớ địa chỉ khu vực của bạn tại «домашний район» Bạn cũng có thể щелкните vào «Мой район и …

  • Mình sẽ giới thiệu về một công ty-được gọi là NAVIZON Rất đơn giản, bạn sẽ được trả tiền bằng việc đi i lại lại (khi bạn diin…

  • 3. Link ăng ký Smmka >> min rút là 15rub Hướng dẫn cách làm (закрыть) vào link >> làm theo hướng dẫn: sẽ đưa bạn đến ăng …

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера на прием файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.
    Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
    браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.
    Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie
потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файлах cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт
не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к
остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Âm nhạc xoa dịu những trái tim tổn thương trong mùa dịch

Âm nhạc ngoài tính giải trí, định hướng và giáo dục còn có tính chữa lành. Trong mùa dịch, âm nhạc xoa dịu những tổn thương tinh thần của con người.

Âm nhạc chữa lành không biên giới

Cách ây không lâu, «đêm nhạc» không tên vỏn vn 1 giờ ng h din tr s TP.HCM. Nhóm nghệ sĩ Phương Thanh, саксофон Trần Mạnh Tuấn, Quốc Đại, Ái Phương, Ngọc Linh … trình diễn như ln cuối cầm mic, thổi kèn qua chiếc mặt nạ N95.

BS. Nguyễn Thành Tâm (Bệnh viện dã chin thu dung số 1, TP.HCM) nói: «Các bệnh nhân F0 ở đây rất стресс.Tôi mong những chương trình ý nghĩa thế này sẽ được nhân rộng ở các bệnh viện khác «.

Người Tu nghe có thể rơi nước nh

Ở Hà Nội, ca sĩ Huyền Anh Yoko rơi nước mắt. «Tiếng kèn Saxophone của nghệ sĩ Trần Mạnh Tuấn vang lên giai điệu bài Quê hương Quê hương. Ôi nghe sao mà da diết, xúc động đến thế … «, cô viết.

Không phân biệt y bác sĩ và các bệnh nhân F0 ở bệnh viện dã chin TP.HCM, Huyền Anh Yoko ở Hà Nội hay bao khán giả ở mọi miền đất nước, họ thấy nhẹ nhõm, dễ chịu, những gánh nặng tinh thần vợi đi, những tum ni.

Tháng 3/2020, nhiều người dân Italia ra ban công nhà riêng hat, nhảy, chơi nhạc cụ động viên ln nhau trong những ngày thành phố trầm lắng vì dịch bch bch. Nhiều người không biết chơi nhạc vẫn mang dụng cụ làm bếp ra khua khon hưởng ứng những tiết mục nghiệp dư vì họ thấy được chữa lành vàcết nối.

Nhạc sĩ Miên Đức Thắng sau nhiều năm nghiên cứu về tính chữa lành của âm nhạc, chia sẻ với VietNamNet rằng kh năng chữa là minh cnh cnh âm nhcnh âm nhc.Тео đó, các tế bào thần kinh trong não người phát ra những loại sóng khác nhau. Mỗi loại sóng lại liên đới đến trạng thái tinh thần của con người như tỉnh táo, tập trung, thong thả, vui vẻ …

Âm nhạc với những tầcnâ, b, b sẽ thay đổi tâm trạng thông qua các loại sóng của tế bào thần kinh, từ đó giảm bớt căng thẳng, mệt mỏi, thậm chí tác ng tích cực đến cơ thể người. «Như vậy, bài hát có tính chữa lành là những bài giúp chúng ta giảm bớt căng thẳng, âu lo, cảm thấy vui vẻ, hạnh phúc và bình yênĩ», nhạc và bình yênĩ.

BS. Phạm Việt Hà (Khoa Covid B3, BV dã chiến điều trị Covid-19 Phạm Ngọc Thạch TP.HCM) cho hay, trên thế giới đã có một số nghiên cứu chứng minh c âu.

«Являюсь NHAc có Tac Зунг điều Хоа кулачкового xúc. MOT Šo Trường HOP Toi Biet, người điều TRI VAN Dje tâm Lý được чо Nghe NHAc Dje Lam Диу Транг Thái Тинь thần của хэ, từ DJO ИСП М.О. цзя С.Е. VAN Dje của mình với bác sĩ hơn. Các phòng khám hin nay cũng rất quan tâm chọn bài hát nào để phát ở khu vực bệnh nhân ngồi chờ khám bnh.Ây là ứng dụng rất thực tế của âm nhạc. Cá nhân tôi từng trải qua những giai đoạn chông chênh, tiêu cực và trở nên ổn hơn nhờ nghe nhạc «, anh nói.

ng hơn «.

MC Minh Đức nói thêm, âm nhạc chữa lành được nh nghĩa bởi mỗi người. Тео анх, các môn nghệ thuật đều có khả năng chữa lành nhưng một người có thể không cảm nhận được bức tranh vẫn dễ dàng nghe và thuộc nhanh vàti có.Điều đó cho thấy âm nhạc dễ tiếp cận số đông hơn cả. Suốt thời gian qua, màn trình diễn của Trần Mạnh Tuấn hay những hòa nhạc trực tuyến, MV, bài hát, … tác động rõ nét đến công chúng, cho thấy thnhà nhcnn.

Chúng ta cần lắm âm nhạc lúc này!

Con người chịu nhiều tổn thương tinh thần vì dịch bệnh. Các nguồn khảo sát uy tín từ Science Direct, Embase, Scopus, PubMed, Web of Science (ISI) в базах данных Google Scholar, когда вы испытываете стресс, lo âu và trầm cảm tăng cao trong nửa cuối na 2020 (20.05.2020) — 12/2020).Âm nhạc là giải pháp chữa lành n giản và hiệu quả cho tinh thần con người lúc này.

Việt Nam, nhiều sản phẩm c ánh giá là có tính chữa lành: Heal me của Nguyn Văn Chung; Путешествие Ханх Линь của Ханх Линх коут хап Вы Тхин Тхань; Rừng xưa ã khép Hòa âm của đại ngàn của Võ Thiện Thanh; Tình àn của Ngô Hồng Quang, …

Ca sĩ Lê Cát Trọng Lý.

Các ca sĩ như Lê Cát Trọng Lý, Nguyên Hà ,… được tìm đến bởi giọng hát, phong cách hát nhẹ nhàng như kể, như ru, luôn tạo cảm giác xoa dịu, vỗ về người nghe. Không chỉ hát, Rap cũng làm điều tương tự nếu đó là sự thiện lành trong âm nhạc en Vâu, năng lượng yêu tươi trẻ của HIEUTHUHAI, …

Nămnăm Anh viết nhạc để tự chữa lành cho mình và альбом Heal me ra đời. «Той кхонг виếт дựа трэн мộт нềн тảнг нгиен цу хоа хук нао. Ай ла сảн фẩм ам нхук ко тінь ча лан ч ч кхонг фуи ам нк тị линь.6 bài nhạc chính là 6 bước tự chữa trị của tôi. Tôi tin rằng chúng cũng sẽ chữa lành cho mọi người «, anh nói.

Anh chia sẻ với VietNamNet tin nhắn của nhiều khán giả cảm n anh vì họ đượâ Хан Гиу Нгуен Тхо Уйен нхан чо Нгуен Ван Чунг: «Той нге ан бай тх 2 Исцеляющее заклинание тх бет хок ма хонг биет ви сао». Khóc xong, tôi thấy thanh thản, nhẹ lòng hơn «. Nhạc sĩ nói thêm:» Альбом này không hot trên thị trường nhưng tôi rất hạnh phúc vì nó có ích cho người nghe «.

«Хọа ми» Ханх Линь чо рằнг ка с óng вай тро куан тронг тронг việc chuyển tải giá trị chữa lành trong âm nhạc. «Tôi thường đặt mình vào v thế của khán giả khi thu âm, vì ca s luôn là khán giả đầu tiên của chính mình. Từ ó, người ca sĩ có chnh ch … để chuyển tải những giá trị họ mong muốn. Cá nhân tôi không kể hát nhạc vui, buồn đều muốn hướng người nghe của mình đến sự tích cựcị nêi «, chinê.

Альбом Khi làm Путешествие Khanh Linh , chị không nghĩ đến bối cảnh dịch bệnh.Nhưng thời gian gần ây, nhiều người quen nói với Khánh Linh rằng họ nghe các bài trong, альбом ва hiện lên trong tâm trí một cảnh thiên nhiên khoáng tt, nhn nhiên khoáng tt, nhn. «Thật vui khi tôi đã chuyển tải đúng những gì tôi muốn trong album này», chị cho hay.

«Nghe nhạc không có thêm đồng nào nhưng chắc chắn nhẹ nhàng hơn».

MC Minh Đức lý giải: «Đại dịch thay đổi mọi thứ, những điều vốn dễ dàng bng trở nên khó khăn nên năng lượng tích cực cc hết sct th.Кхонг хо вĩ мо, бạн нге мộт бай хат чонг có тм đồнг нао нхонг чц чн ít nhiều tươi tỉnh, thấy c an ủi ».

Vì thế, âm nhạc là cách thức nhanh chóng và dễ dàng để lan tỏa nă năng lượng tích cực. Thông điệp âm nhạc vô hình, sức mạnh của âm nhạc cũng vô hình nhưng mạnh mẽ, i sâu vào tâm thức và có sức lan rộng.

Trong hơn 1 tuần phong tỏa nơi mình sống, Минь Đức ã nghe hết a của nghệ sĩ Piano Lang Lang. «Той нге cổ iển khá nhiều nhưng đây là lần nhạc cổ điển thấm vào tôi dễ và nhanh nhất.Đó là cách tôi duy trì sự tích cực dù vẫn khá lạc quan », anh nói thêm.

Тронг thời dịch, ngay cả khi con người bị gián đoạn kết nối với nhau, với những sinh hoạt, thói quen và thú vui quen thuộc thì âm nhạc vẫn b.