Система contact: Система CONTACT

Содержание

Денежные переводы Contact в Казани

ул. Сибирский тракт д. 51	Пн-Пт: с 9.00 — 19.30 Cб.: выходной Вс: выходной	БТА-Казань АКБ, ОАО
ул. Межлаука, 13	пнд-птн с 09:30 до 18:00,перерыв с 13:00 до 14:00сбб-вскр с 09:30 до 17:00,перерыв с 13:00 до 14:00	КБ «ИнтехБанк»
Четаева ул., 56	Часы Работы:Пн-Пт с 08:30 до 18:30Перерыв:Пн-Пт с 12:30 до 13:30	Кара Алтын (Казань, Четаева, 56)
Зинина ул., 4	Часы Работы:Пн-Пт с 09:00 до 16:00сб с 09:00 до 13:00Перерыв:Пн-Пт с 12:30 до 13:30	Татагропромбанк
Вишневского ул., 24	Часы Работы:Пн-Пт с 09:00 до 15:30	ТатИнвестБанк
ул. Адоратского, 2	Время работы: 8:30-16:00 пнт 8:30-15:00 пер 12:30-13:30суббота: не работаетвоскресенье: не работает	ЗАО АИБ «Ипотека-Инвест»
ул. Энергетиков, 2/3	Время работы: 9:15-16:00 птн 9:15-15:00 пер 12:35-13:20суббота: не работаетвоскресенье: не работает	ЗАО АИБ «Ипотека-Инвест»
ул. Сахарова, 17	Время работы: 9:00-15:00 пер 13:00-13:30суббота: 9:00-18:00 пер 13:00-13:30воскресенье: 9:00-18:00 пер 13:00-13:30	ЗАО АКБ «Татинвестбанк»
ул. Чистопольская, 28	Время работы: 9:00-15:00 пер 13:00-13:30суббота: 9:00-19:00 пер 13:00-13:30воскресенье: 9:00-19:00 пер 13:00-13:30	ЗАО АКБ «Татинвестбанк»
ул. Салимжанова, 1	Время работы: 9:00-18:00 пер 13:00-14:00суббота: не работаетвоскресенье: не работает	ОАО «Акибанк»
ул. Карла Маркса, 11/12 (пт до 15:00)	Пн-Пт: 09:30-16:00СУБ: Вс:	Номос-Банк
ул. Петербургская, 88	Пн-Пт: 09:00-19:00СУБ: 09:00-15:00Вс:	Уралсиб
ул. Амирхана, 21	Пн-Пт: с 8-30 до 19-00ч, перерыв: с 13-00 до 14-00ч.Сб: с 9-00 до 17-00ч, перерыв: с 13-00 до 14-00ч.Вс: с 9-00 до 14-00ч.	«АК Барс» Банк, ОАО
бта-Казань (Казань, Симонова, 14/41) ул. Симонова, д. 14/41	Пн-Пт: с 8.30 до 19.30 (с 13.00 до14.00)Сб: с 8.30 до 17.30 (с 13.00 до14.00)Вс: выходной	КиберПлат
бта-Казань (Казань, Рихарда Зорге, 82) ул. Рихарда Зорге, д. 82	с 8.30 до 19.30 (обед: с 13.00 до14.00)с 8.30 до 17.30 (обед: с 13.00 до14.00)Вс: выходной	КиберПлат
бта-Казань (Казань, Пушкина, 12) ул. Пушкина, д. 12	Пн-Пт: с 8.30 до 19.30 (с 13.00 до14.00)Сб: с 8.30 до 17.30 (с 13.00 до14.00)Вс: с 10.00 до 14.00	КиберПлат
бта-Казань (Казань, Минская, 12) ул. Минская, д. 12	с 8.30 до 19.30 (обед: с 13.00 до14.00)с 8.30 до 17.30 (обед: с 13.00 до14.00)Вс: выходной	КиберПлат
бта-Казань(Казань, ул. Чуйкова, д. 9) ул. Чуйкова, д. 9	Пн-Пт: с 8.30 до 19.30(обед с 13.00 до14.00)Сб: с 8.30 до 17.30 (обед с 13.00 до14.00)Вс: выходной	КиберПлат
бта-Казань (Казань, Гвардейская, 16в) ул. Гвардейская, д. 16в	с 8.30 до 19.30 (обед: с 13.00 до14.00)с 8.30 до 17.30 (обед: с 13.00 до14.00)Вс: выходной	КиберПлат
бта-Казань Банк (Казань, Ибрагимова, 58) пр. Ибрагимова, д. 58	Пн-Пт: с 8.30 до 19.30Сб: с 8.30 до 17.30Вс: с 10.00 до 14.00	КиберПлат

В канун Дня Победы система CONTACT и ООО КБ «РостФинанс» проведут специальную акцию для ветеранов

ООО КБ «РостФинанс» присоединился к акции «В CONTACT’e с Победой», в рамках которой 9% от комиссии за услуги денежных переводов и платежей по системе CONTACT, совершенных 7 и 8 мая, будут перечислены в Российский Союз Ветеранов.

В преддверии 70-летия Великой Победы партнер ООО КБ «РостФинанс» система CONTACT объявила о всероссийской акции «В CONTACT’e с Победой» в знак благодарности и поддержки ветеранам Великой Отечественной Войны. ООО КБ «РостФинанс» также не остается в стороне и присоединяется к Акции системы CONTACT.

Переводя деньги или совершая платежи по системе CONTACT в канун Праздника — 7 и 8 мая — клиенты ООО КБ «РостФинанс» могут быть уверенными, что тем самым они также помогают людям, которым наша страна обязана Победой в Великой Отечественной Войне.

Согласно условия Акции: 9% от суммы собранной комиссии за денежные переводы и платежи в период проведения Акции Платежная система CONTACT перечислит в виде благотворительного пожертвования на расчетный счет Общероссийской общественной организации ветеранов «Российский Союз ветеранов».

Платежная система CONTACT работает с 1999 года. По решению ЦБ РФ система CONTACT признана национально значимой. Система CONTACT в настоящее время является одним из лидеров в сфере денежных переводов в России и странах ближнего зарубежья. Партнерами CONTACT являются более 900 финансовых институтов России и мира. Международная сеть CONTACT включает свыше 410 тысяч пунктов обслуживания — банковских отделений, платежных терминалов, офисов банковских платежных агентов и др., более чем в 170 странах. Система CONTACT осуществляет платежи в адрес свыше 2 тысяч юридических лиц – коммерческих банков, торговых предприятий, страховых и туристических компаний и их агентов, интернет-провайдеров, операторов связи и др. Ежегодно услугами Системы пользуются миллионы клиентов по всему миру. Система CONTACT является лауреатом премии «Права потребителей и качество обслуживания-2014», а также трехкратным победителем общероссийского конкурса «Марка №1 в России» в категории «Денежные переводы» в 2011, 2012, 2013 гг.

Платежная система Contact работает в Таджикистане в штатном режиме — Экономика и бизнес

МОСКВА, 3 декабря. /ТАСС/. Платежная система Contact опровергла информацию о приостановке денежных переводов в Таджикистан. Сейчас система работает в штатном режиме без перебоев, говорится в пресс-релизе компании.

Во вторник издание РБК сообщило, что переводы в Таджикистан приостановили Western Union, Contact и «Близко», тогда как Unistream, MoneyGram и «Золотая корона» продолжают проводить операции. При этом в понедельник в Нацбанке Таджикистана заявляли, что Unistream, Western Union и Contact уже подписали соответствующие соглашения и подключились к процессинговому центру.

Позже в пресс-службе Национального банка Таджикистана ТАСС уточнили, что платежные системы Unistream, Western Union и Contact подключились к запущенному во вторник Национальному процессинговому центру. Переводы через Contact будут доступны во вторник во второй половине дня, а через Western Union — в течение одного-двух дней.

«Подключение к Национальному процессинговому центру было произведено в срок и согласно таймингу, разработанному с коллегами из Национального банка Таджикистана. Это была непростая задача, поскольку данная система не имеет аналогов на территории СНГ, но мы справились с ней и в полной мере продолжаем работу на территории республики», — сообщил руководитель платежной системы Contact Сергей Нестеров, чьи слова приведены в пресс-релизе.

Национальный процессинговый центр был создан для повышения эффективности системы денежных переводов и прозрачности операций, а также минимизации операционных рисков. Функционирование центра направлено на обеспечение стабильности финансово-банковского сектора и создание предпосылок для безопасных денежных переводов в стране.

По информации Нацбанка Таджикистана, в результате переговоров с иностранными платежными системами комиссия на значительную (около 80%) часть объема денежных переводов снизилась с 1,5% до 1,0%, что существенно сокращает затраты отправителей и получателей денежных переводов. НБТ также уверяет всех участников рынка платежных систем, что в процессе создания НПЦ были максимально учтены интересы всех заинтересованных сторон.

«Коммерсантъ» узнал о попытке системы Contact обойти санкции на Украине

Служба безопасности Украины (СБУ) установила, что одна из российских систем денежных переводов пыталась предоставлять услуги на территории страны в обход санкций. По данным газеты «Коммерсантъ», речь идет о системе Contact.

Из сообщения СБУ следует, что одна из запрещенных на Украине российских платежных систем при поддержке партнера – международной платежной системы Tyme – пыталась оказывать услуги на территории страны. На основании материалов СБУ Национальный банк Украины принял решение об отмене регистрации Tyme. Название российской платежной системы в сообщении не приводится.

Как выяснил «Коммерсантъ», переводы на Украину в обход санкций совершала система Contact. До недавнего времени эта информация содержалась на ее сайте, утверждает издание. Contact принадлежит группе Qiwi, которая с 2011 по 2013 г. также владела финансовой компанией ОМП-2013 (распоряжается брендом Tyme).

Contact эту информацию «Ведомостям» опровергает. В сообщении компании говорится, что Contact является международной платежной системой и работает в строгом соответствии с законодательством каждой из стран, где представлена система. Переводы из России на Украину и в обратном направлении посредством Contact не осуществлялись, подчеркивается в заявлении. В то же время там отмечается, что «зарубежные партнеры Contact осуществляли переводы в Украину, в том числе в рамках сотрудничества с партнерами из стран дальнего зарубежья, что является общемировой практикой и соответствует как российскому, так и местному законодательству». А система Contact не имела никаких договорных отношений с платежной системой Tyme.

Украина ввела санкции в отношении российских платежных систем в октябре 2016 г. Ограничения изначально затронули системы «Колибри», «Золотая корона», «Юнистрим», «Лидер», Anelik и Blizko, позже в список попали Webmoney и Contact. Весной 2017 г. Россия ввела ответные санкции и запретила денежные переводы на Украину через иностранные платежные системы.

По словам собеседников «Коммерсанта», чтобы обойти украинские и российские санкции, в схеме помимо российской и украинской платежной систем должен был быть задействован игрок из третьей страны. Один из источников предположил, что российская платежная система могла «собирать» платежи в России и передавать их сторонней платежной системе, которая, в свою очередь, направляла их на Украину. Источники «Коммерсанта» допустили, что третьей стороной могла быть грузинская система денежных переводов Intel Express. Связаться с представителями грузинской системы не удалось, СБУ не ответила на запрос издания.

«Ингосстрах» принимает платежи по системе CONTACT — Новости

09.08.2012

«Ингосстрах» продолжает совершенствовать клиентские сервисы и расширяет спектр услуг за счет введения новой возможности оплаты страховой премии по системе CONTACT.

Теперь страховую премию по договору страхования, заключённому с ОСАО «Ингосстрах» как со страховщиком, можно оплатить, помимо прочих возможностей, также и в отделении любого банка, который предоставляет услугу денежных переводов в пользу юридических лиц по системе CONTACT. Услуга действует на всей территории России. Платежи в рамках системы CONTACT осуществляются в рублях. Комиссия за перевод денежных средств в счет оплаты полисов с клиентов «Ингосстраха» не взимается. Зачисление денежных средств происходит в режиме реального времени.

Процедура довольно проста и занимает несколько минут. Для проведения платежа достаточно сообщить оператору название компании – ОСАО «Ингосстрах», номер полиса или счета, выданного в офисе «Ингосстраха», сумму платежа и осуществить оплату.

«Мы постоянно работаем над тем, чтобы сделать процесс коммуникации между клиентами и компанией максимально простым и удобным, — комментирует Вадим Юрко, начальник управления маркетинга ОСАО «Ингосстрах», — в частности, стремимся сэкономить время страхователей, развивая и наращивая сервисную составляющую. Некоторое время реализована возможность связи с компанией через Skype. Сегодня мы запускаем новый сервис — оплату полисов через систему CONTACT, и это далеко не последний наш шаг навстречу клиентам. Мы стараемся держать руку на пульсе рынка, чтобы оперативно и качественно развивать новые страховые сервисы».

«Система CONTACT уже имеет многолетний опыт сотрудничества по оплате полисов программ страхования жизни с другой компанией группы «ИНГО» — с СК «Ингосстрах-Жизнь». Популярность у клиентов и высокий финансовый результат нашего совместного сервиса послужили основой при принятии решения о расширении партнерства, – отметила Раиса Назмутдинова, вице-президент АКБ «РУССЛАВБАНК», оператора Системы. – Принимая во внимание федеральный масштаб бизнеса ОСАО «Ингосстрах» и его лидерское положение на национальном страховом рынке, выход наших партнерских отношений на полноформатный уровень позволит в кратчайшие сроки значительно увеличить объем платежей в ее адрес».

ОСАО «Ингосстрах» работает на международном и внутреннем рынках с 1947 года. Компания занимает лидирующие позиции среди российских страховых компаний по сумме страховых взносов по добровольному страхованию, иному, чем страхование жизни.

«Ингосстрах» имеет право осуществлять все виды страхования (с учетом специализации страховщиков), установленные ст.32.9 Закона РФ «Об организации страхового дела в Российской Федерации», а также перестраховочную деятельность. Компания присутствует в 234 населенных пунктах РФ. Представительства и дочерние компании страховщика работают в странах дальнего и ближнего зарубежья.

Система CONTACT

Платежная Система CONTACT работает с 1999 года. Оператором Системы является АКБ «РУССЛАВБАНК» (ЗАО). Генеральная лицензия Банка России №1073. Платежная Система CONTACT заложила основы формирования национального рынка денежных переводов. В настоящее время CONTACT объединяет более 900 финансовых институтов России, стран ближнего и дальнего зарубежья, которые образуют мощную разветвленную сеть – свыше 230 000 пунктов обслуживания, включая платежные терминалы, в более чем 100 странах мира. Партнерами CONTACT по платежам являются более 850 юридических лиц – коммерческих банков, торговых предприятий, страховых и туристических компаний и их агентов, интернет-провайдеров, операторов связи и др. Ежегодно услугами Системы пользуются миллионы клиентов по всему миру. В 2011 году Платежная Система CONTACT стала победителем общероссийского конкурса «МАРКА №1 В РОССИИ 2011» в категории «Денежные переводы».

Русский Банк Сбережений (ООО) — Физическим лицам

Денежные переводы

CONTACT — первая российская система международных денежных переводов и платежей физических лиц без открытия банковских счетов, созданная АКБ «РУССЛАВБАНК» (ЗАО) в 1999 году. CONTACT — первая российская система международных денежных переводов и платежей физических лиц без открытия банковских счетов, созданная АКБ «РУССЛАВБАНК» (ЗАО) в 1999 году.

Денежные переводы

Денежные переводы осуществляются по всему миру — Россия, страны СНГ, Балтии и дальнего зарубежья.

Система CONTACT позволяет отправлять рубли РФ, доллары США и ЕВРО различными способами:

Наличными средствами без открытия счета в пунктах CONTACT.

С пластиковых карт VISA и MasterCard через Интернет и с помощью мобильного телефона.

Минимальная сумма перевода не ограничена.

Максимальная сумма единоразового перевода по России — 500 000 ₽;

Максимальная сумма переводов в иностранной валюте для резидентов РФ за пределы РФ не более 5 000 $ (либо эквивалент в другой валюте по курсу ЦБ РФ) за один операционный день.

Максимальная сумма переводов для нерезидентов в страны ближнего зарубежья — 350 000 ₽, 10 000 $/€;

В страны дальнего зарубежья — иные суммы в случае их наличия по конкретным направлениям.

Доставка в течение нескольких минут время зависит от разницы часовых поясов пункта отправления и пункта получения, а также от режима работы банка-получателя.

Для получения перевода денежных средств необходимо:

предоставить в банк документ удостоверяющий личность и сообщить следующие данные:

имя, фамилия отправителя;

уникальный идентификационный код перевода;

ожидаемая сумма и валюта перевода денежных средств

Для осуществления перевода/платежа денежных средств необходимо:

предоставить в банк документ, удостоверяющий личность

сообщить сумму и валюту перевода денежных средств;

данные отправителя/плательщика перевода денежных средств;

данные получателя перевода или платежа денежных средств ;

страна/регион/город получателя перевода/платежа денежных средств;

Подробную информацию о действующих тарифах системы CONTACT можно узнать на сайте https://www.contact-sys.com/tariffs или по телефону 8 800 200 42 42 (звонок по России бесплатный).

КИВИ Банк (АО) Оператор Платежной системы CONTACT

Лицензия Банка России №2241 от 22.01.2015 г., рег. №0044 в едином реестре операторов платежных систем Банка России.

Возврат к списку

Горячая линия Contact, служба поддержки Contact, бесплатная горячая линия 8-800

При появлении первых электронных денежных средств возникла необходимость расчетов между физическими или юридическими клиентами. Таким образом в жизнь вошла платежная система Contact.

Граждане, пользующиеся данным сервисом, могут совершать денежные переводы в различных валютах – рублях, долларах, евро. Причем совсем не обязательно открывать расчетный счет в банке. Таким образом, Contact успешно работает в ста семидесяти странах.

Телефон горячей линии Contact

Любой клиент данной платежной системы имеет возможность получить ответ по горячей линии Contact, просто позвонив по номеру: 8 800 200 4242.

Операторы горячей линии, это опытные работники, которые разбираются во всех вопросах, касающихся работы данной системы. Обратившись к ним за помощью можно в самое кратчайшее время получить ответы на вопросы разной степени сложности.

Компания Contact дорожит своим имиджем и поэтому старается всегда быть максимально доступной для своих клиентов.

Поскольку платежная система Contact считается международной, то и служба оперативной связи со своими клиентами была открыта в разных странах.

Например, позвонив по телефону (495) 799-56-26 можно получить ответ круглосуточно.

Использовать горячую линию можно не только в России, но и в других странах. Вот только некоторые номера телефонов, где существует платежная система Contact и ее оперативная связь:

Позвонить из стран Узбекистана, Белоруссии и Таджикистана можно по номеру 8-10-800-2020-4242. Позвонить можно совершенно бесплатно используя стационарный телефон;
Набрать бесплатный номер 00-800-2020-4242 можно также на стационарном телефоне из Кыргызстана и Молдовы. Для пользователей мобильной связи или таксофонов из Молдовы доступны также бесплатные звонки на данный номер;
Жители Украины могут использовать как стационарные телефоны, так и таксофоны по номеру 0800-50-4242. Услуга бесплатная.

Отдельно для жителей Москвы и Московской области предусмотрен другой канал связи с горячей линией. Звонки на номер +7 (495) 981-42-55 оплачиваются по тарифам оператора вашей мобильной связи. Получить консультацию здесь можно по любым услугам, которые представляет платежная система Contact.

Другие способы связи

Кроме телефона горячей линии при необходимости можно использовать и другие методы передачи или получения информации.

Для этого существует сайт компании, где можно найти ответы на все вопросы. Адрес сайта: https://www.contact-sys.com. Там можно найти все последние новости, а также получить ответы на интересующие вопросы.

Там же можно открыть личный кабинет, если вы хотите стать партнером системы: https://www.contact-sys.com/lichnyy-kabinet.

Если у вас нет времени ждать ответа оператора горячей линии можно воспользоваться рубрикой «Часто задаваемых вопросов», которую можно найти по ссылке https://www.contact-sys.com/faq.

Как можно заметить, данная платежная система заботиться о том, чтобы клиенты сервиса получали как можно больше сведений о работе компании. Это говорит о том, что компания дорожит своим добрым именем и готова работать на благо своих клиентов еще долгое время.

Компетентность операторов и время ответа

На горячей линии сервисного центра Contact работают профессионалы своего дела. Сотрудники, которые непосредственно участвуют в рабочем процессе сервиса, готовы в любое время суток помочь вам разобраться с возникшей проблемой.

Позвонив на горячую линию не нужно будет ждать ответа долгое время. Специалисты ответят на ваши вопросы в максимально короткое время.

При выборе сотрудника на должность оператора руководство тщательно выбирает претендента, поскольку быстрый и профессиональный ответ работника способен решить очень важный вопрос. А это говорит о профессионализме всей компании.

Контактная система

: модулятор сосудистой биологии с антикоагулянтными, профибринолитическими, антиадгезивными и провоспалительными свойствами | Кровь

Система КАЛЛИКРЕИН-КИНИН была впервые признана протеолитической системой плазмы и тканей, ответственной за высвобождение вазоактивного провоспалительного медиатора брадикинина (ВК) .1 ВК, нонапептид, высвобождаемый калликреинами из кининогенов, может воспроизводить многие характеристики воспалительное состояние, такое как изменение местного кровяного давления, отек и боль, приводящие к расширению сосудов и повышенной проницаемости микрососудов.В 1975 году у трех человек был описан дефицит высокомолекулярного кининогена (HK), предшественника BK, у всех из которых было пролонгированное активированное частичное тромбопластиновое время (APTT), тест скрининга поверхностно-активированных белков свертывания крови. Поскольку ни у одного из этих людей не было геморрагического состояния, исследования калликреин-кининовой системы плазмы были сосредоточены на определении прокоагулянтных свойств HK. Фактически, уже было известно, что дефицит двух зимогенов, фактора XII и прекалликреина, необходимых для ферментативного расщепления HK, также не приводит к кровотечению.Эти белки плазмы вместе были сгруппированы как контактная система, потому что они требовали контакта с искусственными отрицательно заряженными поверхностями для активации зимогена. За последние 20 лет было показано, что эти белки мало влияют на гемостаз. Однако изучение их молекулярных, биохимических, биологических и физиологических свойств показало, что эти белки взаимодействуют с рядом физиологических и патофизиологических систем. Клонирование и определение их взаимосвязей между структурой и функцией показало новые активности этих белков, такие как ингибирование протеаз, функция антитромбина и антиадгезивные свойства.Их специфические взаимодействия с биологическими мембранами эндотелиальных клеток, тромбоцитов, нейтрофилов и моноцитов указывают на то, что сборка и активация этой системы происходит в физиологической среде, независимо от отрицательно заряженных поверхностей. Фактически, правильно сказать, что так называемая неуловимая физиологическая отрицательно заряженная поверхность для активации контактной системы на самом деле является сборкой этих белков на клеточных мембранах. In vivo отрицательно заряженная поверхность не нужна для активации.Кто-то может возразить, что термин «контактная активация» — неправильное употребление для описания этой системы. Белки системы контакта с плазмой обладают антикоагулянтной, профибринолитической, антиадгезивной и провоспалительной функциями. В этом обзоре представлен обновленный взгляд на контактную систему как на физиологический медиатор биологии сосудов и воспалительных реакций. Сначала мы рассмотрим текущие знания о структуре и функциях каждого из белков системы: HK, прекалликреина и фактора XII. Далее мы опишем, как эта система собирается на клеточных мембранах.Участие этих белков в различных биологических действиях (например, регуляция артериального давления, ингибирование активации тромбина клеток, клеточный фибринолиз и антиадгезия) затем будет охарактеризовано с точки зрения их сборки и активации на клеточных мембранах. Кроме того, мы опишем как клинические примеры, так и экспериментальные модели, в которых эта система активирована. Цель этого обзора — прояснить вклад этой системы в физиологические и патофизиологические реакции сосудистой биологии.Наконец, эта презентация укажет на возможные новые терапевтические стратегии для лечения различных заболеваний, возникающих на основе знания этой системы в физиологических и патофизиологических состояниях.

Экспрессия и регуляция генов . Две формы кининогенов плазмы, HK и низкомолекулярный кининоген (LK), являются продуктами одного гена.5,6 Этот ген соответствует 3q26-qter, местоположению гомологичного HS-гликопротеина α ₂ и гистидина. -богатый гликопротеин.7-9 Один ген кининогена из 11 экзонов, состоящих из 27 т.п.н., продуцирует уникальную мРНК для HK и LK путем альтернативного сплайсинга (рис. 1) .6 HK и LK имеют общую кодирующую область первых девяти экзонов, часть экзона 10, содержащую последовательность BK и первые 12 аминокислот после карбоксиконцевой последовательности BK. Экзон 11 кодирует уникальную легкую цепь длиной 4 кДа LK. Полный экзон 10 содержит полную кодирующую последовательность уникальной легкой цепи 56 кДа HK. Новый механизм альтернативного процессинга РНК был охарактеризован в гене кининогена крысы.10 Эффективность сплайсинга контролируется взаимодействием малых ядерных рибонуклеопротеидов U1 и малых ядерных РНК (мяРНК) U1-комплементарных повторяющихся последовательностей пре-мРНК кининогена. Размер мРНК для LK и HK составляет 1,7 и 3,5 т.п.н. соответственно.

Рис. 1.

Доменная структура кининогенов. Кининогены продуцируются одним геном с 11 экзонами (E1-E11). E1-E3 кодирует домен 1 (D1) как на HK (высокомолекулярный кининоген), так и на LK (низкомолекулярный кининоген).Части домена 1 ингибируют предсердный природный фактор. E4-E6 кодирует домен 2 (D2), который содержит папаин и уникальные ингибирующие последовательности кальпаина. E7-E9 кодирует домен 3 (D3), который имеет последовательности, ингибирующие папаин. Домен 4 (D4) кодируется частью E10; это последовательность брадикинина кининогенов и первых 12 аминокислот легких цепей HK и LK. Остальная часть E10 кодирует легкую цепь HK, которая состоит из домена 5 (D5 _H) и домена 6 (D6 _H). D5 _H представляет собой область связывания с искусственной поверхностью; D6 _H имеет области связывания прекалликреина и фактора XI.Домены 3, 4 и 5 на HK также участвуют в связывании клеток. E11 кодирует остаток уникальной легкой цепи LK (D5 _L).

Рис. 1.

Доменная структура кининогенов. Кининогены продуцируются одним геном с 11 экзонами (E1-E11). E1-E3 кодирует домен 1 (D1) как на HK (высокомолекулярный кининоген), так и на LK (низкомолекулярный кининоген). Части домена 1 ингибируют предсердный природный фактор. E4-E6 кодирует домен 2 (D2), который содержит папаин и уникальные ингибирующие последовательности кальпаина.E7-E9 кодирует домен 3 (D3), который имеет последовательности, ингибирующие папаин. Домен 4 (D4) кодируется частью E10; это последовательность брадикинина кининогенов и первых 12 аминокислот легких цепей HK и LK. Остальная часть E10 кодирует легкую цепь HK, которая состоит из домена 5 (D5 _H) и домена 6 (D6 _H). D5 _H представляет собой область связывания с искусственной поверхностью; D6 _H имеет области связывания прекалликреина и фактора XI. Домены 3, 4 и 5 на HK также участвуют в связывании клеток.E11 кодирует остаток уникальной легкой цепи LK (D5 _L).

Молекулярная основа одного из примеров гомозиготной недостаточности общего кининогена, признак Вильямса, была определена.11 Произошел переход от AC к T в нуклеотиде 587, в результате чего кодон CGA (Arg) изменился на мутацию TGA (Stop) в экзоне 5, что привело к предотвращению синтеза как HK, так и LK.11 Фенотип этого дефекта аналогичен фенотипу, наблюдаемому у крыс линии Brown-Norway, Katholiek, у которых отсутствуют кининогены плазмы, но дефект у крыс вызван единственной точечной мутацией, Ala ₁₆₃ к Thr, что приводит к нарушению секреции из печени.12 Мало что известно о том, что регулирует экспрессию генов кининогенов. У крыс овариэктомия приводит к снижению транскриптов кининогена в печени, тогда как эстрогены повышают уровни мРНК кининогена.13 Этот результат согласуется с клиническим наблюдением, что концентрация HK увеличивается во время беременности.14 Напротив, лечение прогестероном снижает экспрессию гена кининогена, что приводит к небольшому снижению уровня кининогена в плазме крови.15 Мышиные фибробласты синтезируют и секретируют кининогены в ответ на циклический АМФ, форсколин, простагландин E ₂ и фактор некроза опухоли α.15 Сходным образом, фактор некроза опухоли α, как было установлено, увеличивает экспрессию кининогена в клетках HEP G2.16 Мало что еще известно о влиянии на уровни кининогена, только потому, что этот аспект кининогенов не был широко изучен.

Химия белков и структура кининогенов . Две мРНК кининогенов кодируют два отдельных белка. LK представляет собой β-глобулин массой 66 кДа с концентрацией в плазме 160 мкг / мл (2.4 мкмоль / л) и изоэлектрическая точка 4.7.17,18 HK представляет собой α-глобулин массой 120 кДа с концентрацией в плазме 80 мкг / мл (0,67 мкмоль / л) и изоэлектрической точкой 4.3.18,19. печень является источником кДНК обоих кининогенов, 5,6 но эндотелиальные клетки пупочной вены человека содержат мРНК HK и синтезируют белок.20 Антиген кининогена также был обнаружен в тромбоцитах, гранулоцитах, клетках почечных канальцев и коже. .19-24 LK до своего клонирования был также известен как ингибитор α ₁ -цистеиновой протеазы.25 И HK, и LK состоят из шаровидных единиц. LK-гель фильтрует при 66 кДа и ведет себя как настоящий глобулярный белок; HK, хотя и 120 кДа, гелевые фильтры на 220 кД, что указывает на высокое осевое отношение. Физические доказательства того, что HK представляет собой комплекс глобулярных единиц, было получено с помощью электронно-микроскопических исследований.26 На электронной микроскопии HK представлял собой линейный массив из трех связанных централизованных глобулярных областей, два конца которых тонко соединены.26 Расщепление HK калликреиновыми отведениями плазмы. к поразительному изменению экстерьера у HK.Центральная глобулярная область отделяется после высвобождения брадикинина и перестраивается с областью, ингибирующей цистеиновые протеазы, противоположной области связывания прекалликреина. 26 Области кининогенов делятся на домены (Рис. 1). Разделение этих доменов представляет собой чувствительные к сериновой протеазе области.27-29 Как будет обсуждаться ниже, смежность определенных доменов важна для некоторых биологических функций кининогенов, таких как ингибирование кальпаина и связывание HK и LK с эндотелиальными клетками.30-32 Альтернативно протеолитическое расщепление. HK обнаруживает новую функцию, т. е. его клеточную антиадгезивную активность.33 Конечно, основная активность кининогенов, которая заключается в доставке брадикинина, — это запрограммированное разрушение белка, потому что брадикинин не активен как биологический пептид, если он не высвобождается из своего предшественника.

Доменная структура кининогенов . Кининогены представляют собой белки, состоящие из нескольких доменов, каждый из которых имеет ассоциированную активность (рис. 1). Связывание кининогена с его клеточными рецепторами способствует высвобождению брадикинина в ограниченной среде, в которой пептид может связываться с рецепторами брадикинина и влиять на местную клеточную среду.Таким образом, можно рассматривать каждую функцию доменов кининогенов как участие в активности доставки кининов целого белка. Кининогены, в общем, можно разделить на три части: тяжелая цепь, которая является общей для HK и LK, фрагмент брадикинина и легкие цепи, которые, как уже говорилось, являются уникальными для HK и LK, соответственно (рис. ). Домены с 1 по 3 составляют тяжелую цепь кининогенов. Домен 4 — это брадикининская область. Домен 5 для LK (D5 _L) представляет собой его уникальную легкую цепь длиной 4 кДа.Домены 5 и 6 HK (D5 _H или D6 _H) уникальны для этого белка и включают его легкую цепь.

Мало что известно о функции домена 1, за исключением того, что он имеет сайт связывания кальция с низким сродством, роль которого неизвестна.34 Хотя ионы кальция важны для активации форбола 12-миристат-13-ацетата LK и связывания тяжелых цепей. Что касается эндотелиальных клеток, 35 нет убедительных доказательств того, что ионы кальция участвуют в связывании HK с клетками, 31,36 вопреки работе других лабораторий.37,38 Недавние данные также показывают, что пептид из домена 1 ингибирует предсердный натурный пептид.39 Домены 2 и 3 содержат высококонсервативную аминокислотную последовательность QVVAG, обнаруженную в ингибиторах цистеиновых протеаз (рис. 2) .27 Как LK, так и HK обладают сильным действием. , прочно связывающиеся обратимые ингибиторы цистеиновых протеаз с K _i s 2 и 0,5 нмоль / л, соответственно, тромбоцитов кальпаина.18,40 Ингибирующая область кальпаина кининогенов находится исключительно в домене 2 ^{28,30, 40,41}, тогда как папаин и катепсин L эффективно ингибируются областями обоих доменов 2 и 3.27,30,42,43 Компьютерные трехмерные модели домена 2 были построены с использованием рентгеновских кристаллографических координат цистатина, который на 50% идентичен доменам 2 и 3,30. Пептиды из домена 2 HK были отобраны и окислены воздухом с образованием петли с дисульфидной связью. Пептид, содержащий Q ₁₇₀ VVAG ₁₇₄, блокировал HK-ингибирование кальпаина и, таким образом, функционировал как сайт связывания (фиг. 2). Другой пептид (C211-C229), С-конец по отношению к этому пептиду, был прямым ингибитором кальпаина (IC ₅₀ = 35 мкмоль / л).Эти две области, вероятно, образуют непрерывный сайт связывания в трехмерной структуре кининогенов (рис. 2). Третий пептид (V128-L138), N-концевой по отношению к области QVVAG, ингибировал папаин, но не кальпаин, что указывает на то, что сайты ингибирования в домене 2 для этих двух цистеиновых протеаз не идентичны (рис. 2). Напротив, для оптимального ингибирования катепсина B и H требуются три петли домена 3 (рис. 2) .43 Несмотря на то, что они являются ингибитором цистеиновых протеаз, кининогены также являются субстратами этого класса ферментов при молярном избытке фермента по отношению к ингибитору.18,44,45 Поскольку кининогены являются внеклеточными или находятся внутри гранул тромбоцитов и гранулоцитов, было неясно, как они взаимодействуют с клеточными цистеиновыми протеазами, которые, по большей части, находятся на внутренней мембране или в цитозоле (19,21,46). когда тромбоциты активируются, кальпаин перемещается к внешней мембране, в которой он может быть ингибирован плазмой или внешними α-гранулами тромбоцитов HK.45-47

Рис.2.

Строение высокомолекулярного кининогена. Диаграмма аминокислотной последовательности высокомолекулярного кининогена. Круг с тонкими вертикальными линиями представляет собой область ингибирования папаина. Круг с тонкими горизонтальными линиями представляет собой область ингибирования кальпаина. Круг со сплошным фоном представляет собой связывающий домен на клеточной поверхности. Круг с толстыми вертикальными линиями представляет перекрывающуюся активность ингибирования папаина и активность связывания с клеточной поверхностью. Круг с толстыми горизонтальными линиями представляет брадикинин.Круг с пустым фоном представляет домен связывания фактора XI. Круг с заштрихованным фоном представляет собой перекрывающийся прекалликреин и связывающий домен фактора XI.

Рис. 2.

Структура высокомолекулярного кининогена. Диаграмма аминокислотной последовательности высокомолекулярного кининогена. Круг с тонкими вертикальными линиями представляет собой область ингибирования папаина. Круг с тонкими горизонтальными линиями представляет собой область ингибирования кальпаина. Круг со сплошным фоном представляет собой связывающий домен на клеточной поверхности.Круг с толстыми вертикальными линиями представляет перекрывающуюся активность ингибирования папаина и активность связывания с клеточной поверхностью. Круг с толстыми горизонтальными линиями представляет брадикинин. Круг с пустым фоном представляет домен связывания фактора XI. Круг с заштрихованным фоном представляет собой перекрывающийся прекалликреин и связывающий домен фактора XI.

Домен 3 кининогенов выполняет другие функции.Обнаружение того, что LK и его изолированная тяжелая цепь связываются с тромбоцитами и эндотелиальными клетками, указывает на то, что на тяжелой цепи кининогенов имеется участок связывания клеток.35,48,49 Этот момент был подтвержден прямыми исследованиями с использованием изолированного и рекомбинантного домена 3, который содержал область связывания клетки тяжелой цепи на тромбоцитах50 и нейтрофилах.51 Используя компьютеризированную модель домена 3, также основанную на структуре кристаллизованного цистатина, 52 была нарисована последовательная аминокислотная структура домена 3, чтобы показать три открытых участка: дисульфидная петля, соединяющая его к домену 2 и двум шпилькам (рис. 2).Область, ингибирующая цистеинпротеазу домена 3, состоит из частей этих трех открытых петель. Используя синтетические пептиды этих открытых участков, K ₂₄₄ ICVGCPRDIP ₂₅₄ (KIC11), N ₂₇₆ ATFYFKIDNVKKARVQVVAGKKYFI ₃₀₁ (NAT26), и L _{EVYKKKYFI ₃₀₁ (NAT26), и L _{EVC 9000VPNA _{331 9000VPNA _{331 9000V27 были выполнены, чтобы определить, ингибируют ли они связывание HK с эндотелиальными клетками. KIC11, NAT26 и LDC27 ингибировали связывание биотина-HK с эндотелиальными клетками с IC ₅₀, равным 1000, 258 и 60 мкмоль / л соответственно.Минимальная последовательность в LDC27 для ингибирования связывания составляла 13 аминокислот, C ₃₃₃ NAEVYVVPWEKK ₃₄₅ (IC ₅₀ = 113 мкмоль / л) .53 Поскольку папаин блокировал связывание HK с эндотелиальными клетками, сайт ингибирования цистеиновой протеазы перекрывается с сайт связывания клетки в домене 3.53 Таким образом, последние 27 аминокислот домена 3, которые примыкают к домену 4, области брадикинина, являются сайтом связывания эндотелиальных клеток. Тромбоспондин (TSP), белок α-гранул тромбоцитов, секретируемый при стимуляции тромбоцитов, также связывается с HK как с участком тяжелой цепи, требующим ионы кальция, так и с легкой цепью, независимо от ионов кальция.54 Взаимодействие TSP с тяжелой цепью кининогенов может происходить в домене 3, перекрывающем последовательность KIC11.54}}}}

Последней функцией, приписываемой домену 3, была активность кининогенов по ингибированию α-тромбина.48,50,55 Изолированный домен 3, полученный триптическим расщеплением LK в растворе, ингибировал активацию тромбоцитов, индуцированную α-тромбином.50 Область ингибирования тромбина была не то же самое, что область связывания тромбоцитов, потому что одно моноклональное антитело (MoAb), которое не блокирует связывание клеток, нейтрализует способность HK ингибировать активацию тромбоцитов α-тромбином.50 Кроме того, область ингибирования α-тромбина на кининогенах не была одной из трех областей связывания клеток, KIC11, NAT26 или LDC27. 53,56,57 Две другие отдельные последовательности, одна из домена 3, а другая смежная с доменом 3 в домене 4, соответственно, способны ингибировать индуцированную тромбином активацию тромбоцитов с помощью различных механизмов. Kunapuli et al57 экспрессировали домен 3 в Escherichia coli , G235-M357. Рекомбинантный полипептид ингибировал индуцированную тромбином агрегацию тромбоцитов с IC ₅₀, равным 4 мкмоль / л.Следует отметить, что эта последовательность, в отличие от триптического гидролизата LK, не включает какую-либо часть домена 4. Белок, кодируемый экзоном 7, G235-Q292, показал IC ₅₀ 13,4 мкмоль / л и рекомбинантный пептид из 23 аминокислот, K270-Q292, показал IC ₅₀ 30 мкмоль / л. Наконец, синтетический гептапептид, расположенный в домене 3, L271-A277 (LNAENNA), был минимальной последовательностью для ингибирования агрегации тромбоцитов, индуцированной α-тромбином (IC ₅₀ = 65 мкмоль / л). Как будет описано ниже, эта последовательность конкурирует за связывание тромбина с тромбоцитами, имитируя последовательность GPIb на тромбоцитах за связывание тромбина.

В качестве альтернативы, Hasan et al56 указывают, что ингибирующая активность тромбина кининогенов, ранее приписываемая домену 3,50, полученному протеолитическим расщеплением, на самом деле является доменом 4 или остатком кинина, остающимся присоединенным к С-концу домена 3. В чистом виде или в плазме HK расщепляется калликреином плазмы на искусственной поверхности, брадикинин высвобождается из своего родительского белка тремя способами.58,59 Первое расщепление дает разорванный кининоген, состоящий из двух дисульфидно связанных цепей 64 и 56 кДа.Второе расщепление дает брадикинин (0,9 кДа) и промежуточный свободный от кинина белок с примерно такой же молекулярной массой, что и расщепленный HK. Третье расщепление приводит к стабильному, не содержащему кининов белку, состоящему из двух дисульфидно связанных цепей длиной 64 и 46 кДа. Однако, когда кининогены расщепляются в растворе без поверхности, эта последовательность не обязательно возникает, и брадикинин может оставаться прикрепленным к тяжелой или легкой цепи кининогенов.60 Поскольку изолированный домен 3 был получен протеолитическим расщеплением в растворе, мы исследовали оба расщепленных трипсином LK и домен 3 получены триптическим расщеплением и обнаружили, что фрагмент брадикинина остается прикрепленным к тяжелой цепи LK и изолированному домену 3.32 Затем были проведены исследования, чтобы определить, блокируют ли брадикинин, аналоги брадикинина и продукты его распада, активацию тромбоцитов, индуцированную α-тромбином. В экспериментах, которые будут описаны ниже, было показано, что все эти фрагменты домена 4 являются ингибиторами агрегации тромбоцитов, вызванной α-тромбином, предотвращая отщепление α-тромбином своего клонированного рецептора (PAR1) 56.

Конечно, домен 4, область брадикинина, имеет множество функций, приписываемых этому нанопептиду, в дополнение к его новейшей функции, ингибированию α-тромбина.56 В высвобождении брадикинина HK является лучшим субстратом для калликреина плазмы, а LK — лучшим субстратом для тканевого калликреина. Однако оба кининогена являются субстратами для обеих форм калликреина. Фактор XIIa расщепляет HK аналогично плазменному калликреину.61 Фактор XIa первоначально расщепляет HK на полосы 76 и 46 кДа. При длительном воздействии фактора XIa легкая цепь HK массой 46 кДа протеолизируется на более мелкие, неактивные фрагменты.62 Обработка LK эластазой делает белок лучшим субстратом калликреина плазмы для высвобождения брадикинина и Met-Lys-брадикинина, 63 хотя он разрушает прокоагулянтную активность HK.Катепсин D инактивирует ингибирующую активность цистеиновых протеаз кининогенов.64 Последняя функция домена 4 состоит в том, чтобы служить связывающей областью клетки.65 Карбоксиконцевая часть брадикинина и аминоконцевая часть общей легкой цепи кининогена участвуют в качестве низкоаффинных ( kd = 1 ммоль / л) сайт связывания с эндотелиальными клетками. Важность области связывания клетки с доменом 4 заключается не в ее изолированном сродстве к поверхности клетки, а в ее способности удерживать кининогены в надлежащей конформации для оптимального связывания клеток.26 Например, интактная HK связывается с эндотелиальными клетками, поддерживаемыми при 37 ° C с kd, равным 7 нмоль / л и 1 × 10 ⁷ молекул / клетку по сравнению с кининогеном, не содержащим кининов, который связывается с эндотелиальными клетками, поддерживаемыми при 4 ° C с kd составляет 30 нмоль / л и от 1 до 2,6 × 10 ⁶ молекул / клетку.31 Эти разные данные для взаимодействия интактных или свободных от кининов HK с биологическими поверхностями неудивительны, учитывая большое изменение формы HK, которое происходит, когда он вырезан на искусственной поверхности26

Легкая цепь

LK имеет размер 4 кДа и состоит из одного домена (D5 _L).Его функция неизвестна. Легкая цепь HK имеет размер 56 кДа и состоит из двух доменов: 5 (D5 _H) и 6. D5 _H служит дополнительным сайтом связывания клеток на тромбоцитах, гранулоцитах и эндотелиальных клетках35,49,51,66 Было обнаружено, что две области D5 _H участвуют в связывании клеток.67 Одна находится на аминоконцевом конце домена и состоит из последовательностей G ₄₀₂ KEQGHTRRHDWGHEKQRK ₄₂₀ (GKE19) и H ₄₂₁ NLGHGHKHERD1 (HNL21) (Рис 2).Эти пептиды ингибируют связывание биотин-HK с IC ₅₀, равным 792 и 215 мкмоль / л, соответственно.67 Другая область находится на карбоксиконцевой области D5 _H и входит в область двух перекрывающихся пептидов H ₄₇₉ KHGHGHGKHKNKGKKNGKH ₄₉₈ (HKh30) и H ₄₇₁ VLDHGHKHKHGHGHGKHKNKGKK ₄₉₄ (HVL24), которые ингибируют связывание HK с областью 0,2 мкм и 0,8 мкмоль / л, соответственно, с 0,8 мкмоль / л. нейтрофилы на D5 локализованы на h520-h558, аналогично HNL21.68 Независимо от области связывания с клеткой, D5 _H был признан искусственной областью связывания на поверхности HK.28,69,70 D5 _H богатые гистидином и глицином области обладают способностью связываться с анионными поверхностями, цинком и гепарин.69-72 Используя MoAb, который блокирует свертывание HK и связывание расщепленных HK с анионными поверхностями, 28 пептид массой 7,3 кДа был выделен на иммуноаффинной колонке, который был идентифицирован N-концевым анализом как h541-K497.72 Это Пептид из 57 аминокислот ингибировал коагулянтную активность и обладал способностью связываться с анионными поверхностями с IC ₅₀ 30 мкмоль / л.D5 _H содержит два богатых гистидином и глицином участка, один на его карбоксиконцевой стороне, который также был богат лизином (h557-K502), аналогично HKh30, а другой — на его аминоконцевой стороне (K420-h558) , аналог HNL21. Используя стратегию делеционного мутагенеза на D5 _H, было обнаружено, что область связывания анионной поверхности связана с обеими богатыми гистидин-глицином областями D5 _H .70 Любая область была способна поддерживать коагулянтную активность при условии, что она была связана с D6. .70 Этот вопрос был дополнительно изучен с использованием синтетических пептидов.67 Было обнаружено, что пептиды HKh30 и HVL24, которые являются его высокоаффинными клеточными связывающими областями на карбоксиконцевой стороне D5 _H, также ингибируют прокоагулянтную активность HK. 67 Никакие другие пептиды из D5 _H, включая HNL21, не обладают этим свойством. Кроме того, поликлональные антитела, выращенные к HKh30, способны продлевать прокоагулянтную активность HK в плазме.67 Эти данные показывают, что области связывания эндотелиальных клеток и нейтрофильных клеток, а также искусственная область связывания на поверхности HK содержатся в одной и той же высококонсервативной области Д5 _Н.Кроме того, области связывания эндотелиальных клеток и искусственной поверхности перекрываются.67 Пептид HKh30 и его родительский HK обладают дополнительной способностью взаимодействовать с белком М на Streptococcus pyogenes .73 Интересно, что сайт связывания клеток с самым высоким сродством к D5 _H оказывается сайтом связывания на искусственной поверхности. Усилия многих исследователей за последние два десятилетия по характеристике связывания HK с искусственными поверхностями указали на расположение сайта связывания клеток HK.Наконец, когда HK не содержит брадикинина, остаточный свободный от кининов кининоген обладает способностью предотвращать адгезионное взаимодействие витронектина с опухолевыми клетками, эндотелиальными клетками, тромбоцитами и моноцитами. 33 Это свойство намного слабее у интактных, непротеолизированных HK. Этот результат был предвосхищен открытием того факта, что после высвобождения брадикинина из HK полученный кининоген, не содержащий кининов, гораздо более прочно связывается с анионными поверхностями, чем нерасщепленный HK.74

Домен 6

HK имеет прекалликреин (S565-K595) и сайт связывания фактора XI (P556-M613) (рис. 2).75-77 Сродство прекалликреина к его сайту связывания на легкой цепи HK составляет около 17 нмоль / л. 78,79 Сайт связывания прекалликреина и фактора XI состоит из последовательности из 31 остатка, которая содержит преимущественно элементы β-поворота.80 Хотя было показано, что 30-аминокислотная область (S565-K595) является достаточной для связывания, более поздние исследования показывают, что укороченный на N-конце и C-конце 27-мер (W569-K595) имеет важные структурные элементы для связывания прекалликреина. Прокоагулянтная активность 81,82 HK зависит от двух активностей: (1) способности связываться с анионными поверхностями через D5 _H и (2) способности связывать прекалликреин и фактор XI с доменом 6.28 Ингибирование любого взаимодействия с MoAb, направленного на эти области, будет ингибировать прокоагулянтную активность HK.28,83,84 Домен 6 HK служит акцепторным белком для связывания фактора XI и прекалликреина с тромбоцитами, нейтрофилами и эндотелиальными клетками.37,85,86 Как будет показано ниже, связывание прекалликреина со связанными HK инициирует последовательность событий, которая приводит к активации прекалликреина на биологических поверхностях независимо от активации фактора XII.

Прекалликреин (ПК) продуцируется одним геном, который отображается на хромосоме 4.Структура гена 87 PK аналогична структуре фактора XI. 88 Его мРНК кодирует тяжелую цепь из 371 аминокислоты и легкую цепь из 248 аминокислот, которые удерживаются вместе дисульфидной связью (рис. 3) .88 Аминокислотная последовательность PK имеет 58% гомологию с фактором XI.88 Белок имеет четыре тандемных повтора в аминоконцевой части молекулы из-за связывания первого и шестого, второго и пятого, а также третьего и четвертого полуцистеиновых остатков, присутствующих в каждом повторе ( Рис 3). Такое расположение приводит к четырем группам из 90 или 91 аминокислоты, которые расположены в так называемых яблочных доменах.89,90 Те же самые структуры были описаны в факторе XI, что позволяет предположить общее событие генной дупликации предков для прекалликреина плазмы и фактора XI. 87,91

Рис. 3.

Структура прекалликреина. Буквы от A ₁ до A ₄ представляют собой яблочные домены тяжелой цепи прекалликреина. Обозначение Фактор XIIa и стрелка у аргинина ₃₇₁ представляют сайт активации фактора XIIa на прекалликреине.Гистидин ₄₁₅, аспарагиновая кислота ₄₆₄ и серин ₅₅₉ представляют собой активный каталитический центр калликреина. Круг с заштрихованным фоном представляет области, участвующие в связывании высокомолекулярного кининогена. По материалам Chung et al. 89

Рис. 3.

В плазме PK проявляется в виде дублета 85 и 88 кДа независимо от того, подвергся ли белок восстановлению.92,93 В плазме PK представляет собой быстрый γ-глобулин (изолэлектрическая точка = 8.5-9,0) с циркулирующей концентрацией в крови, оцененной от 35 до 50 мкг / мл (0,41-0,56 мкмоль / л) .94,95 Было показано, что человеческая печень является источником кДНК PK89. снижается.94 У женщин, принимающих оральные контрацептивы, уровень PK повышен, а у женщин во втором и третьем триместре беременности этого не происходит.14,94 Когда PK активируется в калликреин (α-калликреин) фактором XIIa или фактором XIIf, белок при электрофорезе в геле с восстановленным додецилсульфатом натрия (SDS) имеется две субъединицы: тяжелая цепь приблизительно 52 кДа и два варианта легкой цепи приблизительно 36 и 33 кДа.92,93 Активный центр калликреина содержится в его легкой цепи, потому что эта область включает меченный тритием диизопропилфторфосфат в ковалентной связи с серином ₅₅₉ .96 Гистидин ₄₁₅ и аспарагиновая кислота ₄₆₄ включают две другие аминокислоты, участвующие в каталитическая активность (рис. 3). Длительная инкубация калликреина с самим собой приводит к самоперевариванию его тяжелой цепи в полосы 33 и 20 кД, что видно на электрофорезе в восстановленном SDS-геле с образованием формы, называемой β-калликреином.97 Эти расщепления происходят через тандемные повторы в тяжелой цепи и приводят к белку, который расщепляет HK медленнее и не может активировать нейтрофилы или индуцировать их секрецию эластазы.97,98 Электрофорез в невосстановленном SDS-геле искусственной, отрицательно заряженной поверхностной активации плазмы. приводит к появлению калликреина в комплексе с макроглобулином α ₂ (α ₂ M) и ингибитором C1, а также к появлению фрагмента прекалликреина / калликреина массой 50 кДа, содержащего часть тяжелой цепи нативного белка.14 По крайней мере 75% PK циркулирует связанными, нековалентно, с HK.99 Области связывания на PK для HK находятся на доменах яблока 1 (F56-G86) и 4 (K266-G295) (рис. 3). 100-104 Прекалликреин области связывания для фактора XII локализованы в доменах яблока 3 и 4, но конкретная последовательность не определена.100

Превращение ПК плазмы человека in vitro в калликреин, его активную форму, катализируется активированным фактором XII на поверхности, усиленной HK, или фрагментом фактора Хагемана (βFXIIa) в жидкой фазе.96 В отсутствие фактора XII прекалликреин не активируется на искусственной поверхности. Именно из-за этого открытия эта система называется контактной системой. Одинарная связь (Arg ₃₇₁ -Ile ₃₇₂) расщепляется, образуя тяжелую цепь из 371 аминокислоты, все еще связанную с легкой цепью одним дисульфидным мостиком без изменения молекулярной массы. На поверхности эндотелиальных клеток это расщепление происходит в отсутствие фактора XII, когда PK связывается с HK.86 Легкая цепь калликреина реагирует с ингибиторами протеаз, в основном α ₂ M и ингибитором C1 (C1-INH).C1-INH образует стехиометрический комплекс 1: 1 с калликреином, 105-109, что приводит к потере протеолитической и амидолитической активности. HK защищает калликреин от ингибирования C1-INH и α ₂ M в очищенной системе, 109,110 предполагая механизм субстратной (HK) защиты фермента (калликреина) от активных сайт-направленных ингибиторов протеаз. α ₂ M ингибирует кинин-образующую активность, но лишь частично подавляет амидолитическую активность калликреина 108, образуя ковалентный комплекс.Хотя на ингибитор C1 и α ₂ M приходится равное количество ингибирования калликреина в плазме, ингибитор C1 в плазме действует быстрее, чем α ₂ M.111 Антитромбин III также ингибирует калликреин, но он действует медленно, даже в присутствие гепарина.112 В присутствии HK гепарин, который связывается с HK, 71,72 значительно ускоряет ингибирование калликреина антитромбином. Ингибитор протеина C также признан мощным ингибитором калликреина.113,114. Основными белковыми субстратами калликреина плазмы являются фактор XII, HK и проурокиназа.115 116

Фактор XII продуцируется одним геном, который отображается на хромосоме 5.117,118. Ген фактора XII имеет длину 12 т.п.н. и состоит из 13 интронов и 14 экзонов.119 Как комплементарная ДНК (кДНК), так и последовательность ДНК, фактор XII имеет множественные домены с обширной гомологией последовательностей с областями тканевого активатора плазминогена (tPA; эпидермальный фактор роста [EGF] -подобная область и область крингла) и фибронектина (фиг. 4).119-121 Ген интрона / экзона фактора XII аналогичен по организации семейству сериновых протеаз генов tPA и активатора плазминогена урокиназного типа (uPA), но отличается от большинства других генов белков свертывания крови.119 Его мРНК размером 2,4 т.п.н. одноцепочечный β-глобулин из 596 аминокислот с молекулярной массой от 80 до 90 кДа и изоэлектрической точкой от 6,1 до 6,5 (рис. 4) .122 Его концентрация в плазме оценивается в 30 мкг / мл (0,375 мкмоль / л). ; диапазон от 15 до 47 мкг / мл) .123,124 Было показано, что печень человека является источником фактора XII ДНК ¹²⁰, а культивируемые гепатоциты крысы синтезируют фактор XII.125 У людей эстрогены, вводимые женщинам в постменопаузе и беременным женщинам, повышают уровни фактора XII в плазме, и его экспрессия усиливается в изолированной печени крыс, получавших эстроген и пролактин. 126-128 Было показано, что ДНК печени крысы обладает функциональным регулятором эстрогена. Элемент, содержащийся в его 5′-нетранслируемой области, который модулируется 17β-эстрадиолом. 129 Фактор XII, содержащий домен EGF, усиливает пролиферацию клеток HepG2 и включение тимидина и лейцина, предполагая, что он является митогеном для этих клеток.130 Фактически, фактор XII через свой домен EGF функционирует как митоген и стимулирует путь передачи сигнала с помощью митоген-индуцированной протеинкиназы.131 Эта активность не зависит от протеолитической активности активированного фактора XII.

Рис. 4.

Структура фактора XII. Протеолиз аргининов 334, 343 и 353 (см. Стрелки) приводит к активации фактора XII (β-фактора XIIa). Каталитическая триада фактора XIIa состоит из гистидина ₃₉₃, аспарагиновой кислоты ₄₄₂ и серина ₅₄₄.Круг с заштрихованным фоном представляет собой искусственные поверхностные связывающие домены тяжелой цепи фактора XII. Круг с горизонтальными линиями представляет два цинк-связывающих домена фактора XII. По материалам Cool and MacGillivray.119

Рис. 4.

Фактор XII можно разделить на две области: тяжелую цепь и легкую цепь. Тяжелая цепь содержит две искусственные поверхностные связывающие области, одну на дистальном аминоконцевом конце (I1-C28), а другую на ее участке фибронектина типа I (T134-R153) (рис. 4).132,133 Недавние исследования с использованием рекомбинантных мутантов с делецией фактора XII подтвердили эти результаты, а также показали, что третья область тяжелой цепи фактора XII, на втором EGF-подобном или крингл-домене (P313-R334, L344-R353), также участвовала в искусственной поверхности. связывание (рис. 4) .134 При контакте с отрицательно заряженными поверхностями FXII автоматически активируется (твердофазная активация) .135 Как связывание с поверхностью, так и расщепление во время аутоактивации приводят к отчетливым, определенным конформационным изменениям.136 Протеиназы плазмы, включая калликреин и плазмин плазмы, активируют фактор XII (FXII) в FXIIa (αFXIIa), разрывая связь, соединяющую Arg ₃₅₃ -Val ₃₅₄, и генерируют двухцепочечную молекулу, состоящую из тяжелой цепи (353 остатка). ) и легкой цепи (243 остатка), удерживаемых вместе дисульфидной связью.120 Легкая цепь FXIIa представляет собой типичную сериновую протеиназу, содержащую канонические Asp ₄₄₂, His ₃₉₃ и Ser ₅₅₄ и является сайтом для ингибирования его основным плазменным ингибитором, C1-ингибитором.137 Фрагменты фактора Хагемана или фрагменты FXII (FXIIf, βFXIIa) (Mr = 30 кДа) продуцируются путем дальнейшего протеолитического расщепления, в результате чего образуется цепь из 243 остатков, проявляющих каталитическую активность, присоединенную к фрагменту предыдущей тяжелой цепи с помощью одинарной дисульфидной связи. Дефекты легкой цепи фактора XII приводят к нарушению ферментативной активности белка. Фактор свертывания XII в Вашингтоне, округ Колумбия, имеет замену Cys ₅₇₁ на Ser, что приводит к полной потере прокоагулянтной активности.138 Фактор XII свертывания крови Bern — это белок, который при расщеплении калликреина не может активировать фактор XI или прекалликреин. 139 Контактная активация возникает в результате активации фактора XII. Фактор XII может быть активирован при контакте с отрицательно заряженными поверхностями или добавлением протеазы, которая вызывает ферментативное расщепление. Эти два механизма были названы активацией в твердой и жидкой фазах соответственно.140

Активация фактора XII, возникающая в результате связывания с отрицательно заряженными поверхностями 140–143, называется аутоактивацией.144-149 Некоторые данные свидетельствуют о том, что связывание Zn ²⁺ с фактором XII вызывает изменение конформации, которое делает белок более восприимчивым к развитию ферментативной активности при связывании с отрицательно заряженными поверхностями. 150-152 Есть четыре сайта связывания цинка, два из которых которые были идентифицированы (h50-h54 и H78-H82) .153 Хотя существует большое количество потенциальных физиологических отрицательно заряженных поверхностей, которые in vitro могут быть связаны с аутоактивацией фактора XII, сама концепция аутоактивации никогда не была достаточно убедительным механизмом для объяснить активацию фактора XII и связанную с ним активацию контактной системы in vivo.Альтернативные механизмы были изучены для активации фактора XII in vivo. Описан активатор фактора XII эндотелиальных клеток кролика, но у человека нет соответствующего примера.154 Наши собственные исследования показывают, что инкубация зимогенного фактора XII с эндотелиальными клетками пупочной вены человека не приводит к активации человеческого фактора XII (неопубликованные данные). . Однако сборка PK, связанного с HK, на эндотелиальных клетках пупочной вены человека приводит к активации PK, независимой от фактора XII, с помощью ассоциированной с клеткой тиолпротеиназы.86 Более того, может происходить активация фактора XII этим путем. В отсутствие прекалликреина фактор XII не активируется на эндотелиальных клетках в очищенной системе или в плазме (неопубликованные данные).

Ферментативная активация фактора XII дает последовательно более мелкие белки, каждый с одним и тем же сериновым сайтом активного сайта. Активация зимогенного фактора XII калликреином плазмы, трипсином или плазмином приводит к уменьшению размера фермента, снижению его свойств связывания с поверхностью и снижению его коагулянтной активности.Существует две основные формы активированного фактора Хагемана: фактор XIIa (αXIIa), белок массой 80 кДа, состоящий из двух дисульфидно-связанных полипептидных цепей, и фактор XIIf (фрагменты фактора Хагемана, HFf, βXIIa) с массой 28-30 кДа. Фрагмент, полученный из фактора XIIa. 155-159 β-Фактор XIIa возникает в результате расщепления по аргининам 334, 343 и 353 120. Форма активированного фактора XII массой 80 кДа обладает способностью связываться с отрицательно заряженными поверхностями133, 134 и активировать фактор XI. Ферментативная форма фактора XII массой 28–30 кДа не имеет свойств связывания с поверхностью, но сохраняет способность активировать прекалликреин и C1.140,160,161

Основным ингибитором протеаз плазмы активированного фактора XIIa и XIIf является ингибитор C1, на который приходится более 90% ингибирования этих протеаз в плазме. 162–165 Ингибитор C1 связывает оба белка и необратимо инактивирует их. Когда он связан с поверхностью каолина, фактор XIIa защищен от инактивации ингибитора C1166. Антитромбин III обладает некоторой ингибирующей активностью в отношении фактора XIIa.167 168 Ингибитор активатора плазминогена-1 (PAI-1) также ингибирует фактор XIIa.169 Эндотелиальные клетки могут также продуцировать белок, который нарушает активацию фактора XII, но не его коагулянтную или амидолитическую активность после образования 170

Основным препятствием для понимания контактной системы является широко распространенное представление о том, что система не имеет биологического значения, потому что она полностью активируется на искусственных поверхностях.Хотя большинство исследований на сегодняшний день описывают активацию этой системы только на искусственных поверхностях, и было выполнено много работы по описанию физиологических, отрицательно заряженных поверхностей (например, кислых фосфолипидов, сульфата холестерина, сульфатидов, кристаллов подагры и т. Д.), Ни одно из них не было убедительным в качестве единый, объединяющий активатор этой системы in vivo. Физиологическая отрицательно заряженная поверхность для активации контактной системы на самом деле представляет собой сборку этих белков на биологических поверхностях, то есть на клеточных мембранах. В защищенной среде клеточных мембран мы теперь показали, что сборка контактных белков на мембранах эндотелиальных клеток приводит к мультибелковому комплексу, который приводит к активации прекалликреина независимо от активированного фактора XII.86 Этот механизм будет рассмотрен в следующем разделе. Подробные исследования белков контактной системы, взаимодействующих с клетками, привели к нынешней гипотезе о том, насколько эта система физиологически активна. Хотя есть некоторые индивидуальные различия между клетками, мы сначала обсудим общие особенности экспрессии контактных белков и взаимодействия с клетками внутрисосудистого компартмента.

Основным белком для сборки контактной системы на клеточных мембранах является HK.Помимо того, что они содержатся в тромбоцитах, гранулоцитах и эндотелиальных клетках, на каждой из этих клеток существуют незанятые сайты связывания для HK. ^{19-21,36-38, 45,171,172} Почему каждая из этих клеток содержит кининогены, а также имеет незанятые сайты связывания для них, неизвестно. В тромбоцитах менее 8% от общего количества HK тромбоцитов представляет собой HK, прочно связанное с мембраной тромбоцитов.19,45 При активации тромбоцитов секретируется 40% от общего количества HK тромбоцитов, а еще 40% от общего количества экспрессируется на активированной мембране тромбоцитов.45 Общий вклад тромбоцитов в содержание HK в плазме составляет всего 0,23% .19,173 Локальная концентрация HK на активированной мембране тромбоцитов или около нее может в 10 раз превышать концентрацию этого белка в плазме, поскольку тромбоциты выводят свое гранулярное содержимое посредством экзоцитоза.19,45

Большая часть ассоциированных с гранулоцитами HK, по-видимому, является экзогенной HK, прочно связанной и не подлежащей обмену с поверхностью гранулоцитов. 174 Гранулоциты обладают способностью собирать все белки контактной системы.174 Эластаза, высвобождаемая из гранулоцитов, протеолизирует связанный с клетками HK.175 Первоначальные исследования показали, что эндотелиальные клетки пупочной вены человека были способны интернализовать HK.20, 172 Однако более недавние подробные исследования показывают, что не существует механизма интернализации HK эндотелиальными клетками.31 Разница в количестве HK, связанном с мембраной эндотелиальных клеток, когда клетки поддерживаются при 4 ° C по сравнению с 37 ° C, заключается в том, что при более высокой температуре наблюдается повышенная экспрессия сайтов связывания кининогена.20,31,35,172,176

Имеются характерные особенности связывания кининогенов со всеми клетками. Во-первых, связывание кининогена с клетками имеет абсолютную потребность в Zn ²⁺ .20,21,36,38,171,172. Потребность в Zn ²⁺, вероятно, не ограничивается опосредованием связывания HK с клетками посредством его области связывания цинка домена. 5.69,72 Связывание LK с тромбоцитами и эндотелиальными клетками также имеет абсолютную потребность в Zn ²⁺.Эти данные показывают, что Zn ²⁺ необходим для экспрессии сайта связывания кининогена, предполагаемого рецептора.35,48 Хотя некоторые исследователи предположили, что кальций является кофактором связывания с эндотелиальными клетками и тромбоцитами, наши исследования показывают, что это действительно так. не влияет на связывание HK с нестимулированными тромбоцитами, эндотелиальными клетками или гранулоцитами.21,31,36 Однако кальций был необходимым условием для максимальной активации связывания LK или изолированной тяжелой цепи с эндотелиальными клетками после стимуляции сложными эфирами форбола.35 Когда HK или LK связываются с тромбоцитами, гранулоцитами или эндотелиальными клетками, аффинность связывания одинакова (Таблица 1). Поскольку аффинность связывания HK с клетками внутрисосудистого компартмента составляет от 7 до 52 нмоль / л, а концентрация HK в плазме составляет 670 нмоль / л, мы можем постулировать, что все сайты связывания кининогена во внутрисосудистом компартменте являются насыщенными in vivo. Количество сайтов связывания кининогенов на клетках внутрисосудистого компартмента варьируется в зависимости от типа клетки. Тромбоциты имеют примерно 1000 сайтов связывания на клетку; гранулоциты имеют приблизительно 50 000 сайтов на клетку; и эндотелиальные клетки имеют приблизительно 1 000 000 сайтов на клетку при охлаждении до 4 ° C и приблизительно 10 000 000 сайтов на клетку при поддержании при 37 ° C (Таблица 1).20,21,31,35,36,50

Таблица 1. Экспрессия

кининогена на клетках внутрисосудистого компартмента

Тип клеток .	кД (нмоль / л) ^* .	Количество сайтов .
Тромбоциты
¹²⁵ I-HK	15 ± 4 ^†	911 ± 239
¹²⁵ I-LK	14 ± 2
¹²⁵ I-D3	39 ± 8	1,227 ± 404
Гранулоциты
¹²⁵ I-HK	10 ± 1.3	4,8 × 10 ⁴
Эндотелиальные клетки
¹²⁵ I-HK при 4 ° C	52 ± 13	9,3 × 10 ⁵
^{125 -LK при 4 ° C}	43 ± 8	9,7 × 10 ⁵
Биотин-HK при 4 ° C	46 ± 8	2,6 × 10 ⁶
Биотин-HK при 37 ° C	7 ± 3	1.0 × 10 ⁷

Тип ячейки .	кД (нмоль / л) ^* .	Количество сайтов .
Тромбоциты
¹²⁵ I-HK	15 ± 4 ^†	911 ± 239
¹²⁵ I-LK	14 ± 2
¹²⁵ I-D3	39 ± 8	1,227 ± 404
Гранулоциты
¹²⁵ I-HK	10 ± 1.3	4,8 × 10 ⁴
Эндотелиальные клетки
¹²⁵ I-HK при 4 ° C	52 ± 13	9,3 × 10 ⁵
^{125 -LK при 4 ° C}	43 ± 8	9,7 × 10 ⁵
Биотин-HK при 4 ° C	46 ± 8	2,6 × 10 ⁶
Биотин-HK при 37 ° C	7 ± 3	1.0 × 10 ⁷

Экспрессия кининогенов на клеточных мембранах — сложный процесс. Как указано выше в предыдущих разделах, на кининогенах, по-видимому, есть несколько областей, которые позволяют им взаимодействовать с его различными клеточными рецепторами. Первой информацией об этом было открытие, что HK связывается с тромбоцитами, эндотелиальными клетками и гранулоцитами посредством участков их тяжелых и легких цепей.35,49,51,66 На самом деле HK имеет три домена, которые вписываются в предполагаемый рецептор (ы) кининогена на эндотелиальных клетках.65 Сайты взаимодействия между HK и его предполагаемым рецептором могут находиться в нескольких местах: 3 в домене 3, 1 в домене 4 , и 2 в домене 5.53,65,67. Очевидно, что последовательность пептида LDC27 из домена 3 и HKh30 из домена 5 являются областями связывания с наивысшим сродством на HK для эндотелиальных клеток.53,67 Важно понимать, что связывание даже низкоаффинная последовательность из домена 4, например, будет блокировать связывание целых HK с эндотелиальными клетками.65 Эта информация предполагает, что HK и, предположительно, LK очень плотно прилегают к своему сайту (-ам) связывания, предполагаемому рецептору (-ам). Фактически, поскольку K _i и K _d , рассчитанные на основе исследований связывания для HK, LK и всех их субъединиц, одинаковы, две цепи кининогенов не связываются с клетками оптимальным образом. .66,177 Этот вид некооперативного взаимодействия характеризуется потерей энтропии при связывании и предполагает, что весь HK изгибается, чтобы соответствовать своему сайту связывания, предполагаемому рецептору.177 В поддержку этого мнения, когда брадикинин высвобождается из HK, свободные от кининов HK связываются с эндотелиальными клетками с более низким сродством и меньшим количеством сайтов связывания.31,65 Аналогичным образом, когда LK расщепляется между доменами 1 и 2, так что существует При изменении конформации LK происходит снижение связывания LK с эндотелиальными клетками по сравнению с интактным LK.32 Эти изменения в биологии экспрессии HK на клеточных мембранах, когда брадикинин удаляется из белка, ретроспективно предсказуемы из основных конформационных изменения, которые имеют место между HK и кининогеном, не содержащим кининов, как показано в функциональных характеристиках74 в электронной микроскопии26 и документировано с помощью кругового дихроизма.178

Сайт связывания кининогена, предполагаемый рецептор на эндотелиальных клетках, по-видимому, представляет собой структуру, которая может регулироваться. Во-первых, обработка эндотелиальных клеток метаболическими ингибиторами анаэробного и аэробного метаболизма и шунт гексозо-монофосфата отменяют способность HK связываться с клетками.31 Циклогексимид не влияет на связывание HK с эндотелиальными клетками. Во-вторых, температура или последовательность брадикинина в кининогенах влияет на уровень связывания кининогена с эндотелиальными клетками.31,65 В-третьих, обработка эндотелиальных клеток брадикинином приводит к увеличению связывания HK и LK, и этот путь опосредуется протеинкиназой C и рецептором брадикинина B1 эндотелиальных клеток35. В-четвертых, тяжелая цепь и LK имеют потребность в Ca ²⁺ для форбол 12-миристат 13-ацетат 4-0-метиловый эфир активирует их сайт связывания с эндотелиальными клетками, тогда как HK не делает этого. 35 В-пятых, ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента усиливают действие брадикинина на позитивную регуляцию сайта связывания HK на эндотелиальных клетках.35 Наконец, когда HK связывается с эндотелиальными клетками, он инициирует серию событий, которые позволяют ферменту, связанному с эндотелиальными клетками или матриксом, активировать прекалликреин, связанный с HK.86 Таким образом, брадикинин активирует связывание кининогена на эндотелиальных клетках, и кининогены могут влиять на брадикинин. формирование.35,86 Эти данные показывают, что эта система жестко контролируется аутокринным образом.

Комбинированные данные, описанные выше, указывают на то, что должен быть физико-химический рецептор (ы) для кининогенов в крови и эндотелиальных клетках.Недавние данные предполагают, что ряд белков-кандидатов может быть рецептором (ами) кининогена. Исследования ингибирования антител предполагают, что Mac-1 (CD11b / 18) может быть сайтом связывания HK на гранулоцитах.51 Было показано, что фибриноген является неконкурентным ингибитором связывания HK с гранулоцитами и стимулированными АДФ тромбоцитами.175 HK может связываться непосредственно с CD11b. / 18 на гранулоцитах или может взаимодействовать с рецептором, входящим в комплекс с этим интегрином (см. Ниже). Herwald et al180 изолировали на аффинной колонке HK от EA.hy926, линия эндотелиальных клеток пупочной вены человека, 179 — белок массой 33 кДа, который был идентифицирован как gC1qR. gC1qR — это известный белок рецептора C1181, который связывает только HK и пептиды из домена 5, но не LK или связывающие пептиды из домена 3. Кроме того, его способность связывать HK не требует Zn ²⁺, хотя другие исследователи утверждают, что Zn ²⁺ требуется для блоттинга лигандов.182 Более того, только небольшая часть общего gC1qR эндотелиальных клеток обнаруживается на внешней мембране эндотелиальных клеток.183 Эти данные показывают, что gC1qR не может объяснить все характеристики рецептора кининогена. Фактор XII блокирует связывание HK с qC1qR.180 Эти данные подтверждают предыдущее открытие о том, что фактор XII частично блокирует связывание HK с эндотелиальными клетками.184 Только что описанный белок, связывающий кининоген, может составлять часть мультипротеинового рецепторного комплекса для объяснения особенностей связывания HK и LK. в клетки. Недавно были представлены предварительные доказательства того, что HKa также связывается с рецептором урокиназы на эндотелиальных клетках.185 Антитело к домену 2/3 рецептора урокиназы полностью ингибирует связывание HKa с эндотелиальными клетками, как и витронектин, лиганд этого рецепторного домена. Рецептор растворимой урокиназы заметно ингибирует связывание HKa и образует с ним цинк-зависимый комплекс в бесклеточной системе. Открытие того, что интегрины тесно связаны с рецептором урокиназы186 и могут усиливать связывание лигандов с доменом 2/3 рецептора урокиназы, может иметь отношение к взаимодействию кининогенов с нейтрофилами, которые отображают как интегрины, так и рецептор урокиназы.Недавние данные показывают, что HKa связывается непосредственно с клетками, трансфицированными Mac-1, и с очищенным Mac-1.186a. Взаимодействие рецептора урокиназы с CD11b / 18 может быть потенциальным путем, по которому связывание кининогена может передавать сигнал внутри клеток. Однако, поскольку тромбоциты не экспрессируют рецептор урокиназы, этот кандидатный сайт связывания также не может быть основным рецептором кининогена на всех клетках. Последние данные показывают, что цитокератин 1 является дополнительным сайтом связывания кининогена (HK и LK) на эндотелиальных клетках, тромбоцитах и гранулоцитах.187 Связывание кининогена с цитокератином 1 требует Zn ²⁺, и все клеточные связывающие домены кининогенов взаимодействуют с ним. gC1qR и suPAR блокируют связывание HK с цитокератином, предполагая, что эти белки участвуют в сборке нескольких белков на эндотелиальных клетках. Эти данные вместе с недавним открытием того, что цитокератин 8 является клеточным рецептором плазминогена, предполагают, что цитокератины могут представлять новый класс рецепторов презентации на клетках.188,189 Полная характеристика мультипротеинового рецепторного комплекса кининогена является следующей проблемой в этой области.

На эндотелиальных клетках и тромбоцитах связывание кининогена модулирует активацию контактной системы. Связанный с тромбоцитами и эндотелиальными клетками HK защищен от активации экзогенным плазменным калликреином.66,190 Более того, HK служит сайтом связывания или рецептором для фактора XI и прекалликреина на тромбоцитах и эндотелиальных клетках37,85,86,191 На сегодняшний день нет доказательств, указывающих на то, что Фактор XI, связанный с тромбоцитами, активируется до фактора XIa любым благоприятным образом.192 Однако прекалликреин, связанный с HK на тромбоцитах или эндотелиальных клетках, может приводить к его активации в калликреин с помощью фактора XIIa-зависимого85,193 или независимого86 механизма. Независимый от фактора XII механизм активации прекалликреина обусловлен ассоциированной с мембраной или матриксом тиолпротеазой, активность которой регулируется связыванием HK.86 Обе ситуации приводят к генерации брадикинина.86 Таким образом, сборка контактных белков клеточной мембраны посредством связывания может привести к в комплексе, который может быть активирован с помощью физиологических механизмов, что приводит к высвобождению брадикинина и кинин-зависимой активности.

В дополнение к общим характеристикам контактных белков, взаимодействующих с клетками внутрисосудистого компартмента, как описано выше, существуют также некоторые уникальные межклеточные взаимодействия. Калликреин, но не PK, является хемотактическим для нейтрофилов.194 Воздействие на нейтрофилы концентраций калликреина, способных вызывать хемотаксис, повышенный аэробный гликолиз и активность гексозо-монофосфатного шунта.194 В присутствии кальция нейтрофилы агрегируют в ответ на калликреин.195 Это взаимодействие связано со стимуляцией респираторного выброса нейтрофилов, на что указывает увеличение поглощения кислорода.195 Калликреин также побуждает нейтрофилы высвобождать эластазу нейтрофилов человека из их азурофильных гранулы 196 и нейтрофилы для производства супероксида.197

В плазме нейтрофилы человека выделяют эластазу во время свертывания крови, 198 но нейтрофилы, ресуспендированные в плазме с дефицитом PK или FXII, высвобождают менее одной трети количества эластазы, высвобождаемой в нормальной плазме человека.196 Метод кожного окна, который оценивает хемотаксис лейкоцитов in vivo в ответ на повреждение ткани или микрососудов, показывает значительное нарушение хемотаксиса у пациентов с дефицитом FXII и PK199. Этот результат предполагает, что калликреин и FXIIa важны для высвобождения эластазы. из нейтрофилов в плазме. Кроме того, калликреин индуцирует высвобождение эластазы из нейтрофилов in vitro в зависимости от концентрации, что требует присутствия как активного центра калликреина (на его легкой цепи), так и интактной тяжелой цепи.200 Требование нерасщепленной тяжелой цепи может быть объяснено потребностью в последовательностях как яблока 1, так и яблока 4 для связывания калликреина с HK на нейтрофилах.104,105 Образование калликреина, происходящее при человеческом сепсисе, экспериментальном артрите и энтероколите (см. Ниже), также будет задействовано. нейтрофилы для участия в защите организма. Также было показано, что FXIIa вызывает агрегацию нейтрофилов201 и дегрануляцию (высвобождение эластазы). FXIIf не будет стимулировать нейтрофилы, и, следовательно, требуется домен тяжелой цепи.Однако каталитическая активность FXIIa необходима, поскольку ингибиторы активного центра, D-Pro-Phe-Arg-CH ₂ Cl и ингибитор кукурузного трипсина, оба отменяют реакцию.

Фактор XIIa может уменьшать количество рецепторов FcγR1 (Ig) на моноцитах, не влияя на его сродство. Это взаимодействие требует тяжелой цепи, но, в отличие от действия FXIIa на нейтрофилы, не требует каталитического аппарата легкой цепи.202 Сайт на FXII, ответственный за подавление FcγR1, может находиться в пределах N-концевых 18 аминокислот 203, и это уменьшение может нарушать клиренс иммунных комплексов. Toossi et al204 обнаружили, что фактор XII индуцирует синтез моноцитов и секрецию интерлейкина-1 (IL-1) и IL-6. Эти исследователи обнаружили, что секреция этих интерлейкинов, стимулированная липополисахаридами, также усиливается фактором XII.

Первой и наиболее устойчивой функцией кининогенов плазмы является доставка брадикинина, мощного биологически активного пептида.1 Во многих отношениях кининогены и брадикинин, активирующий пептид из домена 4, способствуют проходимости сосудов, усилению кровотока и антитромботической / профибринолитической активности (Таблица 2). Сам по себе брадикинин является мощным стимулятором синтеза простациклина эндотелиальными клетками; ингибитор функции тромбоцитов, 205,206 образования супероксида, 207 и высвобождение тканевого активатора плазминогена; и стимулятор активации плазминогена, 208, 209 образования оксида азота, 210 и образования зависимого от эндотелиальных клеток фактора гиперполяризации гладких мышц.211 Кроме того, брадикинин, благодаря своей способности стимулировать образование NO и цГМФ в эндотелиальных клетках, обеспечивает основной стимул для предотвращения субэндотелиальной пролиферации гладких мышц212,213 В присутствии неповрежденного эндотелия кинины, по-видимому, предотвращают рост и пролиферацию гладких мышц сосудов214,215 В качестве альтернативы, когда сосуды повреждены, брадикинин стимулирует протеинкиназу C, а затем и MAP-киназы, что может привести к росту и пролиферации гладких мышц сосудов. ; в отсутствие эндотелия брадикинин стимулирует восстановление сосудов, что может привести к пролиферации гладких мышц и гипертрофии интимы.

Таблица 2. Антитромбиновая, антиадгезивная и профибринолитическая активность кининогенов

34 9033 G

Домен .	Действия .
Брадикинин	Стимулирует образование простациклина
Брадикинин	Стимулирует образование NO
Брадикинин	Стимулирует образование супероксида
		G-активатор супероксида
	Стимулирует секрецию супероксида
Предотвращает расщепление альфа-тромбином его рецептора (PAR1)
Домен 1	Ингибирует предсердный природный фактор
Домен 2	Предотвращает агрегацию тромбоцитов, связанных с кальпаином
Домен 3
Домен 3
Домен 3 связывание тромбина с тромбоцитами и эндотелиальными клетками
Домен 5	Предотвращает прилипание клеток к искусственным поверхностям
Домен 5	Вытесняет фибриноген с поверхностей и клеток
Домен 6	Рецептор прекалликреина и фактора XI на эндотелиальных клетках и нейтрофилах

34 9033 G

Домен .	Действия .
Брадикинин	Стимулирует образование простациклина
Брадикинин	Стимулирует образование NO
Брадикинин	Стимулирует образование супероксида
		G-активатор супероксида
	Стимулирует секрецию супероксида
Предотвращает расщепление альфа-тромбином его рецептора (PAR1)
Домен 1	Ингибирует предсердный природный фактор
Домен 2	Предотвращает агрегацию тромбоцитов, связанных с кальпаином
Домен 3
Домен 3
Домен 3 связывание тромбина с тромбоцитами и эндотелиальными клетками
Домен 5	Предотвращает прилипание клеток к искусственным поверхностям
Домен 5	Вытесняет фибриноген с поверхностей и клеток
Домен 6	Рецептор прекалликреина и фактора XI на эндотелиальных клетках и нейтрофилах

Брадикинин влияет на свои изменения во внутрисосудистом компартменте, связываясь по крайней мере с двумя рецепторами, рецепторами B1 и B2.218,219 Оба этих рецептора связаны с G; таким образом, связывание брадикинина стимулирует передачу клеточного сигнала. Повышенный брадикинин приводит к усилению клеточной стимуляции. Блокирование рецептора В2 антагонистом Hoe 140 (D-Arg, [Hyp ³, Thi ⁵, D-Tic ⁷, Oic ⁸] -брадикинин) у развивающихся крыс приводит к более высокому кровяному давлению, частота сердечных сокращений и вес тела выше контрольных.220 Считается, что модуляция in vivo уровней брадикинина ингибиторами ангиотензинпревращающего фермента (АПФ) является основой кардиозащитных свойств этих агентов.221 222 Ингибиторы АПФ индуцировали образование NO и простациклина в культивируемых эндотелиальных клетках крупного рогатого скота и защищали изолированное перфузируемое сердце от ишемии. 223 Действие ингибиторов АПФ на повышение уровня NO и защиту изолированного ишемизированного сердца было отменено антагонистом рецептора В2, лечением ингибитором АПФ Hoe 140.224 спонтанно Крысы с гипертонией предотвращали развитие гипертонии и гипертрофии левого желудочка, а Hoe 140 блокирует эти эффекты.225, 226 Эти данные на животных были распространены на людей, у которых ингибиторы АПФ также, как было показано, защищают от инфаркта миокарда, увеличивая кровоток миокарда и уменьшая ишемические изменения.Хотя эти кардиозащитные эффекты ингибиторов АПФ могут быть достаточно объяснены одним только действием брадикинина на сосудистую сеть, недавняя информация о том, что этот пептид и продукты его распада также являются селективными ингибиторами α-тромбина, также могут внести свой вклад (см. Ниже) 56

В дополнение к благотворному действию кининов по поддержанию проходимости сосудов было показано, что белки-предшественники брадикинина, кининогены, избирательно ингибируют индуцированную α-тромбином активацию тромбоцитов.Существует по крайней мере три механизма, с помощью которых кининогены влияют на индуцированную α-тромбином активацию тромбоцитов и эндотелиальных клеток 48,50,235 (Таблица 2). Первый механизм является косвенным, вероятно, опосредованным способностью кининогена ингибировать тромбоцитарный кальпаин. Когда α-тромбин активирует тромбоциты, кальпаин тромбоцитов, связанный с цитозольной или внутренней мембраной, перемещается на активированную поверхность тромбоцитов. 46,47 Внешний кальпаин тромбоцитов способен протеолизовать гликопротеины поверхностных мембран тромбоцитов, такие как гликопротеин Ib.236 Кальпаин тромбоцитов также протеолизирует предполагаемый рецептор АДФ тромбоцитов, который обнажает рецептор фибриногена тромбоцитов и, таким образом, способствует агрегации тромбоцитов. 235,237 Таким образом, ингибирование экстернализованного кальпаина тромбоцитов лейпептином или HK, т.е. ингибиторами кальпаинов, приводит к ингибированию α-тромбин — опосредованная агрегация тромбоцитов путем предотвращения связывания фибриногена.55,235 Эти данные были использованы для разработки группы соединений, смоделированных на основе домена 2 кининогенов, которые предотвращают агрегацию тромбоцитов, индуцированную α- и γ-тромбином, не мешая другим агонистам тромбоцитов и индуцированным тромбином внутриклеточным тромбоцитам. активация.238 Селективные ингибиторы агрегации тромбоцитов, индуцированной тромбином, могут быть разработаны путем создания пептидов, смоделированных на основе домена 2 кининогенов.

Дополнительные исследования показали, что существует больше механизмов, с помощью которых кининогены ингибируют индуцированную α-тромбином активацию тромбоцитов. Было обнаружено, что HK и LK ингибируют агрегацию и секрецию тромбоцитов, индуцированную α-тромбином. 48,56 Поскольку секреция тромбоцитов, индуцированная α-тромбином, не зависит от агрегации тромбоцитов и происходит до нее, кининогены должны препятствовать индуцированной α-тромбином активации тромбоцитов другими факторами. механизмы, чем просто ингибирование агрегации тромбоцитов, связанной с кальпаином.Было обнаружено, что 239 HK, LK и D3 неконкурентно ингибируют связывание тромбина, обработанного Phe-Pro-Arg-хлорметилкетоном, с сайтом с высоким сродством тромбоцитов и эндотелиальными клетками 31,48,50,56,240. Открытие было одним из объяснений того, как вся активация тромбоцитов α-тромбином может блокироваться белками с большой молекулярной массой, такими как HK и LK. Дополнительные исследования выявили другие механизмы торможения.

Kunapuli et al57 обнаружили, что рекомбинантный домен 3 (не содержащий остатков домена 4) ингибирует индуцированную тромбином агрегацию тромбоцитов только с вдвое меньшей аффинностью, чем очищенный HK, что указывает на то, что по крайней мере один сайт ингибирования находится в домене 3 (рис. 5) .Минимальная последовательность ингибирования α-тромбина была Leu ₂₇₁ -Ala ₂₇₇. 57 Leu ₂₇₁ -Ala ₂₇₇ не подавляла агрегацию тромбоцитов под действием АДФ или коллагена. Он не подавлял амидолитическую или свертывающую активность тромбина. Leu ₂₇₁ -Ala ₂₇₇ также не ингибировал изменение формы тромбоцитов и не подавлял агрегацию тромбоцитов SFLLRN. Bradford et al241 получили доказательства того, что Leu ₂₇₁ -Ala ₂₇₇ и K270-Q292 ингибируют индуцированную тромбином активацию тромбоцитов при низких концентрациях тромбина, ингибируя связывание тромбина с комплексом GPIb-IX-V.Кроме того, антитела к GPIbα и лиганды ингибировали связывание HK с тромбоцитами, а HK ингибировали связывание антител к GPIbα с тромбоцитами. Более того, пептиды домена 3 непосредственно ингибируют высокоаффинное связывание I-α-тромбина с тромбоцитами. Наконец, HK ингибировал связывание тромбина с фибробластами, трансфицированными GPIb-IX-V. Эти данные свидетельствуют о том, что пептиды домена 3 могут блокировать связывание α-тромбина с его высокоаффинным сайтом на GPIbα. Последовательность NAEN появляется в HK, пептидах домена 3 и лиганд-связывающем домене GPIbα.Возможно, что домен 3 HK может имитировать этот высокоаффинный сайт связывания тромбина. Эти данные не обязательно означают, что связывание тромбина с GPIbα само по себе приводит к активации тромбоцитов. Скорее, GPIbα может служить для презентации тромбина клонированному рецептору тромбина, связанному с G-белком, тем самым снижая концентрацию тромбина, необходимую для расщепления последнего рецептора. Кининогены, блокируя это взаимодействие, будут затем модулировать активацию тромбоцитов, индуцированную тромбином.

Рис.5.

Домены ингибирования тромбина кининогенов. Кружок на сплошном фоне обозначает ингибирующую активность тромбина. Круг с заштрихованным фоном представляет область связывания клеточной мембраны. Круг с диагональными линиями представляет перекрывающуюся активность ингибирования папаина и активность связывания с клеточной мембраной.

Рис. 5.

Домены ингибирования тромбина кининогенов. Кружок на сплошном фоне обозначает ингибирующую активность тромбина. Круг с заштрихованным фоном представляет область связывания клеточной мембраны.Круг с диагональными линиями представляет перекрывающуюся активность ингибирования папаина и активность связывания с клеточной мембраной.

Третий механизм ингибирования α-тромбина был описан Hasan et al.56. Кининогены и производные от него пептиды фактически ингибируют индуцированную α-тромбином активацию тромбоцитов, блокируя способность фермента расщеплять клонированный рецептор тромбина (PAR1) .56 В уже описанной выше работе очищенный домен 3, полученный в результате протеолитического расщепления, действительно имел присоединенный к нему домен 4.32,56 Было обнаружено, что пептиды из домена 4, BK и родственных последовательностей ингибируют активацию тромбоцитов, индуцированную α-тромбином (рис. 5). Хотя HK, LK и D3 с большой молекулярной массой ингибировали связывание α-тромбина с тромбоцитами, изолированный домен 4, то есть брадикинин (RPPGFSPFR) и MKRPPGFSPFRSSRIG, не ингибировал связывание.48,50,56 Эти данные показали, что действует другой механизм. эти пептиды блокируют активацию тромбоцитов, индуцированную α-тромбином. Подобно родительским белкам HK и LK, пептиды домена 4 не ингибировали способность α-тромбина расщеплять трипептидный субстрат или фибриноген сгустка, что позволяет предположить, что эти пептиды не взаимодействуют с активным сайтом α-тромбина или экзосайтом связывания аниона.31,48,50,56 Более того, как HK и LK, эти пептиды не были субстратами α-тромбина и не образовывали комплексов с α-тромбином.31,48,56 Пептиды домена 4 не блокировали АДФ-, коллаген- , или U46619-индуцированная агрегация тромбоцитов in vitro.56 Они действительно блокировали индуцированную α-тромбином мобилизацию кальция и индуцированную γ-тромбином агрегацию тромбоцитов в плазме in vitro.56 Минимальная форма домена 4, которая ингибирует индуцированную α-тромбином активацию тромбоцитов. был пептид RPPGF (рис. 5) .56 RPPGF является основным продуктом распада ангиотензин-превращающего фермента брадикинина в плазме со скоростью метаболической деградации 4.2 часа. 242 243 Механизм, с помощью которого RPPGF и родственные пептиды домена 4 ингибируют активацию тромбоцитов, индуцированную α-тромбином, уникален. RPPGF не блокирует пептид рецептора тромбина, SFLLRN, от индукции активации тромбоцитов. 56 Пептиды домена 4 предотвращают отщепление α-тромбином клонированного рецептора тромбина, чтобы инициировать процесс активации. Этот результат означает, что пептиды домена 4 фактически препятствовали α-тромбину от расщепления клонированного рецептора тромбина после аргинина ₄₁, что является критическим шагом в активации α-тромбина клеток через этот рецептор.56 Когда был получен пептид, охватывающий сайт расщепления α-тромбином на клонированном рецепторе тромбина (NATLDPRSFLLR), RPPGF и HK фактически препятствовали α-тромбину расщеплять этот пептид между аргинином и серином. 56 RPPGF специфически влиял на способность тромбина к расщепляют клонированный рецептор тромбина для активации тромбоцитов, не влияя на его прокоагулянтную активность. Эти объединенные данные показывают, что пептиды домена 4 и та же самая последовательность в кининогенах являются селективными протеолитическими ингибиторами активации тромбоцитов, индуцированной α-тромбином, будучи направленными на субстрат α-тромбина, клонированный рецептор тромбина.Соединения на основе последовательности RPPGF могут представлять новый класс ингибиторов тромбина, которые достигают селективности, будучи направленными на субстраты тромбина, а не на сам фермент.

Помимо этих уникальных механизмов ингибирования α-тромбина, контактные белки участвуют в клеточном фибринолизе. Со времени распознавания дефицита HK этому белку приписывают роль в фибринолитическом процессе, хотя конкретный физиологический механизм не был известен.2,4 Уже более 35 лет известно, что контактная активация может увеличивать общий фибринолиз плазмы. 244 Калликреин, фактор XIIa и фактор XIa расщепляют плазминоген напрямую, хотя и гораздо менее эффективно, чем tPA или uPA. 245-248 Однако брадикинин имеет был охарактеризован как мощный и селективный in vivo индуктор высвобождения активатора плазминогена тканевого типа из эндотелиальных клеток кроликов и людей.208,209 Плазменный калликреин также был охарактеризован как кинетически благоприятный активатор одноцепочечной урокиназы in vitro.116 Более поздние исследования показали, что активация одноцепочечной урокиназы калликреином может лучше всего происходить на поверхности тромбоцитов и эндотелиальных клеток.85,193,249

Эти исследования побудили нас изучить взаимосвязь сборки прекалликреина на эндотелиальных клетках и то, как он может участвовать в активации одноцепочечной урокиназы (Таблица 2) .86 Когда прекалликреин связывается с HK на эндотелиальных клетках, зимоген активируется до калликреина, как указано. за счет развития амидолитической активности, изменения структуры прекалликреина на калликреин при гель-электрофорезе и расщепления HK.86 Активация прекалликреина происходит независимо от любых активированных форм фактора XII. Активирующий прекалликреин фермент (ы) не является сериновой протеазой, а ассоциированной с мембраной или матрикс-ассоциированной тиолпротеазой.86 Активация прекалликреина эндотелиальными клетками кинетически подобна активации прекалликреина фактором XII на искусственной поверхности. Эти данные впервые показывают, что контактная сборка белка на эндотелиальных клетках приводит к активации прекалликреина в отсутствие фактора XII и искусственной поверхности.86 Эта сборка контактных белков позволяет активировать физиологический путь этой системы. Степень активации прекалликреина регулируется HK. Повышение концентрации HK активирует фермент, который активирует связанный с клетками прекалликреин. Таким образом, HK регулирует активацию прекалликреина, которая, в свою очередь, высвобождает больше брадикинина из связанных с клетками HK и удаляет HK с поверхности, чтобы замедлить активацию прекалликреина.86 В подтверждение этого механизма мы недавно показали, что пептиды, полученные из D6 HK, могут подавляют образование плазмина, препятствуя связыванию прекалликреина с HK на поверхности эндотелиальных клеток.250 Кроме того, повышенный уровень брадикинина увеличивает связывание кининогена, что снижает расщепление растворимого калликреина на HK для высвобождения большего количества брадикинина. 35 Таким образом, существует строго регулируемый путь активации прекалликреина и высвобождения брадикинина.

Путь активации прекалликреина на эндотелиальных клетках участвует в двух путях фибринолиза. Во-первых, калликреин расщепляет HK с высвобождением брадикинина, который является наиболее мощным и специфическим стимулятором высвобождения активатора плазминогена тканевого типа эндотелиальных клеток.208,209 Во-вторых, калликреин индуцирует кинетически благоприятное превращение одноцепочечной урокиназы в двухцепочечную урокиназу в среде, в которой существует конститутивная молярная избыточная секреция ингибитора активатора плазминогена эндотелиальных клеток-1,86,250. Образование двухцепочечной урокиназы приводит к 4,3- кратное увеличение активации плазминогена. Эта система активации плазминогена происходит в среде, в которой отсутствует фактор XIIa. Этот механизм активации одноцепочечной урокиназы представляет собой путь клеточного фибринолиза, который либо не зависит от активации одноцепочечной урокиназы, либо связан с ней, связанной с ее связыванием с рецептором.251 Возможное связывание HK (и, следовательно, калликреина) с доменом 2/3 рецептора урокиназы 185 на той же молекуле, что и проурокиназа, которая связывается с доменом 1 рецептора, может способствовать очень эффективному расщеплению последнего калликреином. . Кроме того, HK может конкурировать с витронектином, который также связывается с доменом 2/3 рецептора урокиназы, и замещать витронектин и связанную с ним молекулу, ингибитор-1 активатора плазминогена, тем самым усиливая фибринолиз.

Активация контактной системы считается одним из медиаторов синдрома системного воспалительного ответа (SIRS).267 Контактная активация фактора XII и прекалликреина при сепсисе приводит к расщеплениям, которые активируют их ферменты, которые быстро реагируют с C1-ингибитором с образованием комплексов фактора XIIa-C1-INH и калликреин-C1-INH (Таблица 3) .268 Результатом является истощение функционального прекалликреина и фактора XII с сохранением нормальных уровней соответствующих антигенов. Функциональный C1-ингибитор также снижается, но его антиген остается постоянным или может даже увеличиваться, что позволяет предположить, что он ведет себя как слабый реагент острой фазы.По мере снижения функционального C1-INH, α ₂ M становится более важным ингибитором калликреина и формируются комплексы α ₂ M-Kal.14 Коагулянтная активность HK и антиген снижаются параллельно.269 Парадоксально, но по неизвестным причинам функциональный фактор XI может увеличиваться 269

Исследования пациентов с грамотрицательным сепсисом показали, что функциональный фактор XII, прекалликреин и C1-INH снижены у пациентов с гипотензивной септицемией.270 У пациентов с диссеминированным внутрисосудистым свертыванием (ДВС) из-за сепсиса или виремии снижен функциональный фактор XII, прекалликреин и C1-INH, но у лиц с ДВС-синдромом, вторичным по отношению к неоплазии, не было значительных изменений в системе калликреин-кинин.270 У пациентов с послеоперационным периодом. сепсис, снижение активности прекалликреина и повышение брадикинина были связаны с положительными посевами крови и гипотонией.271 При экспериментальном заражении людей брюшным тифом у всех пациентов с брюшным тифом было выявлено снижение функционального прекалликреина и C1-INH, но соответствующие антигены остались неизменными. .272 При респираторном дистресс-синдроме у взрослых (ARDS) у пораженных пациентов были снижены уровни фактора XII и прекалликреина в плазме. 269 273 HK и активность C1-INH также снизились, но были повышены уровни антигена C1-INH. Снижение уровня прекалликреина также было зарегистрировано у пациентов с сепсисом, вызванным вирусами, грибками или риккетсиями. У пациентов с пятнистой лихорадкой Скалистых гор снизились уровни прекалликреина, но увеличились комплексы калликреин-C1-ингибитор.274 Поскольку комплексы калликреин-C1-ингибитор быстро выводятся в большинстве случаев септического шока, 275 мы разработали сэндвич-ферментный иммуноферментный анализ для α ₂ комплексов M-Kal и обнаружил, что при септической гипотензии, но не только при сепсисе, уровни α ₂ комплексов M-Kal были повышены.276

Ни одно из упомянутых выше исследований не показало, является ли активация контактной системы ранним событием или связано с такими осложнениями сепсиса, как гипотензия и полиорганная недостаточность. Чтобы ответить на этот вопрос, нормальные люди-добровольцы получили низкую дозу эндотоксина E coli (0,4 нг / кг массы тела). У этих людей развилось гриппоподобное заболевание, связанное с гипердинамическим сердечно-сосудистым состоянием, которое длилось 24 часа.277 Функциональные уровни прекалликреина были значительно ниже в группе эндотоксина по сравнению с контролем через 2 часа после инфузии и оставались низкими на протяжении остальной части экспериментального протокола через 5 и 24 часа. Концентрация комплексов α ₂ M-Kal была значительно увеличена в четыре раза в группе, получавшей эндотоксин, на 3 часа и в пять раз на 5 часов, со снижением до нормального уровня комплексов в кровотоке на 24 часа. Таким образом, низкая доза эндотоксина может вызвать длительное состояние контактной активации.

Чтобы доказать, что контактная активация связана либо с шоком, либо с ДВС-синдромом, были проведены исследования на животных (таблица 4). В установленной экспериментальной модели бактериемии у бабуинов две концентрации E coli были использованы для получения летальной и нелетальной гипотензии. В летальной группе развилась необратимая гипотензия, которая значительно коррелировала как со снижением функциональных уровней HK, так и с увеличением комплексов α ₂ M-Kal.278 В нелетальной группе наблюдалась обратимая гипотензия, менее заметное снижение HK и лишь небольшое повышение α ₂ M-Kal. 278 Необратимая гипотензия коррелировала с активацией контактной системы. Дальнейшие исследования были проведены для выяснения причин контактной активации при шоке и гипотонии. MoAb к человеческому фактору XII, который способен in vitro ингибировать коагулянтную активность фактора XII в плазме павиана на 60% и медленное расщепление кининогена в плазме павиана, активированной декстрансульфатом, вводили смертельной группе павианов за 30 минут до появления E coli .279 Хотя снижение уровня фактора V, фибриногена и тромбоцитов было одинаковым в обеих группах, а значения прекалликреина были нормальными, в группе без лечения наблюдалось заметное снижение HK, достигающее 40% от исходного уровня к 300 минутам. В группе, получавшей MoAb к фактору XII, HK оставался стабильным и был значительно выше (110% от исходного уровня) через 360 минут. Кроме того, в необработанной группе наблюдалось прогрессивное увеличение комплексов α ₂ M-Kal, которое было очень значительным и полностью блокировалось MoAb в обработанной группе.Значительное снижение среднего системного артериального давления наблюдалось в обеих группах животных между 60 и 120 минутами. График Каплана-Мейера показал, что обработанные животные выживали значительно дольше, чем необработанные животные. Ингибирование активации контактной системы с MoAb к фактору XII модулировало гипотензию.279

Таблица 4.

Экспериментальные заболевания Состояния, для которых активация контактной системы является патогенетической

9033 D

Болезнь ^4-150 .	ПК .		HK .		C1 INH .		XI (Закон) .	XII (Акт.) .	Комплексы α2M-Kal (Ант.) .	Комплексы C1 INH-Kal (Ант.) .
.	Закон. .	Ант. .	Закон. .	Ант. .	Закон. .	Ант. .	.	.	.	.
Сепсис павиана 278,279	D	—	D	—	—	—	I	—	I,
—	D	—	—	—	D	—	—	—
Энтероколит крыс 286,287	— 903 903 903 —	—	D	—	—	—

9033 D

Болезнь ^4-150 .	ПК .		HK .		C1 INH .		XI (Закон) .	XII (Акт.) .	Комплексы α2M-Kal (Ант.) .	Комплексы C1 INH-Kal (Ант.) .
.	Закон. .	Ант. .	Закон. .	Ант. .	Закон. .	Ант. .	.	.	.	.
Сепсис павиана 278,279	D	—	D	—	—	—	I	—	I,
—	D	—	—	—	D	—	—	—
Энтероколит крыс 286,287	— 903 903 903 —	—	D	—	—	—

Система контакта с плазмой, каскад протеаз на стыке воспаления, коагуляции и иммунитета

https: // doi.org / 10.1016 / j.bbamcr.2017.07.009Получить права и контент

Основные моменты

•: Контактная система представляет собой каскад прокоагулянтов и провоспалительных плазменных протеаз, управляемый активированным фактором XII (FXIIa)
• 78: Сериновая протеаза FXIIa запускает калликреиновую кининовую систему, которая генерирует воспалительный медиатор брадикинин
•: Избыточное производство брадикинина из-за нарушения регуляции FXIIa лежит в основе наследственного отека Наследственный ангионевротический отек

•: Нацеливание на FXIIa обеспечивает тромбозащиту без нарушения гемостаза с дополнительными противовоспалительными действиями

Abstract

Контактная система является мощным провоспалительным и провоспалительным средством плазмы se каскад, который инициируется связыванием («контактом») — индуцированной автоактивацией зимогена фактора XII.Образовавшаяся активная сериновая протеаза FXIIa затем расщепляет прекалликреин плазмы до калликреина, который, в свою очередь, высвобождает медиатор брадикинин из его предшественника высокомолекулярного кининогена. Брадикинин вызывает воспаление с последствиями для защиты хозяина и врожденного иммунитета. FXIIa также запускает внутренний путь коагуляции, который, как было показано, в решающей степени способствует тромбозу. Напротив , дефицит FXII ослабляет тромбоз в моделях на животных, не вызывая аномального чрезмерного кровотечения.Недавняя работа показала, что контактная система, управляемая FXIIa, является многообещающей мишенью для антикоагулянтов и противовоспалительных препаратов. Этот обзор посвящен биохимии контактной системы, ее регуляции эндогенными и экзогенными ингибиторами и роли в болезненных состояниях. Эта статья является частью специального выпуска, озаглавленного «Протеолиз как регуляторное событие в патофизиологии» под редакцией Стефана Роуз-Джона.

Ключевые слова

Протеазы

Протеазы плазмы

Коагуляция

Тромбоз

Фактор XII

Ангионевротический отек

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

Цитирование статей

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.
Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.
Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie
потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт
не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к
остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Контактная система FINRA | FINRA.org

Обзор

Система контактов FINRA (FCS) была переработана и перенесена в Контакты в шлюзе FINRA в середине июля 2021 года. Обновление включает улучшенные рабочие процессы, легкий доступ к основным контактам сотрудников FINRA и интуитивно понятный внешний вид, соответствующий шлюзу FINRA. Чтобы узнать больше о контактах FINRA Gateway, посетите нашу страницу часто задаваемых вопросов.

FCS помогает компаниям-членам сообщать в FINRA о своих ключевых контактах, что является требованием правил и подзаконных актов FINRA.Назначенные официальные контакты используются для облегчения голосования на выборах в FINRA, соблюдения различных правил и подзаконных актов, а также для улучшения взаимодействия FINRA с нашими фирмами-членами.

Правило 4517 FINRA требует, чтобы фирмы:

оперативно обновлять всю контактную информацию, требуемую FINRA, через FCS при любых существенных изменениях;
ежегодно просматривает и проверяет контактную информацию; и
незамедлительно выполнит любой запрос о предоставлении контактной информации.

Фирмы должны ежегодно проверять свою контактную информацию в течение 17 рабочих дней после окончания каждого календарного года.

Чтобы обеспечить оптимальную доставку сообщений электронной почты FINRA, добавьте наш домен в список надежных отправителей в своем почтовом приложении. Ознакомьтесь с инструкциями по добавлению нашего домена в вашу электронную почту.

Доступ к контактной системе FINRA (FCS)

У вас должно быть надлежащее право от фирмы-члена FINRA для доступа к FCS.

Если у вас возникли трудности с входом в систему FINRA, обратитесь за помощью к супер-администратору учетной записи (SAA) или администратору учетной записи (AA).Если вы являетесь SAA или AA и испытываете трудности со входом в систему, позвоните в информационный центр FINRA по телефону (301) 869-6699.

Подробности программы

Справочная информация о FCS и связанных с ней уведомлениях.

Инструкции и справка

Инструкции по доступу к FCS и ресурсам для получения дополнительной помощи.

Часто задаваемые вопросы

Ответы на распространенные вопросы о редизайне FCS и переходе в раздел «Контакты шлюза FINRA».

Гибкость контактной системы

| Samtec

Новая высокоскоростная кабельная система, обеспечивающая передачу сигналов PAM4 со скоростью 112 Гбит / с, может использоваться в приложениях средней платы, средней платы к передней панели и панели-панели. Это видео с DesignCon 2021 демонстрирует живую демонстрацию продукта с кабельной системой Samtec NovaRay®, Flyover®, работающей на …

За последние несколько месяцев мы обсудили некоторые из последних тенденций в оборонной и аэрокосмической отраслях, чтобы совпасть с публикацией в начале этого года страницы Samtec Industrial Application.В этих статьях мы рассмотрели, как технологии Samtec помогают дизайнерам, так что …

21 век — это цифровой мир. Датчики — от микрофонов до термометров — преобразуют аналоговые сигналы реального мира в цифровые. Сообщество датчиков и электроники сосредоточено на обнаружении, обработке, соединении и анализе данных, необходимых для проведения цифровых экспериментов…

Потребности медицинской профессии выходят за рамки безопасных условий операционной и больницы. Многие пациенты получают уход в других условиях — в кабинетах врачей, медицинских центрах и все чаще — на дому. Это особенно актуально для пациентов, которым требуется длительный …

Системные архитекторы и инженеры-проектировщики заинтересованы в высочайшей производительности.В этой новой демонстрации продукта PAM4 со скоростью 112 Гбит / с Samtec объединяет оценочный комплект SI для новой системы межсоединений AcceleRate®HP с испытательной микросхемой приемопередатчика Synopsys PAM4 со скоростью 112 Гбит / с. AcceleRate® …

Единое контактное лицо | Город Портленд, штат Орегон,

Городская система сообщений One Point of Contact для кемпингов города Портленда — это механизм, который члены сообщества могут использовать для сообщения о незаконных кемпингах или связанном с ними мусоре в Портленде.В следующем видео (ссылка ниже) описывается, как использовать систему для составления отчета и как программа «Чистый старт» городского и центрального городского округа реагирует на эти отчеты. Пожалуйста, нажмите на изображение ниже, чтобы воспроизвести видео.

Для членов сообщества может быть очень неприятно поднимать вопросы перед городскими властями. Не всегда понятно, как и кому составлять отчеты. Городская система оповещения о кемпингах с единым контактным лицом предназначена для упрощения процесса, предоставляя платформу для более удобного сообщения о проблемах, связанных с кемпингами.

Есть два способа сообщить о кемпинге, используя систему сообщений о кемпинге One Point of Contact. Используйте только ОДИН из следующих методов:

PDX Reporter . Пожалуйста, выберите в главном меню значок «Отчетность о кемпинге».
Позвоните 311 .

** Обратите внимание, что не все сообщения требуют немедленных действий со стороны города. Каждый сайт проверяется и анализируется. **

Независимо от того, используете ли вы PDX Reporter или звоните по номеру 311, местоположение является наиболее важной информацией, необходимой городу.

Как только отчет будет подан, будет отправлена бригада для проведения оценки на месте и сбора мусора, идентифицированного кемпером.

Нет необходимости подавать несколько отчетов об одном и том же месте за один день. Программа снижения воздействия бездомных и городских кемпингов (HUCIRP) рекомендует подавать новый отчет о том же месте один раз в неделю. Это помогает гарантировать, что персонал имеет текущую оценку местоположения, а также помогает гарантировать, что Clean Start (первый ответчик на полученные отчеты) продолжает посещать место для удаления мусора и биологически опасных материалов.

Дополнительные вопросы относительно отчетов можно отправлять по электронной почте [email protected].

Если вы сообщаете о людях, живущих в транспортном средстве, отправьте отчет в PBOT напрямую, используя их форму автоотчета о брошенных автомобилях. Эта форма также доступна через PDX Reporter.

Если вы сообщаете о преступной деятельности / поведении, сообщите эту информацию непосредственно в полицию.

Если вы хотите сообщить об экстренной ситуации, позвоните 9-1-1.

Только для СМИ:

Хизер Хафер
Сотрудник по общественной информации Управления управления и финансов
503-823-6965

Система экстренной связи | Simmons University

Simmons University имеет несколько систем для оповещения нашего сообщества о чрезвычайных ситуациях в кампусе.Университет заключает контракт с Rave на предоставление услуг экстренного оповещения. Это позволяет авторизованным пользователям отправлять немедленное уведомление всем или избранным членам сообщества Simmons, которые предоставили контактную информацию для уведомления о чрезвычайных ситуациях. Сообщения о непосредственных или потенциальных угрозах здоровью или безопасности членов сообщества можно одновременно отправлять на телефоны кампуса, сотовые телефоны (голосовые и текстовые), домашние телефоны, телефоны для экстренной связи и на несколько адресов электронной почты. Всех членов сообщества Simmons регулярно просят предоставлять обновленную контактную информацию в чрезвычайных ситуациях, чтобы они могли получать сообщения из системы уведомления о чрезвычайных ситуациях.

Обновление информации об аварийных уведомлениях

Войдите в Simmons Workday
Перейдите в раздел «Личная информация»> «Контакты для экстренных случаев»
Нажмите «Изменить», чтобы отредактировать или добавить контакт для экстренной помощи, связанный с отношениями Simmons Alert — Друзья и семья.
Вы можете указать мобильные и стационарные телефоны, а также адреса электронной почты, на которые должны приходить уведомления Simmons Alert.

Система экстренного уведомления будет активирована только для чрезвычайных ситуаций, которые представляют непосредственную угрозу для здоровья или безопасности студентов, преподавателей и сотрудников в кампусе, или когда есть событие, которое требует закрытия кампуса или ограничения доступа ( е.г., суровая погода). Система экстренного уведомления НЕ будет использоваться для отправки сообщений о преступной деятельности в этом районе, если только преступление не представляет непосредственной угрозы безопасности на территории кампуса. Тем не менее, Служба общественной безопасности Симмонса будет своевременно отправлять предупреждения о безопасности через систему электронной почты кампуса, чтобы информировать сообщество Симмонса о преступлениях, которые представляют серьезную или постоянную угрозу для сообщества. В этих предупреждениях будет подтверждена соответствующая информация, касающаяся преступления и подозреваемого, будет запрашиваться информация, которая может привести к аресту и осуждению преступника (ов), а также предоставлены советы по безопасности для сообщества Simmons.

Решение о выдаче системного сообщения о чрезвычайных ситуациях обычно принимается сопредседателями Совета по чрезвычайным ситуациям (EMC) Университета Симмонса, заместителем вице-президента по административным вопросам и деканом по вопросам студенческой жизни по согласованию с Общественной безопасностью. Несколько дополнительных старших должностных лиц администрации прошли обучение работе с системой уведомления о чрезвычайных ситуациях, чтобы они могли отправлять сообщения, если того требует чрезвычайная ситуация, в том числе регистратор, исполнительный директор по технологиям / главный информационный директор, директор по общественной безопасности и Помощник директора по общественной безопасности.Исполнительное руководство, включая президента, старшего вице-президента по финансам и администрированию

и проректора, принимает участие в решении отправить сообщение, если позволяет время. В зависимости от типа чрезвычайной ситуации служба общественной безопасности и / или члены EMC подтвердят ситуацию и определят соответствующий сегмент (-ы) сообщества кампуса, который получит уведомление. Затем будет принято решение по содержанию уведомления, и уведомление будет инициировано.

Университет Симмонса без промедления и с учетом безопасности сообщества определит содержание экстренного сообщения и запустит систему обмена экстренными сообщениями, если только выдача сообщения не будет, по мнению Департамента общественной безопасности Университета Симмонса, другие ответственные органы, компрометируют усилия по оказанию помощи жертве или по подаче жалобы, реагирования или иного смягчения чрезвычайной ситуации.